2025年生物细胞冻存技术专业考试试题（含答案）

2025年生物细胞冻存技术专业考试试题（含答案）一、单项选择题（每题1分，共30分）1.细胞冻存的主要目的是（）A.促进细胞增殖B.长期保存细胞活力与特性C.诱导细胞分化D.杀灭细胞中的微生物答案B2.慢速冷冻法通常采用的降温速率范围是（）A.-0.1~-0.5℃/minB.-1~-3℃/minC.-10~-20℃/minD.-100℃/min以上答案B3.以下哪种冷冻保护剂属于渗透性保护剂？（）A.蔗糖B.二甲基亚砜（DMSO）C.羟乙基淀粉D.聚乙烯吡咯烷酮答案B4.细胞冻存液中DMSO的常用终浓度一般为（）A.1%B.5%~10%C.20%~30%D.50%答案B5.液氮在常压下的温度通常为（）A.-80℃B.-135℃C.-196℃D.-273℃答案C6.复苏冻存细胞时，推荐使用的水浴温度为（）A.4℃B.25℃C.37℃D.56℃答案C7.程序降温仪的主要作用是（）A.保持恒定温度B.按设定速率精确降温C.快速冷却至液氮温度D.离心细胞答案B8.玻璃化冻存的关键特点是（）A.缓慢降温B.高浓度冷冻保护剂结合快速降温，形成无定形玻璃态C.不使用任何保护剂D.仅适用于植物细胞答案B9.台盼蓝染色法主要用于检测（）A.细胞凋亡B.细胞增殖C.细胞膜完整性及活力D.DNA损伤答案C10.以下哪项是细胞冻存前必须进行的质量控制？（）A.细胞染色体核型分析B.支原体检测C.流式细胞术分选D.蛋白质组学分析答案B11.冻存管从液氮中取出时，可能发生的主要安全风险是（）A.冻存管破裂B.液氮泄漏引起冻伤C.细胞污染D.以上都是答案D12.液相液氮储存与气相液氮储存的主要区别是（）A.液相温度更低B.气相液氮可避免样本间液体交叉污染C.气相液氮无需补充液氮D.液相液氮更安全答案B13.复苏后细胞应立即进行的操作是（）A.直接培养B.离心去除保护剂后重悬培养C.长期放置于室温D.加入大量保护剂答案B14.以下哪种细胞对冻存过程特别敏感？（）A.成纤维细胞B.杂交瘤细胞C.肝细胞D.293T细胞答案C15.细胞冻存的最佳细胞密度通常为（）A.1×10³cells/mLB.1×10⁵~1×10⁷cells/mLC.1×10⁸cells/mL以上D.低于10²cells/mL答案B16.以下哪项不是冷冻保护剂的作用机制？（）A.降低冰点B.减少冰晶形成C.提供营养D.稳定细胞膜结构答案C17.程序降温过程中，细胞外冰晶形成导致的主要损伤是（）A.溶质损伤B.机械损伤C.渗透压损伤D.以上都是答案D18.冻存管标签应使用（）A.普通签字笔B.耐低温、防水的标签笔或标签纸C.铅笔D.油性笔即可答案B19.慢速冷冻法中，-20℃到-80℃阶段常采用的控制降温方式是（）A.直接放入-80℃冰箱B.程序降温仪以-1℃/min降温C.液氮蒸气快速冷却D.干冰直接接触答案B20.细胞复苏活率计算通常使用（）A.MTT法B.台盼蓝染色计数C.流式细胞术D.免疫组化答案B21.内毒素主要来源于（）A.病毒B.革兰氏阴性菌C.真菌D.支原体答案B22.生物样本库中样本编码管理系统的主要作用是（）A.增加样本数量B.实现样本信息可追溯C.减少冻存液用量D.提高降温速率答案B23.以下哪种操作不符合GMP要求？（）A.使用一次性无菌耗材B.在生物安全柜中操作C.边操作边饮食D.定期监测环境微生物答案C24.程序降温仪常用的制冷介质是（）A.酒精B.液氮C.干冰D.盐水冰答案B25.复苏时，冻存管从液氮取出到水浴的转移时间应尽量缩短，主要是为了（）A.节省时间B.避免升温过程中冰晶重结晶损伤C.避免液氮蒸发D.减少成本答案B26.以下哪种物质常作为玻璃化冻存液中的主要保护剂成分？（）A.蔗糖B.乙二醇C.海藻糖D.以上均可答案D27.细胞冻存前应使其处于（）A.对数生长期B.稳定期C.衰老期D.凋亡期答案A28.液氮罐应存放于（）A.密闭狭小空间B.通风良好的区域C.阳光直射处D.潮湿环境答案B29.以下关于DMSO的叙述错误的是（）A.可透过细胞膜B.高浓度有毒C.室温下稳定D.需避光保存答案D30.细胞冻存后长期储存的推荐温度是（）A.-20℃B.-80℃C.-135℃以下气相液氮D.4℃答案C二、多项选择题（每题2分，共20分）31.影响细胞冻存效果的主要因素包括（）A.冷冻保护剂种类与浓度B.降温速率C.细胞密度D.复苏速率答案ABCD解析冷冻保护剂种类与浓度、降温速率、细胞密度以及复苏速率均对细胞冻存效果有显著影响。32.渗透性冷冻保护剂包括（）A.DMSOB.甘油C.乙二醇D.蔗糖答案ABC解析DMSO、甘油、乙二醇均可透过细胞膜，属于渗透性保护剂；蔗糖不能透过细胞膜，为非渗透性保护剂。33.冻存复苏后细胞活力检测方法有（）A.台盼蓝染色B.CCK-8法C.流式细胞术AnnexinV/PI染色D.以上都不是答案ABC解析台盼蓝染色用于区分死活细胞，CCK-8法检测细胞代谢活力，流式细胞术可检测凋亡与坏死，均适用于复苏后活力评估。34.以下哪些是生物样本库中样本质量控制的内容？（）A.冻存前活力检测B.无菌检测C.支原体检测D.样本身份确认答案ABCD解析样本质量控制涵盖活力、微生物污染、支原体污染以及样本身份核对等多个方面。35.玻璃化冻存的优点包括（）A.避免冰晶损伤B.操作快速C.无需昂贵设备D.适合卵母细胞和胚胎保存答案ABD解析玻璃化冻存可避免冰晶形成，操作快速，特别适用于卵母细胞、胚胎等对冰晶损伤敏感的材料；但仍需液氮及适当降温设备，并非无需设备。36.液氮操作时应注意（）A.佩戴防护手套和面罩B.在通风柜外操作C.避免皮肤直接接触液氮D.定期检查液氮罐答案ACD解析液氮操作应在通风良好的区域或通风柜内进行，避免氮气积聚导致窒息；同时需做好个人防护，防止冻伤。37.细胞冻存液配制时，基础培养基中可包含（）A.胎牛血清B.抗生素C.生长因子D.DMSO答案ABCD解析冻存液通常由基础培养基、胎牛血清、抗生素、生长因子及冷冻保护剂DMSO等组成，可根据细胞类型优化。38.以下哪些情况会导致冻存管在液氮中爆裂？（）A.管内液体过满B.冻存管材质不耐低温C.液氮渗入管内后在升温时膨胀D.使用密封不严的冻存管答案ABCD解析液体过满、材质不佳、液氮渗入后膨胀以及密封不严均可能造成冻存管在液氮中爆裂。39.关于程序降温仪，下列说法正确的有（）A.可精确控制降温速率B.适用于大量样本的标准化冻存C.降温过程中无需人工干预D.只适用于悬浮细胞答案ABC解析程序降温仪可精确控制降温曲线，适用于多种细胞类型的标准化冻存，并非仅限悬浮细胞。40.冻存细胞复苏时，去除DMSO的常用方法包括（）A.离心换液B.直接培养稀释C.多次洗涤D.高温灭活答案ABC解析复苏后常通过离心换液、稀释培养或多次洗涤来降低或去除DMSO；高温灭活会造成细胞死亡，不可取。三、判断题（每题1分，共10分）41.细胞冻存时降温速率越慢越好。（）答案错误解析降温过慢会导致细胞过度脱水和溶质损伤，过快则形成胞内冰晶，需选择适宜降温速率。42.DMSO在室温下会缓慢分解产生硫酸。（）答案错误解析DMSO化学性质稳定，室温下不会自行分解产生硫酸。43.液氮罐内气相和液相温度完全相同。（）答案错误解析气相与液相温度接近，但气相温度可能略高，且样本接触液相与气相状态不同。44.台盼蓝染色后活细胞被染成蓝色。（）答案错误解析台盼蓝可进入死细胞并使其呈蓝色，活细胞因膜完整排斥染料而不着色。45.冻存管从液氮取出后应立即置于37℃水浴中快速摇动解冻。（）答案正确46.细胞冻存后复苏活率下降的主要原因是细胞凋亡。（）答案错误解析复苏活率下降主要是冰晶损伤、渗透压改变等冻存损伤所致，细胞凋亡是后续可能发生的现象。47.程序降温仪比异丙醇冻存盒的降温速率控制更精确。（）答案正确48.玻璃化冻存不需要任何降温设备。（）答案错误解析玻璃化冻存需借助液氮或专用设备实现快速降温，并非不需要降温设备。49.生物样本库中样本必须进行唯一编码。（）答案正确50.使用DMSO冻存细胞时，DMSO浓度越高保护效果越好。（）答案错误解析DMSO具有细胞毒性，浓度过高会损伤细胞，常用浓度为5%~10%。四、简答题（每题5分，共20分）51.简述细胞冻存的基本操作流程（从细胞准备到冻存完成）。答案(1)细胞准备：选择对数生长期的细胞，消化或收集；(2)计数与活力检测：确定细胞数量和活力；(3)配制冻存液：常用含5%~10%DMSO及血清的培养基；(4)重悬分装：用冻存液重悬细胞至适宜密度，分装至冻存管；(5)降温：采用异丙醇冻存盒或程序降温仪进行慢速降温；(6)转移储存：先于-80℃放置过夜，再转入液氮长期保存。解析该流程体现了冻存前准备、保护剂应用、标准化降温及储存等关键环节。52.简述渗透性与非渗透性冷冻保护剂的区别，并各举一例。答案渗透性保护剂可透过细胞膜进入胞内，降低胞内冰点、减少胞内冰晶形成，如DMSO、甘油、乙二醇；非渗透性保护剂不能进入细胞，主要通过改变细胞外渗透压、稳定细胞膜等发挥作用，如蔗糖、羟乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮。解析两类保护剂作用机制不同，常联合使用以增强冻存效果。53.简述细胞复苏的关键注意事项。答案(1)快速解冻：从液氮取出后迅速放入37℃水浴中，1~2分钟内融化；(2)尽快稀释：融化后立即转移至培养液中稀释保护剂，减少DMSO毒性；(3)操作轻柔：避免吹打过度造成机械损伤；(4)及时培养：复苏后应尽快接种培养，避免长时间放置影响活力。解析复苏过程的核心是缩短升温时间、快速去除冻存液，以保护复苏后细胞活力。54.为什么要监测生物样本库中的液氮水平？如何保障安全？答案液氮水平不足会导致样本温度升高，失去超低温保存效果，甚至造成样本不可逆损伤；同时液氮蒸发可能使环境中氮气浓度升高，引发窒息风险。保障措施包括：定期检查液氮罐液位并记录，安装低液位报警系统，确保储存区域通风良好，操作时使用防护手套、面罩等个人防护装备。解析液氮水平与安全直接相关，需从技术和管理两方面共同保障。五、论述题（每题20分，共20分）55.论述影响细胞冻存与复苏效果的关键因素，并结合实际情况提出优化策略。答案影响细胞冻存与复苏效果的关键因素主要包括：(1)冷冻保护剂：保护剂种类、浓度及配伍方案直接影响冻存效果。渗透性保护剂如DMSO可进入胞内减少冰晶损伤，但浓度过高有毒性；非渗透性保护剂可协同稳定细胞膜。优化策略为根据细胞类型筛选合适的保护剂组合及浓度，并控制添加时的温度与时间。(2)降温速率：降温过快易形成胞内冰晶，过慢则导致溶质损伤和过度脱水。慢速冷冻多采用-1~-3℃/min的速率，程序降温仪可精确控制；对卵母细胞等可采用玻璃化快速降温。优化策略为建立标准化降温程序并验证。(3)复苏速率：复苏应以“快速解冻”为原则，缩短从液氮到37℃水浴的转移时间，减少重结晶损伤。优化策略为固定复苏操作步骤，如水浴温度、解冻时间、摇动方式等。(4)细胞状态与密度：冻存前细胞应处于对数生长期，活力>90%，密度一般控制在1×10⁵~1×10⁷cells/mL。优化策略为严格控制细胞传代次数和培养条件。(5)质量控制：冻存前后应进行活力检测、无菌检测、支原体检测等，确保