CN119403928A G蛋白偶联受体的解析方法 （花王株式会社）

2024.12.16PCT/JP2023/0210522023.06.06WO2023/243495JA2023.12.21本发明提供能够表达G蛋白偶联受体(GPCR)中，不包括嗅觉受体)的氨基酸序列中使与共有氨基酸序列不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸2该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对导出的氨所述共有氨基酸序列是根据所述比对并遵从以下的(i)～(iii)的基准确定的共有残基所构成的氨基酸序列：(i_i)当存在1种与该目标GPCR的氨基酸残基不同并且出现频率50％以上的氨基酸残(i_ii)当存在2种出现频率50％的氨基酸残基时，将该目标GPCR的氨基酸残基确定为(i_iii)该目标GPCR中存在氨基酸残基且不存在出现频率40％以上的氨基酸残基时，出现频率最高的氨基酸残基确定为共有残基，当存在2种以上出现频率最高的氨基酸残基(ii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于该目标GPCR的N末端或比其更靠C末端侧的位置的共有残基且不为蛋氨酸残基时，将比最接近N末端的位置的蛋氨酸残基所构成的共有残基更靠N末端侧的共有残基变更为没(iii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于比该目残基的位置更靠N末端侧逐一回溯氨基酸位置直至出现蛋氨酸残基，将出现频率最高的氨的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸34所述GPCR多肽由序列号108～142、144～214和275～312中的任一个所示的氨基酸1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸序列中将与序列号143所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨所述GPCR多肽由序列号143所示的氨基酸序测定通过权利要求1～7中任一项所述的方法表达的GPC在试验物质存在下，测定通过权利要求1～7中任一项所述的方法对通过权利要求1～7中任一项所述的方法表达的GPCR多肽添加试验物质和目标GPCR5对通过权利要求1～7中任一项所述的方法表达的GPCR多肽添加试验物质和目标GPCR所述GPCR多肽的应答通过以下方法测定：利用ELISA或报告基因检测的细胞内cAMP量所述改变所述GPCR多肽由以下的氨基酸序列构成，该氨基酸序列中，在基酸序列中使与共有氨基酸序列不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对导出的氨所述共有氨基酸序列是根据所述比对并遵从以下的(i)～(iii)的基准确定的共有残基所构成的氨基酸序列：(i_i)当存在1种与该目标GPCR的氨基酸残基不同并且出现频率50％以上的氨基酸残(i_ii)当存在2种出现频率50％的氨基酸残基时，将该目标GPCR的氨基酸残基确定为(i_iii)该目标GPCR中存在氨基酸残基且不存在出现频率40％以上的氨基酸残基时，出现频率最高的氨基酸残基确定为共有残基，当存在2种以上出现频率最高的氨基酸残基6(ii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于该目标GPCR的N末端或比其更靠C末端侧的位置的共有残基且不为蛋氨酸残基时，将比最接近N末端的位置的蛋氨酸残基所构成的共有残基更靠N末端侧的共有残基变更为没(iii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于比该目残基的位置更靠N末端侧逐一回溯氨基酸位置直至出现蛋氨酸残基，将出现频率最高的氨的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸所述改变GPCR多肽由序列号108～142、144～214和275～312中的任所示的氨基酸序列中将与序列号143所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基所述改变GPCR多肽由序列号143所示的氨基酸序所述多核苷酸编码权利要求15～21中任一项所述的改变GPCR多所述载体或DNA片段包含权利要求22所述7的信息能够从数据库(Gprotein_coupledreceptors(IUPHAR/BPSGuidetoPHARMACOLOGY,/GRAC/FamilyDisplayForward？[0005]作为味觉受体的TAS1R(taste1receptor)是作为在舌表达的GPCR被发现的基因氨酸受体为首的ClassC型的GPCR形成二聚体发挥功能，TAS1R也不例外。使TAS1R3与8[0006]同样作为味觉受体的TAS2R(taste2receptor)是作为在舌表达的苦味受体被发[0007]微量胺相关受体(traceamineassociatedreceptor：TAAR)是ClassA家族的[0008]Mas相关G蛋白偶联受体(Mas_relatedG_protein_coupledreceptor：Mrgpr)是清楚以何种分子为配体来识别的GPCR笼统表示为GPR(G_protein_coupledreceptor，G蛋[0016](非专利文献4)ServantG,TachdjianC,TangXQ,WernerS,ZhangF,LiX,KamdarP,PetrovicG,DitschunT,JavaA,BrustP,BruneN,DuBoisGE,ZollerM,KaranewskyDS.ProcNatlAcadSciUSA.107(109不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残[0025]该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸示的氨基酸序列中将与序列号143所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨[0032]在试验物质存在下，测定通过1)或2)所述的方法表达的GP和[0035]对通过1)或2)所述的方法表达的GPCR多肽添加试验物质和目标GPCR的配体的步[0042]对通过1)或2)所述的方法表达的GPCR多肽添加试验物质和目标GPCR的配体的步受体)的氨基酸序列中使与共有氨基酸序列不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨[0050]该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸鲜味分子或甜味分子的TAS1R(taste1receptor，味觉1受体)家族的鲜味或甜味受体和属tocompare(ktup)为2进[0071]在本说明书中，氨基酸的改变有时利用公认的IUPAC的单字母的氨基酸缩写记为[原来的氨基酸、位置、改变后的氨基酸]。例如，43位的组氨酸向精氨酸的改变表示为NucleicAcidsRes.22：4673_4680)来进行。或者，也能够使用ClustalW的修改版的ClustalW2或Clustalomega。ClustalW、ClustalW2和Clustalomega例如能够在遗传学研究所所运营的日本DNA数据银行(DDBJ[www.ddbj.nig.ac.jp/searches_j.h可以是已知该特定生物种中的目标GPCR基因的直系同源物的GPCR基因。在另外的一例中，本发明所使用的直系同源物可以是上述直系同源物之中通过系统数解析教导在种分化时GPCR的氨基酸序列和该人GPCR的特定的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列导出的共中，在目标GPCR的氨基酸序列中使与共有氨基酸序列不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基，该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对导出的氨基酸序列。猴、红疣猴(ashyredcolobuses)、安哥拉疣猴(Angolacolobuses)、石榴石疣猴(Amphibia)是指属于脊椎动物门两栖纲的生物种。作为两栖类，可以列举青蛙、蝾螈的某生物种的多个基因时，选择与目标的人GPCR基因相同性最高的该某生物种的基因即系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对并由遵从以下的(i)～(iii)的基准确定的共[0090](i_i)当存在1种与该目标GPCR的氨基酸残基不同并且出现频率50％以上的氨基[0091](i_ii)当存在2种出现频率50％的氨基酸残基时，将该目标GPCR的氨基酸残基确[0092](i_iii)该目标GPCR中存在氨基酸残基且不存在出现频率40％以上的氨基酸残基[0093](i_iv)该目标GPCR中不存在氨基酸残基且存在出现频率60％以上的氨基酸残基标GPCR的N末端或比其更靠C末端侧的位置的共有残基且不为蛋氨酸残基时，将比最接近N末端的位置的蛋氨酸残基所构成的共有残基更靠N末端侧的共有残基变更为没有共有残[0096](iii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于比共有残基的位置更靠N末端侧逐一回溯氨基酸位置直至出现蛋氨酸残基，将出现频率最高[0098]基准(i)的(i_i)是在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对的某个氨基酸位置中在目标GPCR存在氨基酸残基[0099]基准(i)的(i_ii)是在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对的某个氨基酸位置中在目标GPCR存在氨基酸残基[0100]基准(i)的(i_iii)是在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对的某个氨基酸位置中在目标GPCR存在氨基酸残[0101]基准(i)的(i_iv)是在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对的某个氨基酸位置中在目标GPCR不存在氨基酸残有氨基酸序列的全长比目标GPCR的氨基酸序列的全长在N末端侧变长10％以上时，从维持GPCR的结构的观点考虑，在该共有氨基酸序列中将相当于该目标GPCR的N末端的位置的共[0102]在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR[0103]基准(ii)是在遵从上述基准(i)在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标有残基之中位于最N末端侧的共有残基是在相当于该目标GPCR的N末端或比其靠C末端侧的近N末端的位置的蛋氨酸残基所构成的共有残基靠N末端侧的共有残基变更为没有共有残观点考虑，可以将该变更前的共有残基之中最N末端侧的共有残基变更为蛋氨酸残基所构[0104]基准(iii)是遵从上述基准(i)在目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中的目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比对的各氨基酸位置中确定共有残基时，最N末端侧的共有残基为相当于比该目标GPCR的N末端靠N末端侧的位置的共有残基并且不中所使用的GPCR多肽是由在目标GPCR的氨基酸序列中使与共有氨基酸序列不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序标GPCR的氨基酸序列和共有氨基酸序列的不同例如能够通过利用公知的算法经由氨基酸基酸序列进行比较，共有氨基酸序列与目标GPCR的氨基酸序列相比N末端更长时，在目标GPCR的氨基酸序列的N末端添加仅存在于共有氨基酸序列的N末端部即可。或者，对目标相比C末端更长时，在目标GPCR的氨基酸序列的C末端添加仅存在于共有氨基酸序列的C末全部改变为与其相当的位置的共有氨基酸序列的氨基酸残基氨基酸残基数无关，优选从目标GPCR的氨基酸序列的N末端将仅存在于目标GPCR的氨基酸仅存在于目标GPCR的氨基酸序列的C末端部作为一体缺失而基酸序列的改变的对象氨基酸位置以外的氨基酸位置包含1～数个(例如，1～10个、1～5列中，下述表1_1和1_2的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基。更优选该GPCR多肽由下述表1_1和1_2的(3)的序列号108～214和275～312中的任一个所示的氨基酸序列构成的GPCR多肽、或由下述表1_1的(3)的序列号112或113所示的氨基酸序列构成的GPCR多肽与由序列号114所示的氨基酸序列构成的GPCR[0115]在上述表1_1的No.1～4的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的是由No.1～4的(1)的犁鼻器受体的(2)的序列号1～4中的任一个所示的氨基酸序列和脊椎动物中的该犁鼻器受体的直系同源物所编码的犁鼻器受体的氨基酸序列导出的共有氨基[0116]在上述表1_1的No.5～30的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位中，在No.5的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽与在No.7的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽与在No.7的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构氨基酸序列所构成的味觉受体多肽是由No.5～30的(1)的味觉受体的(2)的序列号5～30中的任一个所示的氨基酸序列和脊椎动物中的该味觉受体的直系同源物所编码的味觉受体的氨基酸序列导出的共有氨基酸序列所构成的[0117]在上述表1_1的No.31～36的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽为微量胺相关受体胺相关受体多肽是由No.31～36的(1)的微量胺相关受体多肽的(2)的序列号31～36中的任一个所示的氨基酸序列和脊椎动物中的该微量胺相关受体多肽的直系同源物所编码的微量胺相关受体多肽的氨基酸序列导出的共有氨基酸序列所构成的共有微量胺相关受体多原样维持目标微量胺相关受体多肽的N末端结构而得到的共有氨基酸序列所构成的共有微[0118]在上述表1_1的No.37～46的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽为Mas相关G蛋白偶的Mas相关G蛋白偶联受体多肽是由No.37～46的(1)的GPCR的(2)的序列号37～46中的任一个所示的氨基酸序列和脊椎动物中的该Mas相关G蛋白偶联受体的直系同源物所编码的Mas相关G蛋白偶联受体的氨基酸序列导出的共有氨基酸序列所构成的共有Mas相关G蛋白偶联[0119]在上述表1_1和1_2的No.47～108的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽为GPR多肽。GPR多肽是由No.47～108的(1)的GPR的(2)的序列号47～107和237中的任一个所示的氨基酸序列和脊椎动物中的该GPR的直系同源物所编码的GPR的氨基酸序列导出的共有氨基酸[0120]在上述表1_2的No.109～145的(1)的GPCR的(2)的序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基的氨基酸序列所构成的GPCR多肽为犁鼻器受体多基酸序列所构成的GPCR多肽是由No.109～145的(1)的GPCR的(2)的序列号238～274中的任一个所示的氨基酸序列和脊椎动物中的该GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列体导入成为宿主的细胞、或将包含编码该多肽的多核苷酸的DNA片段导入成为宿主的细胞够功能性表达外来的GPCR的细胞即可。作为具体的细胞的例子，可以列举人胚肾细胞[0122]编码GPCR多肽的多核苷酸能够使用该技术领域公知的各种的突变导入技术来得将编码要改变的氨基酸残基的核苷酸序列改变为编码改变后的氨基酸残基的核苷酸序列[0123]向编码目标GPCR的氨基酸序列的多核苷酸导入目标突变能够使用本领域技术人员公知的各种位点特异性突变导入法来进行。位点特异性突变导入法例如能够通过反向如，Stratagene公司的QuickChangeIISite_DirectedMutagenesisKit、QuickChangeMultiSite_DirectedMuta[0124]或者，编码GPCR多肽的多核苷酸也能够通过使用人工DNA裂解酶(人工DNA核酸酶Database[0127]所得到的编码GPCR多肽的多核苷酸能够插入载体或DNA片段中。优选该载体为表[0128]该载体优选包含编码GPCR多肽的多核苷酸、和能够工作地与其连结的控制区该控制区域是用于在导入了该载体的宿主细胞内使所导入的编码GPCR多肽的多核苷酸表[0129]作为含有编码GPCR多肽的多核苷酸的DNA片段的例子，可以列举PCR扩增DNA片段一起对细胞导入编码REEP(受体表达增强蛋白，receptorexpressionenhancing因或者REEP基因的载体和编码GPCR多肽的多核苷酸的载体分别导入宿主细胞。作为RTP的例子，可以列举RTP1S、RTP3和RTP4，作为RTP1S的例子，可以列举人RTP1S。人RTP1S在[0131]关于对宿主细胞导入载体或DNA片段，对于哺乳动物细胞，能够使用通常的转化[0132]从通过上述步骤导入了细胞内的载体或DNA片段所包含的本发明的编码GPCR多肽表达该GPCR多肽的方式在进行了遗传操作的转化细胞[0133]本发明的GPCR多肽的细胞膜表达(量)例如能够通过在该GPCR多肽预先融合FLAG[0135]本发明的应答测定方法中所使用的GPCR多肽只要是通过本发明的表达方法表达号108～214和275～312中的任一个所示的氨基酸序列构成的GPCR多肽、或由序列号112或113所示的氨基酸序列构成的GPCR多肽与由序列号114所示的氨基酸序列构成的GPCR多肽白α亚基或者分类为Gi家族的G蛋白α亚基共轭而使腺苷酸环化酶活化或者抑制，使细胞内化跨膜传导调节因子CFTR的细胞膜内外的电位变化。通过利用容易与目标GPCR共轭的G蛋活化的味觉受体的信号作为本来的细胞内cAMP量不降低而细胞内钙离子浓度的上升检测[0138]本发明的配体探索方法中所使用的试验物质只要是期望确认是否为目标GPCR的[0143]优选GPCR多肽对于试验物质的应答通过将添加了试验物质的GPCR多肽(试验组)施方式中，试验物质的存在下的GPCR多肽的应答强度与试验物质不存在下相比，优选为[0146]本发明的控制剂的评价和/或选择为生物体外(invitro)或活体外(exvivo)进[0147]本发明的控制剂的评价和/或选择方法中使用的试验物质只要是期望作为靶标的[0148]关于本发明的控制剂的评价和/或选择方法中所使用的GPCR多肽及其形态，与本[0149]在本发明的控制剂的评价和/或选择方法中，对通过本发明的表达方法表达的GPCR多肽应用试验物质和靶标的配体。作为对GPCR多肽应用试验物质和靶标的配体的方[0150]在本发明的控制剂的评价和/或选择方法中，在对GPCR多肽添加试验物质和靶标细胞等。优选本发明的抑制剂的评价和/或选择方法包括在试验物质的存在下和不存在下验组中的该GPCR多肽的应答与对照组相比优选增强为120％以上、更优选增强为150％以[0155]在本发明的控制剂的评价和/或选择方法的一个实施方式中，GPCR多肽是通过本方法的另外的一个实施方式中，GPCR多肽是通过本发明的表达方法表达的鲜味受体多肽的一个实施方式中，GPCR多肽是通过本发明的表达方法表达的甜味受体多肽(共有TAS1R2或选择为配体识别的控制剂。在本发明的控制剂的评价和/或选择方法的另外的一个实施的识别的控制剂。通过本发明的控制剂的评价和/或选择方法被选择为靶标的配体的识别剂的评价和/或选择方法选择的物质可以在用于控制该配体的识别的化合物或组合物中作评价和/或选择方法选择的物质能够用于该配体的识别的控制剂的制造、或用于控制该配[0164]优选GPCR多肽对于试验物质的应答通过将添加了试验物质的GPCR多肽(试验组)在优选的实施方式中，试验物质的存在下的GPCR多肽的应答强度与试验物质不存在下相评价方法的另外的一个实施方式中GPCR多肽是通过本发明的表达方法表达的苦味受体多作为该GPCR多肽，能够使用微量胺相关受体多肽评价和/或选择抑制原始的GPCR中的配体抑制剂的评价和/或选择方法，能够高效地评价或选择能够选择性抑制靶标的配体的气味[0169]本发明的气味抑制剂的评价和/或选择为生物体外(invitro)或活体外(ex[0170]本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法中所使用的试验物质只要是期望作为[0171]关于本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法中所使用的GPCR多肽及其形态，[0172]在本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法中，对通过本发明的表达方法表达[0173]在本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法中，在对GPCR多肽添加试验物质的[0174]在第一实施方式中，本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法包括对通过本发的作用例如通过将添加了试验物质的GPCR多肽(试验组)的应答与对照组中的该GPCR多肽制剂的评价和/或选择方法包括在试验物质的存在下和不存在下测定该嗅GPCR多肽对该配优选抑制为25％以下时，能够将该试验物质确定为抑制该GPCR多肽对该配体的应答的物[0177]在第二实施方式中，本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法包括对通过本发[0179]试验物质对该GPCR多肽的作用例如能够通过将添加了试验物质的该GPCR多肽(试优选该第二实施方式中的本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法包括在试验物质的存抑制剂的评价和/或选择方法包括在试验物质的存在下测定表达该GPCR多肽的细胞和未表一步优选增强为200％以上时，能够将该试验物质确定为抑制该GPCR多肽对该配体的应答[0181]通过上述的步骤确定的试验物质是通过抑制GPCR对靶标的配体的应答而能够抑该配体的气味的抑制剂。通过本发明的气味抑制剂的评价和/或选择方法选择为靶标的配制剂的评价和/或选择方法选择的物质能够在用于抑制该配体的气味的化合物或组合物中制剂的评价和/或选择方法选择的物质能够用于该配体的气味的抑制剂的制造、或用于抑不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残[0186]该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比不同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残[0190]该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比[0194](i_i)当存在1种与该目标GPCR的氨基酸残基不同并且出现频率50％以上的氨基[0195](i_ii)当存在2种出现频率50％的氨基酸残基时，将该目标GPCR的氨基酸残基确[0196](i_iii)该目标GPCR中存在氨基酸残基且不存在出现频率40％以上的氨基酸残基[0197](i_iv)该目标GPCR中不存在氨基酸残基且存在出现频率60％以上的氨基酸残基标GPCR的N末端或比其更靠C末端侧的位置的共有残基且不为蛋氨酸残基时，将比最接近N末端的位置的蛋氨酸残基所构成的共有残基更靠N末端侧的共有残基变更为没有共有残[0200](iii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于比共有残基的位置更靠N末端侧逐一回溯氨基酸位置直至出现蛋氨酸残基，将出现频率最高列与上述脊椎动物中的该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR中至少2种、优选至少为5列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸示的氨基酸序列中将与序列号143所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基，优选由序列号143所示的氨基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸示的氨基酸序列中将与序列号143所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残基，优选由序列号143所示的氨基述试验物质的上述GPCR多肽对上述配体的应GPCR多肽对上述配体的应答较没有添加该试验物质的该GPCR多肽对该配体的应答被抑制物质的上述GPCR多肽对上述配体的应答较没有添加该试验物质的该GPCR多肽对该配体的应答增加至没有添加该试验物质的该GPCR多肽的应答的120％以上的试验物质评价为呈现应答与没有添加该试验物质的该GPCR多肽的应答相比在统计学上显著增加的试验物质评述试验物质的上述GPCR多肽对上述配体的应GPCR多肽对上述配体的应答较没有添加该试验物质的该GPCR多肽对该配体的应答被抑制同的氨基酸残基中的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸残[0261]该共有氨基酸序列是由该目标GPCR的氨基酸序列和脊椎动物中该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR的氨基酸序列的比[0264]上述共有氨基酸序列是根据上述比对并遵从以下的(i)～(iii)的基准确定的共[0266](i_i)当存在1种与该目标GPCR的氨基酸残基不同并且出现频率50％以上的氨基[0267](i_ii)当存在2种出现频率50％的氨基酸残基时，将该目标GPCR的氨基酸残基确[0268](i_iii)该目标GPCR中存在氨基酸残基且不存在出现频率40％以上的氨基酸残基[0269](i_iv)该目标GPCR中不存在氨基酸残基且存在出现频率60％以上的氨基酸残基标GPCR的N末端或比其更靠C末端侧的位置的共有残基且不为蛋氨酸残基时，将比最接近N末端的位置的蛋氨酸残基所构成的共有残基更靠N末端侧的共有残基变更为没有共有残[0272](iii)遵从上述(i)的基准确定共有残基时，当最N末端侧的共有残基为相当于比共有残基的位置更靠N末端侧逐一回溯氨基酸位置直至出现蛋氨酸残基，将出现频率最高GPCR的氨基酸序列与上述脊椎动物中的该目标GPCR的直系同源物所编码的GPCR中至少2进一步优选至少为100种的GPCR的氨基酸序列号所示的氨基酸序列中将与(3)的序列号所示的共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列不同的氨基酸残基的至少1个改变为在与其相当的位置的该共有氨基酸序列的氨基酸[0289]在设计共有嗅觉受体时，目标嗅觉受体基因的相同基因候补的检索使用NCBI检索得到的相同性上位的基因将具有与目标受体相同名称的基因选择为为查询(query)序列，从利用BLAST检索得到的相同性上位的250个基因之中确定名称中包时，所确定的直系同源物为灵长目的直系同源物和灵长目以外的目的哺乳类的直系同源询(query)序列，进行BLAST检索，确定相同性上位的250个基因的之中名称中包含犁鼻器因确定为直系同源物。对于在这些7个基因加上人VN1R1合计8个基因的氨基酸序列如下所包含TAS1R1的249个基因确定为直系同源物。对于这些249个基因加上人TAS1R1合计250个的氨基酸序列如下所述进行比对解析和共有氨基酸的确定。对于人TAS2R16、TAS2R38、所确定的直系同源物为灵长目的直系同源物和灵长目以外的目的哺乳类的直系[0295]例如为人Mas相关G蛋白偶联受体的MrgprE时，将人Mrgp氨基酸序列设为查询(query)序列，从利用BLAST检索得到的相同性上位的250个基因之中[0296]例如，为人GPR的GPR3时，将人GPR3(NP005272.1)的氨基酸序列设为查询(query)序列，从利用BLAST检索得到的相同性上位的250个基因之中确定名称中包含GPR3的234个基因作为直系同源物。对于这些234个基因加上人GPR3合计235个基因的氨基酸序列如下所述进行比对解析和共有氨基酸的确定。对于表4中所述的GPR3、GPR17、GPR31、定名称中包含作为直系同源物已知的“uracilnucleotide/cysteinylleukotrieneGPR31时，确定名称中包含“12_(S)_hydroxy_5,8,10,14_eicosatetraenoicacid直系同源物，在人GPR65时，确定名称中包含“psychosine设为查询(query)序列，从利用BLAST检索得到的相同性上位的250个基因之中确定名称中包含ADGRB1的234个基因作为直系同源物。对于这些234个基因加上人ADGRB1合计235个基因的氨基酸序列如下所述进行比对解析和共有氨基酸的确定。对于人ADGRB2、ADGRB3和作为直系同源物。另外，在人ADGRC1时，确定名称中包含“EGFLAGseven_passG_typereceptor1(EGFLAG七次跨膜G_typereceptor2(钙粘蛋白EGFLAG七次跨膜G型受体2)”的基因作为直系同源物，在人ADGRC3时，确定名称中包含“cadherinEGFLAGseven_passG_ty白EGFLAG七次跨膜G型受体3)”的基因作为直系同源物，在人ADGRD2时，确定名称中包含名称中包含“adhesionGprotein_coupledreceptorE1(粘附性G蛋白偶联受体E1)”或“adhesionGprotein_coupledreceptorE1isoform2precursor(粘附性G蛋白偶联受体E1同型2前体)”的基因作为直系同源物，在人ADGRE2时，确定名称中包含“adhesionGprotein_coupledreceptorE2(粘附性G蛋白偶联受体E2)”的基因作为直系同源物，在人ADGRE3时，确定名称中包含“adhesionGprotein_coupledreceptorE3(粘附性G蛋白偶联受体E3)”的基因作为直系同源物，在人ADGRE5时，确定名称中包含“adhesionGprotein_coupledreceptorE5(粘附性G蛋白偶联受体E5)”或“CD97antigen(CD97抗原)”附性G蛋白偶联受体F1)”或“adhesionG_proteincoupledreceptorF1isoform确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledreceptorF3(粘附性G蛋白偶联受体F3)”ADGRF4时，确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledreceptorF4(粘附性G蛋白偶因作为直系同源物，在人ADGRG1时，确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledADGRG2时，确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledreceptorG2(粘附性G蛋白偶作为直系同源物，在人ADGRG5时，确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledreceptorG5(粘附性G蛋白偶联受体G5)”或“G_proteincoupledreceptor114(G蛋白偶联受体114)”的基因作为直系同源物，在人ADGRG6时，确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledreceptorG6(粘附性G蛋白偶联受体G6)”或“G_proteincoupledG_proteincoupledreceptorG7isoform2precursor(粘附性G蛋白偶联受体G7同型2前体)”的基因作为直系同源物，在人ADGRL1时，确定名称中包含“adhesionGprotein_coupledreceptorL1(粘附性G蛋白偶联受体L1)”或“adhesionGprotein_coupledreceptorL1isoform1precursor(粘附性G蛋白偶联受体L1同型1前体)”的基因作为直系protein(包含蜘蛛毒素和七次跨膜结构域的蛋白)”的基因作为直系同源物，在人ADGRL3时，确定名称中包含“adhesionG_proteincoupledreceptorL3(粘附性G蛋白偶联受体包含“adhesionG_proteincoupledreceptorL4(粘附性G蛋白偶联受体L4)”或“proteinase_activatedreceptor2(蛋白酶活化受体2)”的基因作为直系同源物，在人GRM5时，确定名称中包含“metabotropicglutamatereceptor5(代谢性谷氨酸盐受体5)”的基因作为直系同源物，在人APLNR时，确定名称中包含“apelinreceptor(爱帕琳肽受中包含“glucagon_likepeptide2receptor(胰高血糖素样肽2受体)”的基因作为直系同质素4受体)”的基因作为直系同源物，在人CCR6时，确定名称中包含“C_Cchemokine参考基因1微量胺相关受体1(traceamine_associatedreceptor1)[智人(Homosapiens)]2微量胺相关受体1[倭黑猩猩(Panpaniscus)]3微量胺相关受体1[黑猩猩(Pantroglodytes)]4微量胺相关受体1[大猩猩(Gorillagorillagorilla)]5微量胺相关受体1[银白长臂猿(Hylobatesmoloch]6微量胺相关受体1[猕猴(Macacamulatta)]7预测:微量胺相关受体1[白枕白眉猴(Cercocebusatys)]8微量胺相关受体1[南方豚尾猕猴(Macacanemestrina)]9微量胺相关受体1[苏门答腊猩猩(Pongoabelii)]微量胺相关受体1[绿猴(Chlorocebussabaeus)]预测:微量胺相关受体1[鬼狒(Mandrillusleucophaeus)]微量胺相关受体1[狮尾狒(Theropithecusgelada)]预测:微量胺相关受体1[安哥拉疣猴(Colobusangolensispalliates)]微量胺相关受体1[东非狒狒(Papioanubis)]微量胺相关受体1[白颊长臂猿(Nomascusleucogenys)]微量胺相关受体1[黑叶猴(Trachypithecusfrancoisi)]微量胺相关受体1[秘鲁夜猴(Aotusnancymaae)]微量胺相关受体1[川金丝猴(Rhinopithecusroxellana)]低质量蛋白质:微量胺相关受体1样(traceamine_associatedreceptor1样)[乌干达红疣猴(Piliocolobustephrosceles)]预测:微量胺相关受体1[滇金丝猴(Rhinopithecusbieti)]微量胺相关受体1[黑帽悬猴(Sapajusapella)]微量胺相关受体1[巴拿马卷尾猴(Cebusimitator)]微量胺相关受体1[普通狨(Callithrixjacchus)]微量胺相关受体1[玻利维亚松鼠猴(Saimiriboliviensisboliviensis)]微量胺相关受体1[眼镜猴(Carlitosyrichta)]微量胺相关受体1[蓝鲸(Balaenopteramusculus)]微量胺相关受体1[小鰛鲸(Balaenopteraacutorostratascammoni)]微量胺相关受体1[非洲草原象(Loxodontaafricana)]微量胺相关受体1[抹香鲸(Physetercatodon)]微量胺相关受体1[虎鲸(Orcinusorca)]预测:微量胺相关受体1[白鳍豚(Lipotesvexillifer)]微量胺相关受体1同型X2(isoformX2)[小头鼠海豚(Phocoenasinus)]微量胺相关受体1[长肢领航鲸(Globicephalamelas)]微量胺相关受体1[宽吻海豚(Tursiopstruncatus)]微量胺相关受体1[一角鲸(Monodonmonoceros)]预测:微量胺相关受体1[大马蹄蝠(Hipposiderosarmiger)]微量胺相关受体1[马铁菊头蝠(Rhinolophusferrumequinum)]微量胺相关受体1同型X2[长江江豚(Neophocaenaasiaeorientalisasiaeorientalis)]微量胺相关受体1[太平洋短吻海豚(Lagenorhynchusobliquidens)]40微量胺相关受体1同型X1[白鲸(Delphinapterusleucas)]41微量胺相关受体1[大鼠耳蝠(Myotismyotis)]42微量胺相关受体1[灰鼠狐猴(Microcebusmurinus)]43微量胺相关受体1[獒蝠(Molossusmolossus)]44预测:微量胺相关受体1[克氏冕狐猴(Propithecuscoquereli)]45微量胺相关受体1[大狐蝠(Pteropusvampyrus)]46微量胺相关受体1[安哥拉犬吻蝠(Pteropusalecto)]47微量胺相关受体1[小耳大婴猴(Otolemurgarnettii)]48低质量蛋白质:微量胺相关受体1[(Susscrofa)]49微量胺相关受体1[圆头叶蝠(Desmodusrotundus)]微量胺相关受体1[苍白矛吻蝠(Phyllostomusdiscolor)]微量胺相关受体1[大棕蝠(Eptesicusfuscus)]微量胺相关受体1[北美水獭(Lontracanadensis)]微量胺相关受体1[树鼩(Tupaiachinensis)]微量胺相关受体1[灰熊(Ursusarctoshorribilis)]微量胺相关受体1[九带犰狳(Dasypusnovemcinctus)]微量胺相关受体1[大熊猫(Ailuropodamelanoleuca)]微量胺相关受体1[肯尼亚海獭(Enhydralutriskenyoni)]微量胺相关受体1[西印度海牛(Trichechusmanatuslatirostris)]微量胺相关受体1[小棕蝠(Myotislucifugus)]预测:微量胺相关受体1[布氏鼠耳蝠(Myotisbrandtii)]预测:微量胺相关受体1[纳塔尔长指蝙蝠(Miniopterusnatalensis)]微量胺相关受体1[白鼬(Mustelaerminea)]微量胺相关受体1[羊驼(Vicugnapacos)]微量胺相关受体1[加利福尼亚海狮(Zalophuscalifornianus)]预测:微量胺相关受体1[林鼬(Mustelaputoriusfuro)]参考基因微量胺相关受体1[牙买加果蝠(Artibeusjamaicensis)]微量胺相关受体1[中华穿山甲(Manispentadactyla)]预测:微量胺相关受体1[普氏野马(Equusprzewalskii)]预测:微量胺相关受体1[海象(Odobenusrosmarusdivergens)]微量胺相关受体1[象海豹(Miroungaleonina)]微量胺相关受体1[古氏伏翼(Pipistrelluskuhlii)]微量胺相关受体1[埃及果蝠(Rousettusaegyptiacus)]微量胺相关受体1[威德尔海豹(Leptonychotesweddellii)]微量胺相关受体1[马来亚穿山甲(Manisjavanica)]微量胺相关受体1[二趾树懒(Choloepusdidactylus)]微量胺相关受体1[北海狗(Callorhinusursinus)]微量胺相关受体1[夏威夷僧海豹(Neomonachusschauinslandi)]预测:微量胺相关受体1[金毛鼹(Chrysochlorisasiatica)]微量胺相关受体1[平头刺猬(Echinopstelfairi)]微量胺相关受体1[港海豹(Phocavitulina)]微量胺相关受体1[小棕蝠(Myotislucifugus)]微量胺相关受体1[西班牙鼹鼠(Talpaoccidentalis)]低质量蛋白质:微量胺相关受体1[印度狐蝠(Pteropusgiganteus)]微量胺相关受体1[灰海豹(Halichoerusgrypus)]微量胺相关受体1[单峰驼(Camelusdromedarius)]预测:微量胺相关受体1[白犀(Ceratotheriumsimumsimum)]微量胺相关受体1[弯角剑羚(Oryxdammah)]预测:低质量蛋白质:微量胺相关受体1样[马来鼯猴(Galeopterusvariegatus)]微量胺相关受体1[细尾獴(Suricatasuricatta)]微量胺相关受体1[绵羊(Ovisaries)]微量胺相关受体1[镶边鬣狗(Hyaenahyaena)]微量胺相关受体1[波斯猫(Feliscatus)]微量胺相关受体1[野骆驼(Camelusferus)]微量胺相关受体1[猎豹(Acinonyxjubatus)]微量胺相关受体1[细腰猫(Pumayagouaroundi)]微量胺相关受体1[美洲狮(Pumaconcolor)]预测:微量胺相关受体1[大卫鼠耳蝠(Myotisdavidii)]预测:微量胺相关受体1[土拨鼠(Marmotamarmotamarmota)]微量胺相关受体1[黄腹旱獭(Marmotaflaviventris)]预测:微量胺相关受体1[东北虎(Pantheratigrisaltaica)]微量胺相关受体1[十三条纹地松鼠(Lctidomystridecemlineatus)]微量胺相关受体1[水牛(Bubalusbubalis)]预测:微量胺相关受体1[穴兔(Orvctolaguscuniculus)]