CN119409764A 一种富含类生长因子多肽的水解蛋黄粉及其制备方法与应用 （无锡朗芯生物工程有限公司）

一种富含类生长因子多肽的水解蛋黄粉及本发明公开了一种富含类生长因子多肽的种富含类生长因子多肽的水解蛋黄粉及其作为水解蛋黄粉及类生长因子多肽可作为食品添加22.一种富含类生长因子多肽的水解蛋黄粉，其特7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述碱性蛋白酶包括3优选的，所述Alcalase酶碱性蛋白酶的添加量为1.5_2.5wt％脱脂蛋黄粉，优选优选的，所述胰蛋白酶酶碱性蛋白酶的添加量为1_3wt％脱脂蛋黄粉，优选的为如权利要求3_9任一所述方法制备的水解蛋黄粉在制备具有促进骨骼生长的食品或药品中4一种富含类生长因子多肽的水解蛋黄粉及其制备[0003]水解蛋黄粉作为一种天然的营养补充剂，因其富含多种生物活性物质而备受关5[0018]可选的，在本发明的一些实施方式中，所述水解蛋黄粉的全部肽段分子量小于[0021]本发明的第三个目的是，提供一种富含类生长因子多肽的水解蛋黄粉的制备方[0035]更进一步可选的，在本发明的一些实施方式中，所述碱热处理的温度为80℃_906[0041]进一步可选的，在本发明的一些实施方式中，所述碱性蛋白酶的添加量为1.5‑备的水解蛋黄粉在制备具有促进骨骼生长的食品7条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发[0082]本发明另一方面提供一种富含人表皮生长因子类似物(类生长因子多肽)的水解[0088]本发明的另一方面提供一种富含人表皮生长因子类似物(类生长因子多肽)的水8法为：每个样品取～200ng总肽经nano_UPLC液相系统Evosepone进行分离后联用配备纳升离子源的质谱仪(timsTOFPro2)进行数据采集。色谱分离采用150μmID×15cm反相色谱柱[0099]在本发明的实施例中，质谱仪采用DDAPaSEF模式进行DDA数据采集，扫描范围从0.6Vs/cm2)上升到59eV(1/K0＝1.6Vs/cm2)。原始数据文件使用SpectroMine受体蛋白，人体表皮生长因子(EGF)作为原始配体，同源建模寻找EGFR的活性中心，采用[0103]将小鼠前成骨细胞系MC3T3_E1细胞以2×104个[0106]在本发明的实施例中，本发明中的肽为由FRTPPFGGF(肽Ⅰ,如SEQID01所示)、9(肽Ⅳ,如SEQID04所示)、WPRDPFTR(肽Ⅴ,如SEQID05所示)所表示的氨基酸序列[0107]在本发明的实施例中，本发明的肽的衍生物中还包含：N末端的氨基被保护基团C2‑6烷酰基等C1‑6酰基等)保护的导入了表达载体的转化子而取得肽，并使用适当的蛋白酶或肽酶切断该肽从而进行制备，用invitro(胞外)转录及翻译类的方法进行制备。在以往已知有很多用于保持肽的生理活[0114]以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解实施例是为了更好地解释本发[0116](1)为了研究碱热处理的温度对制备水解蛋黄多肽得率的影响，本实施例共设置[0125](3)将步骤(2)所得脱脂蛋黄粉匀浆调节温度至55℃,分别加入2g碱性蛋白酶热及湿法粉碎预处理操作的得率更高，得率为60且实际操作过程中，第七组酶解效率[0134]经检测，所得水解蛋黄粉产品中的多肽主要由FRTPPFGGF(肽Ⅰ,如SEQID01所示)、HGFWPRDPFTPS(肽Ⅱ,如SEQID02所示)、PFAEYPTYK(肽Ⅲ,如SEQID03所示)、SRPILPIYLK(肽Ⅳ,如SEQID04所示)、WPRDPFTR(肽Ⅴ,如SEQID05所示)所表示的氨基酸[0139](3)将所得脱脂蛋黄粉匀浆调节pH＝9.5，调节温度至55℃,加入2g碱性蛋白酶[0143](7)对所得的上清液进行喷雾干燥，进风温度180℃,出风温度80℃得到水解蛋黄4可以看出：加入中性蛋白酶进行第二次酶解得到的水解蛋黄粉与不加入中性蛋白酶的水解蛋黄粉几乎没有差异。说明加入中性蛋白酶进行第二次酶解对水解蛋黄粉产品没有影响，直接采用一次碱性蛋白酶酶解即可获得主要肽段(97％)分子量分布均集中在180‑10.3520.1130.3340.9456.13622.47762.168α_MEM培养液，制备细胞悬浮液(1×105个/mL)。在96孔板上以每孔100μL播种该细胞悬浮2_95％空气下进行前培养。[0151]将合成的五个多肽及实施例1第八组所得的水解蛋黄粉分别配置系列质量浓度梯[0153]步骤(1)的细胞悬浮液恒温培养24h后移去原培养基，加入步骤(2)配制好的系列