（正式版）DB11∕T 1053.3-2013 《实验用鱼 第3部分：遗传质量控制》

第3部分：遗传质量控制2014-04-01实施2014-04-01实施I前言 12规范性引用文件 13术语和定义 14遗传分类及命名原则 25实验用鱼的繁殖方法 26近交系实验用鱼的遗传质量监测 37封闭群实验用鱼的遗传质量监测 5附录A(资料性附录)斑马鱼相关基因的命名原则 6附录B(资料性附录)斑马鱼微卫星遗传标记的检测方法 8附录C(资料性附录)斑马鱼SNP遗传标记的检测方法 Ⅱ本部分为DB11/T1053的第3部分。1指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制，遗传背景明确或者来源清楚的用于在一个鱼群内，任何个体基因组中98.6%以上的等位位点为纯合时定义为近交系。经过20代以上的全同胞兄妹交配培育而成，品系内所有个体都可以追溯到一对共同的祖先，其近交系数(inbreeding封闭群(远交系)closedcolary(outhredstock)2般由近交系发生基因突变或人工诱变(如基因剔除)形成的。4.1遗传分类写成F87。如果对以前的代数不清楚，仅知道近期的近交代数为25,可以表示为F?+25。4.2.3杂交群5.1.1原则5.1.2引种近交代数、遗传基因特点及主要生物学特征等)。引种的实验用鱼应来自近交系的基础群，数量不少于3为保持封闭群实验用鱼的遗传基因的稳定，封闭群应大于100对，采取b)用于近交系保种及生产的繁殖系谱及记录卡应清楚、完整、繁殖方法科学。4抽样数目100尾以下100尾以上选择分列于近交系斑马鱼25对染色体、剑尾鱼24对不同染色体上的5个以上位表2结果判断有一个位点的分子或生化标记与基因改变可命名为同源突变系两个或两个以上位点的标记基因淘汰，重新引种5选择位于近交系斑马鱼25对染色体、剑尾鱼24对染色体上的5个以上位点，作c)封闭繁殖，保持鱼的基因异质性及多态性，避免近交系数随繁殖代数增加而过快上升；7.2.1抽样7.3检测频率6A.1.5斑马鱼中存在的重复基因(duplicatedgenes),在人或小鼠的同源基因名称后添加“a”或“b”字母标示，如hoxa13a、hoxa13b。如果用“a”或“b”字母与已经存在的哺乳动物同源基因冲突时，则采用“1”或“2”数字标示，如stat5.1、stat5.2。A.1.6当与哺乳动物同源性较高但又无法确认是否为同源基因时，一般在该哺乳动物基因名后加“1物种蛋白质符号人小鼠注：在文献中，有时将一个众所周知的常用蛋白符号放入括弧内，附在根据型时，一般用Df(Chr##)xxxallele表示，染色体序号用两位数字表示，如Chr03表示三号染色体；7相互易位时，这时涉及到两条染色体，一般要对每条染色体进行明确的描述。通用表示形式为：T(Chr##;Chr##)xxxallele,##U.##L和T(Chr##;Chr##)xxxallele,##U.##L,其中T表示易位型，表示由研究者描述的易位的主要特征及其等位基因；##U.##L表示染色体的上臂(upperarm)和下臂 分配字母前加上“d”。例如：lof表示lof基因的野生型等位基因，lof²则表示lof显性等位基因如：ednrbb¹40cx41.8¹;转基因载体一般表示为Tg(promoter:gene),其中Tg表示为转基因，括号中左边显示调控序转基因品系存在两种情况，一种是由被转入基因产生等位基(启动子捕获),Gt(基因捕获),Et(增强子捕获)等。8B1基因组IN的提取轻轻混匀15min,12000rpm4℃离心10min,缓慢抽取上清液，置于一d)向抽提吸出的上层清液中加入等体积的氯仿异戊醇(24:1),以去除残留的酚，轻轻混匀15e)加入2.5倍体积在-20℃预冷的无水乙醇，于-20℃放置30min,之后12000rpm4℃离心f)用75%的乙醇洗涤两次，每次都要12000rpm4℃离心5min,弃去液体；Taq酶(1U/μL)1μL灭菌双蒸水19.0μLa)制胶：10%的非变性聚丙烯酰胺凝胶；B4PCR产物染色观察9B.5.1.770%醇引物名位点引物序列(5’-3')品系片段长度(bp)ATATGTGCTGCTCATGATGACTAAATCGCACTTCAGCAAATTCTGGGGGGTAATTCTAAGGGGGCTAAACCTTCAAAGCACAGCGGAGGAAATAA引物名位点引物序列(5’-3')品系片段长度(bp)(25mM),7.0%甘油(W/v),1.6%DMS染色体：位点引物(5’-3’)TCGCAGTGAT表C.1常用实验用斑马鱼品系SN分子标记的特征(续)染色体：位点引物(5’-3’)GATGGATCTCTGCTCTCTGAATGA表C.1常用实验用斑马鱼品系SNP分子标记的特征(续)染色体：位点引物(5’-3’)TGAGTCAGTTTACTAACCTTGCTCAGTCAGTTTACTAACCTTGCAGCTTGAGCTGGTTAGAC