CN119410749A 长链非编码rna响应型尿液pca3检测纳米马达探针的制备方法及应用 （徐州医科大学）

长链非编码RNA响应型尿液PCA3检测纳米马本发明公开了一种用于尿液PCA3检测的长链非编码RNA响应型纳米马达探针的制备方法及术问题是提供一种核酸响应型Janus纳米马达探PCA3序列为目标lncRNA，创新性地将标记了NIR荧光与猝灭分子的茎环hDNA分子与Fe3O4/Au纳Janus纳米马达探针(JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease)。脲酶催化尿素产生气体使本发明制备肿瘤细胞)中的自主运动，从而实现对PCA3的高效识别。基于与PCA3长链中特征序列的配对效21.一种用于尿液PCA3检测的长链非编码RNA响应型纳米马达探针的制备方法，其特征将0.1～1.0g聚(4_苯乙烯磺酸_共聚_马来酸)钠盐(PSSAM)与0.2～1.0g六水合氯化铁(FeCls·6H2O)加入到10～50mL乙二醇中，并通过水热法制备出四氧化三铁纳米粒子3O4NPs)水溶液；二酰亚胺(NHS)加入到5～20mgFe3O4/AuJNMs纳米水溶液中进行活化表面羧基；之后向溶液中加入20～100mg脲酶(Urease)，在室温下进行接枝反应24～72h，得到JanusFe3O4/Au_将1～50μg茎环DNA和1～50μg三(2_羧乙基)膦(TCEP)溶解到1～10mL浓度为0.1~最终产物Janus纳米马达探针(JanushDNA2.如权利要求1所述一种长链非编码RNA响3.如权利要求1所述一种长链非编码RNA4.如权利要求1所述一种长链非编码RNA响应的驱动型5.如权利要求1所述一种长链非编码RNA6.如权利要求1所述一种长链非编码RNA响应的征在于，所制备的JanusFe3O4/Au_Ur7.如权利要求1所述一种长链非编码RNA征在于，所制备的JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease的粒径为255～290nm，表面电荷是_33～_8.如权利要求1所述一种长链非编码RNA响应9.如权利要求2所述一种长链非编码RNA响应的尿液中脱落前列腺癌细胞的捕获及原位靶向PC具有磁富集效应的脲酶驱动型Janus纳米马达探针，对尿液中PCA3进行特异性荧光促发式3[0001]本发明属于纳米医学领域，具体涉及一种长链非编码RNA响应型纳米马达探针的4象的分子类型的不同，分子探针需要被合理设计以确保其特异性与靶向性。在PCA3等[0007]本发明的目的在于提供一种Janus纳米马达探针为载体驱动核酸探针对前列腺癌[0008]本发明的长链非编码RNA响应型尿液PCA3检测纳米马达探针的制备方法及应用首[0009]本发明Janus纳米马达探针利用脲酶催化尿素实现JNMPs探针在复杂生物环境(尿2O5Au）通过溅射镀膜工艺沉积在Fe3O4NPs单层结构上，并在去离子水中对玻片进行温和超声处理，得到一半带有金涂层的Fe3O4/Au[0016]进一步的，所述步骤2制备的Fe3O4/AuJNMs的表面结构为Au纳米层覆盖Fe3O4半[0018]进一步的，所述步骤3制备JanusFe3O4/Au_Urease表面[0021]进一步的，所述Janus纳米马达探针不仅能够对尿液游离PCA3进行特异性精准检6[0026]针对一种实施方式描述和/或示出的特征可以以相同或类似的方式在一个或更多图5为本发明Fe3O4及JanushDNA_图6为本发明尿素在JanushDNA_Fe3O4/图7A为本发明JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease与不同浓度PCA3共孵育后的荧光光谱图7B为本发明JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease与不同浓度PCA3共孵育后的荧光强度图8为本发明JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease催化不同浓度尿素溶液检测PCA3荧光图9为本发明JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease在磁富集/无磁富集条件下检测PCA3荧图10为本发明JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease图11为本发明JanushDNA_Fe3O4/Au_U图12为本发明与前列腺癌细胞共孵育不同时长的JanushDNA_Fe3O4/Au_Urease的7Fe3O4NPs单层结构上，并在去离子水中对玻片进行温和超声处理，得到一半带有金涂层的的Fe3O4/AuJNMs纳米水溶液中，以活化其表面的羧基。接着，向溶液中加入50mg脲酶联得到最终产物JNMPshDNA_Fe3O4/Au_Urease纳米粒子。最后，将JNMPshDNA_Fe3O4/Au_的Fe3O4/Au使最终制备的hDNA_Fe3O4/图4所示。与Fe3O4/Au的光谱相比，hDNA_Fe3O4/Au_Urease的光谱中分别在280nm和260nm处显示了Urease的蛋白质特征吸收峰和hDNA的核酸特征吸收峰，这进一步证明Janus纳8对比Fe3O4、hDNA_Fe3O4/Au_UreaseNPs的饱和磁化强度(MS)发现（图5Fe3O4与hDNA_Fe3O4/Au_UreaseNPs在室温下依然处的NH3及CO2为Janus纳米马达探针提供与PCA3之间碱基互补配对使hDNA茎环被打开，导致标记在一侧的荧光点Cy5与猝灭因子纳米马达探针可检测最低阈值为1pM，当PCA3浓度范围在1_100pM和100_200000pM时，在含不同浓度尿素的尿液中仅需10min即可完成PCA3检测。除脲酶提供的气体驱动外，[0038]为了探究Janus纳米马达探针hDNA_Fe3O4/Au_UreaseNPs对PCA3检测的特异性，我们分别在尿液中加标多组不同种类RNA以及PCA3片段单个和三个碱基错配RNA片段M1、UreaseNPs对尿液中PCA3检测的高度特异性。此外，我们还通过加标PCA3以探究本发明入5组不同尿液样本中，本发明Janus纳米马达探针hDNA_Fe3O4/Au_UreaseNPs检测加标样的复杂基质效应使所有尿液样本均未通过qRT_PCR直接检出PCA3，说明所设计的探针在直接分析PCA3方面具有显著优势。为进一步探究本发明Janus纳米马达探针捕获前列腺癌细9[0039]本文引用的任何数值都包括从下限值到上限值之间以一个单位递增的下值和上