粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序Xi´anMedicalUniversity

实验五

肠杆菌科检验（一）西安医学院病原生物学与免疫学教研室目的要求掌握：肠杆菌科的共同特性和微生物学检查；肠道杆菌的主要生化反应；粪便标本中肠道致病菌分离培养的基本程序。熟悉：粪便标本中肠道致病菌分离与初步鉴定的操作。

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ＭedicalUniversity微免教研室实验内容一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序Xi’an

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形态特征（示教）一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应革兰阴性短杆菌，多数有周鞭毛，有荚膜或微荚膜，有菌毛，无芽胞。故肠道杆菌的染色镜检只能初步判断，不能做为肠道杆菌的鉴别依据。Xi’an

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培养特性及主要生化反应（示教）一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应肠道杆菌营养要求不高，在普通培养基上能生长，大多形成中等大小，表面光滑、形态相似的菌落，因而也不能作为鉴别的依据。但它们生化反应活泼，对糖和蛋白质可产生不同的代谢产物，可借生化反应鉴别各种肠道菌，特别是肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多数分解乳糖，临床上常用此特性分离肠道致病菌。Xi’an

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培养特性及主要生化反应一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应常见用于分离培养肠道病原菌的选择或鉴别培养基：

SS琼脂平板、EMB琼脂平板双糖铁培养基五糖发酵管（葡乳麦甘蔗）Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应SS琼脂平板（沙门志贺菌属琼脂培养基）分解乳糖细菌，菌落呈红色。不分解乳糖细菌，菌落无色。Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应2.EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基）分解乳糖细菌菌落变黑，有金属光泽不分解乳糖细菌菌落无色、半透明（粉色）Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应3.双糖铁培养基用途：

检测细菌对乳糖和葡萄糖利用能力的不同，是否产生H2S。乳糖葡萄糖观察方法：上层含乳糖部分乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色

然后观察下层发酵葡萄糖（产酸产气）H2S：培养基呈黑色Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应

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ＭedicalUniversity微免教研室一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应４.蛋白胨水培养基（吲哚试验）组成：蛋白胨水＋色氨酸原理：某些细菌有色氨酸酶分解色氨酸产生吲哚（无色），加入柯氏试剂后形成玫瑰吲哚（红色）。结果：液面形成玫瑰红色Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应５.微量糖发酵管Xi’an

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几种主要肠道杆菌的鉴别要点菌名鉴别培养基EMB平板SS平板双糖铁培养基（KIA）斜面底层气体H2S乳糖葡萄糖动力吲哚五糖发酵管葡乳麦甘蔗大肠埃希菌肖氏沙门菌伤寒沙门菌志贺菌菌落蓝紫色、同前，圆形、带菌落金属光泽、呈红色。圆形不透明，直径2~3mm左右。菌落无色、同前，半透明、菌落直径1～常带黑心。2mm左右。菌落无色、同前半透明、直径1~2mm左右。同上同前

AA＋－KA－＋＋KA－－/＋KA－－

＋＋＋－＋－－－＋/-－－＋－＋＋＋－＋＋Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序

粪便标本或肛拭子分离培养（划线接种）第一天

37℃18～24hSS平板EMB平板挑选可疑菌落进一步鉴定第二天

37℃18～24h生化反应鉴定血清学鉴定第三天（用相应诊断血清做玻片凝集试验）

报告结果Xi’an

ＭedicalUniversity微免教研室二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序

操作内容(一)双糖铁培养基的接种1、接种方法：取SS琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于半固体双糖铁培养基上。培养基采用高层穿刺、斜面密布划线接种法。

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ＭedicalUniversity微免教研室二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序

2、结果判定：

乳糖葡萄糖动力硫化氢大肠杆菌黄色黄色+-痢疾杆菌红色

黄色--伤寒杆菌红色

黄色++/-副伤寒杆菌红色黄色

++

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ＭedicalUniversity微免教研室二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序

操作内容(二)吲哚试验1、接种蛋白胨水培养基：取SS琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于蛋白胨水培养基中。2、结果判定：

液面形成玫瑰红色者为吲哚试验（＋）；无变化者为吲哚试验（－）。

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ＭedicalUniversity微免教研室二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序

操作内容(三)微量糖发酵管接种1、接种微量糖发酵管：取SS琼脂平板观察有无半透明、较小的可疑菌落，挑选单个可疑菌落接种于微量糖发酵管中。2、结果判定：

反应现象结果描述酸性变色、有气泡分解××糖产酸、产气（）酸性变色、无气泡分解××糖产酸、不产气（

）培养基不变色不分解××糖Xi’an

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