免疫细胞制备技师考试试卷及答案

免疫细胞制备技师考试试卷及答案填空题（每题1分，共10分）1.外周血单个核细胞（PBMC）分离常用的试剂是______。2.免疫细胞培养中常用的血清是______。3.流式细胞术检测细胞表面标志物时，常用的荧光染料偶联抗体有FITC、PE和______。4.细胞冻存时常用的保护剂是______。5.树突状细胞（DC）的主要功能是______。6.CAR-T细胞制备中，常用的病毒载体是______。7.细胞计数时，常用的染色剂是______。8.细胞培养的适宜温度是______℃。9.巨噬细胞的主要功能包括吞噬作用和______。10.NK细胞的活化受体包括NKG2D和______。填空题答案：1.Ficoll-Hypaque分层液2.胎牛血清（FBS）3.APC4.二甲基亚砜（DMSO）5.抗原提呈6.慢病毒载体7.台盼蓝8.379.分泌细胞因子10.CD16单项选择题（每题2分，共20分）1.下列哪种细胞不属于固有免疫细胞？（）A.NK细胞B.巨噬细胞C.T细胞D.树突状细胞2.分离PBMC时，离心速度通常为？（）A.1000rpmB.1500rpmC.2000rpmD.3000rpm3.细胞冻存的正确步骤是？（）A.直接放入液氮B.4℃→-20℃→-80℃→液氮C.-20℃→4℃→-80℃→液氮D.室温→-80℃→液氮4.用于细胞复苏的试剂是？（）A.75%酒精B.含血清的培养基C.生理盐水D.PBS5.CAR-T细胞的靶点不包括？（）A.CD19B.CD20C.PD-1D.BCMA6.流式细胞术检测细胞活力时，活细胞表现为？（）A.台盼蓝染色阳性B.台盼蓝染色阴性C.PI染色阳性D.AnnexinV染色阳性7.树突状细胞成熟的标志分子是？（）A.CD14B.CD80C.CD3D.CD48.细胞培养中CO₂浓度通常为？（）A.2%B.5%C.10%D.15%9.下列哪种细胞属于适应性免疫细胞？（）A.中性粒细胞B.B细胞C.单核细胞D.肥大细胞10.细胞传代常用的消化酶是？（）A.胃蛋白酶B.胰蛋白酶C.木瓜蛋白酶D.纤维素酶单项选择题答案：1.C2.B3.B4.B5.C6.B7.B8.B9.B10.B多项选择题（每题2分，共20分）1.免疫细胞分离常用方法有？（）A.密度梯度离心B.磁珠分选C.流式分选D.过滤法2.细胞冻存保护剂的作用包括？（）A.防止细胞脱水B.减少冰晶形成C.维持细胞渗透压D.促进细胞增殖3.CAR-T细胞制备步骤包括？（）A.采集外周血B.分离PBMCC.转染CAR基因D.扩增培养4.流式细胞术可检测的参数有？（）A.细胞大小B.细胞颗粒度C.细胞表面标志物D.细胞活力5.树突状细胞的来源有？（）A.骨髓B.外周血C.脾脏D.淋巴结6.细胞培养污染类型包括？（）A.细菌污染B.真菌污染C.支原体污染D.病毒污染7.NK细胞的功能包括？（）A.杀伤肿瘤细胞B.杀伤病毒感染细胞C.分泌细胞因子D.抗原提呈8.常用细胞培养器皿有？（）A.培养瓶B.培养板C.离心管D.移液管9.细胞复苏注意事项有？（）A.快速解冻B.缓慢解冻C.立即离心去除DMSOD.用预热培养基稀释10.下列属于免疫细胞的是？（）A.T细胞B.B细胞C.红细胞D.血小板多项选择题答案：1.ABCD2.ABC3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABCD7.ABC8.AB9.ACD10.AB判断题（每题2分，共20分）1.PBMC包括淋巴细胞和单核细胞。（）2.细胞冻存时DMSO浓度通常为10%。（）3.树突状细胞是体内功能最强的抗原提呈细胞。（）4.CAR-T细胞治疗不需要HLA配型。（）5.细胞培养pH值维持在7.2-7.4。（）6.台盼蓝染色阳性的细胞是活细胞。（）7.NK细胞活化不需要抗原预先致敏。（）8.慢病毒载体可整合到宿主细胞基因组。（）9.细胞传代时消化时间越长越好。（）10.流式细胞术只能检测细胞表面标志物。（）判断题答案：1.√2.√3.√4.√5.√6.×7.√8.√9.×10.×简答题（每题5分，共20分）1.简述外周血单个核细胞（PBMC）的分离步骤。2.简述CAR-T细胞制备的基本流程。3.细胞冻存的注意事项有哪些？4.简述流式细胞术在免疫细胞制备中的应用。简答题答案：1.采集外周血并加入抗凝剂；用PBS等体积稀释血液；将稀释血液缓慢铺于Ficoll分层液上层；1500rpm离心30分钟；吸取中间白膜层（PBMC）；用PBS洗涤2-3次（1000rpm离心10分钟）；最后用培养基重悬细胞。该步骤可获得高纯度PBMC，用于后续培养或分选。2.采集患者外周血分离PBMC；用CD3/CD28抗体或细胞因子激活T细胞；通过慢病毒载体将CAR基因转染至激活的T细胞；在含IL-2的培养基中扩增CAR-T细胞；检测细胞活力、CAR表达率、无菌性等；合格后回输患者。流程需遵循GMP标准，确保细胞质量。3.选择对数生长期细胞（活力>90%）；冻存液含10%DMSO、20%血清和70%培养基；梯度降温：4℃30分钟→-20℃1-2小时→-80℃过夜→液氮保存；标记冻存管信息；解冻时快速（37℃1-2分钟），离心去除DMSO；避免反复冻融，保障细胞活力。4.流式细胞术可用于：细胞表型鉴定（如CD3、CD4等标志物）；细胞活力检测（PI染色）；CAR-T细胞转染效率检测；细胞功能分析（细胞因子分泌）；细胞计数。它快速准确提供细胞多维度信息，是免疫细胞制备的关键技术。讨论题（每题5分，共10分）1.讨论免疫细胞制备过程中如何保证细胞的质量和安全性。2.讨论CAR-T细胞治疗中可能出现的不良反应及应对措施。讨论题答案：1.免疫细胞制备需多环节把控：原材料检测病原体（乙肝、HIV等）；操作在GMP洁净室进行，严格无菌；用无血清培养基减少外源风险；细胞检测活力、纯度、无菌、内毒素等；冻存复苏遵循标准流程；操作人员专业培训。这些措施避免污染，保证细胞功能，确保临床安全。2