2026综合类-病理学技术(主管技师)-电子显微镜技术及超薄切片历年真题摘选带答案详解

2026综合类-病理学技术(主管技师)-电子显微镜技术及超薄切片历年真题摘选带答案详解一、选择题从给出的选项中选择正确答案（共100题）1、某研究者对某小学五年级学生进行生长发育调查，发现部分学生身高明显低于同龄人，经进一步检查发现其骨龄落后于实际年龄2岁。该学生最可能处于以下哪种状态？A.正常发育变异B.发育迟缓C.早熟D.肥胖症2、透射电镜观察组织超微结构时，常用的固定剂是A.甲醛B.戊二醛C.酒精D.丙酮E.醋酸3、超薄切片厚度一般为A.0.5~1μmB.50~100nmC.1~2μmD.5~10nmE.200~500nm4、电镜观察中用于包埋的组织块一般大小为A.1mm×1mm×1mmB.0.5cm×0.5cm×0.5cmC.2mm×2mm×2mmD.5mm×5mm×5mmE.3mm×3mm×3mm5、电镜技术中用于脱水的主要试剂是A.二甲苯B.乙醇或丙酮C.甲醇D.苯E.氯仿6、扫描电镜主要观察样品的A.内部超微结构B.表面三维形态C.细胞核结构D.细胞器分布E.生物大分子排列7、电镜切片常用染色的重金属盐是A.苏木精B.台盼蓝C.醋酸铀和柠檬酸铅D.伊红E.甲基绿8、电镜观察中低温固定的主要目的是A.加快固定速度B.减少人工假象，更好地保存超微结构C.降低染色难度D.防止组织腐败E.便于切片9、电镜制样的渗透压一般要求与体液A.明显高于体液B.明显低于体液C.基本相等D.无特殊要求E.高于或低于均可10、下列哪种结构在光镜下不可见但在透射电镜下清晰可见A.细胞核B.线粒体嵴C.细胞质D.细胞膜E.核仁11、电镜包埋常用的包埋剂是A.石蜡B.羟丙基甲基纤维素C.环氧树脂D.明胶E.琼脂12、电镜样本制备中脱水不彻底可能导致的结果是A.切片太薄B.包埋剂渗透不良，切片困难C.染色过深D.切片太厚E.固定过度13、透射电镜的分辨率可达A.0.2nmB.0.2μmC.2nmD.20nmE.200nm14、下列哪项不是电镜固定液的特点A.良好的渗透性B.能迅速穿透组织C.对组织损伤小D.固定后组织硬度高，不易切片E.能良好保存超微结构15、电镜超薄切片刀通常采用A.玻璃刀B.钻石刀或锋利钢刀C.剃须刀片D.瓷片刀E.塑料刀片16、电镜观察细胞膜呈三层结构，称为A.单位膜模型B.液体镶嵌模型C.sandwich模型D.流动镶嵌模型E.晶格模型17、扫描电镜的样品制备中，导电处理常用的材料是A.金或金钯合金B.银粉C.铜网D.石墨粉E.铝箔18、下列哪项在透射电镜下表现为电子密度低（电子透亮）A.糖原颗粒B.脂滴C.线粒体D.核糖体E.溶酶体19、电镜标本的漂洗通常使用A.蒸馏水B.缓冲液C.生理盐水D.酒精E.丙酮20、电子显微镜的电子来源是A.热灯丝发射电子B.激光照射产生电子C.X射线激发电子D.紫外线照射E.微波激发21、超薄切片收集载网一般用A.铜网B.载玻片C.盖玻片D.锡箔E.云母片22、在透射电子显微镜样品制备中，固定组织最常用的方法是以下哪一种？A.冷冻固定法B.化学固定法C.微波固定法D.辐射固定法23、超薄切片切片厚度一般控制在什么范围？A.0.1~0.5μmB.50~90nmC.5~10μmD.100~200nm24、玻璃刀在超薄切片中的主要优势是以下哪一项？A.可重复使用B.刃口锋利度更高C.成本低廉D.易于储存25、锇酸固定液在电镜样品制备中的作用主要是：A.固定糖类物质B.交联蛋白质并沉淀核酸C.固定脂类成分并增加电子散射能力D.溶解细胞膜结构26、下列哪种脱水剂在超薄切片制样中最为常用？A.甲醇B.乙醇C.丙酮D.异丙醇27、环氧树脂包埋剂Epon812的固化温度一般为：A.45℃B.60℃C.80℃D.37℃28、在电子显微镜技术中，分辨力的决定因素主要是：A.样本染色程度B.电磁透镜的数值孔径C.加速电压的高低D.真空度的高低29、铀铅双染法中，醋酸铀溶液孵育时间一般为：A.5~10分钟B.15~30分钟C.1~2小时D.过夜30、扫描电镜样品制备中，干燥样本最常用的方法是：A.冷冻干燥法B.临界点干燥法C.空气自然干燥法D.化学试剂梯度干燥31、重金属染色增强电镜图像反差的主要原理是：A.改变电子波长B.增加样品对电子的散射能力C.提高加速电压D.降低真空度32、下列哪种结构在普通光学显微镜下无法分辨，必须借助电子显微镜观察？A.细胞核B.线粒体C.核糖体D.高尔基体33、在超薄切片过程中，切出理想薄片的关键因素不包括：A.刀的锋利程度B.切片厚度调节旋钮的精度C.样本的硬度D.显微镜的放大倍数34、戊二醛固定液的常用浓度是：A.0.5%B.2.5%C.10%D.50%35、下列哪一项是透射电镜与扫描电镜的主要区别？A.透射电镜使用电子束，扫描电镜使用光束B.透射电镜观察样本内部结构，扫描电镜观察样本表面形貌C.透射电镜分辨率较低，扫描电镜分辨率较高D.透射电镜样本需镀膜，扫描电镜不需要36、柠檬酸铅染色液中铅颗粒容易形成沉淀的原因是：A.铅盐溶解度极高B.暴露在空气中与二氧化碳反应生成碳酸铅沉淀C.铅离子具有强挥发性D.染色液酸碱度稳定37、负染技术在电子显微镜中的应用主要用于观察：A.细胞器的内部结构B.病毒、细菌等微小颗粒的表面形态C.组织的整体架构D.染色体带型38、下列哪种包埋剂适合需要免疫电镜研究的样品？A.Epon812B.低粘度的acrylicresinC.SpurrresinD.Agaroseembeddingmedium39、透射电镜样品制备中，渗透脱水法的目的是：A.增加样本重量B.用有机溶剂逐步置换组织中的水分C.固定细胞器结构D.使样本产生反差40、电镜样品室真空度不足会导致以下哪种现象？A.图像亮度增加B.电子束与气体分子碰撞产生散射干扰C.分辨率提高D.放大倍数自动调整41、关于电子显微镜的分辨率，以下说法正确的是：A.透射电镜分辨率可达0.1~0.2nm，扫描电镜约为2~10nmB.透射电镜分辨率低于光学显微镜C.扫描电镜分辨率可达原子级别D.分辨率仅取决于电子束能量42、超薄切片染色时，染色时间过长可能导致的后果是：A.细胞结构更清晰B.背景过深掩盖细节C.切片厚度增加D.电子束穿透力增强43、下列哪种情况不需要做固定而可直接进行冰冻切片A.肿瘤组织B.需要保存酶活性的组织C.常规病理检查D.骨骼组织E.脂肪组织44、固定过程中组织收缩的主要原因不包括A.固定液浓度过高B.固定时间过长C.组织块过大D.固定温度过低E.固定前未清洗血液45、福尔马林色素的形成原因是A.甲醛分解产物与血红蛋白结合B.固定液污染C.组织自溶D.染色不当E.脱水不彻底46、在电子显微镜技术中，固定组织标本最常用的初固定剂是A.甲醛B.戊二醛C.锇酸D.苦味酸47、超薄切片的标准厚度范围通常是A.0.5~1μmB.50~100nmC.200~500nmD.1~2μm48、锇酸作为电镜固定剂的主要作用是A.使蛋白质凝固B.保存脂类物质C.增强电子散射D.固定核酸49、超薄切片时常用的切片刀是A.玻璃刀B.金刚石刀C.瓷刀D.不锈钢刀50、电镜标本脱水中最常用的脱水剂是A.乙醇B.丙酮C.甲醇D.异丙醇51、Epon812包埋剂的主要成分是A.环氧树脂B.丙烯酸树脂C.石蜡D.火棉胶52、透射电镜的分辨率主要取决于A.加速电压B.物镜像差C.样品厚度D.真空度53、扫描电镜观察标本时，样品表面需进行A.染色处理B.金属镀膜C.荧光标记D.酶消化54、免疫电镜技术中标记物最常用的是A.荧光素B.酶C.胶体金D.放射性同位素55、超薄切片质量不佳时，常见的原因是A.切片刀过新B.样品过硬C.切片厚度不均D.切片太薄56、电子显微镜中产生电子的部件是A.物镜B.电子枪C.光栏D.探测器57、负染技术主要用于观察A.组织超微结构B.病毒颗粒C.细胞核D.线粒体58、切片捞取时常用的载网材质是A.铜网B.塑料网C.铝网D.铁网59、电镜技术中用于区分细胞内外结构的染色方法是A.普鲁士蓝染色B.铅铀双染C.革兰染色D.银浸染60、加速电压对透射电镜的影响是A.电压越高分辨率越低B.电压越高波长越长C.电压越高穿透力越强D.电压对成像无影响61、脱水步骤不彻底对包埋的影响是A.包埋剂渗透不良B.切片更容易C.样品更坚硬D.无不良影响62、电镜观察中产生衬度的主要原因是A.电子波长不同B.样品各部分电子散射能力不同C.透镜焦距不同D.真空度不同63、临界点干燥法主要用于避免A.高温损伤B.表面张力破坏C.氧化反应D.化学腐蚀64、扫描电镜的景深特点与光学显微镜相比是A.景深更小B.景深更大C.景深相同D.无景深概念65、标本后固定使用的固定剂是A.戊二醛B.锇酸C.甲醛D.酒精66、超薄切片机的进给量通常设置为A.0.1~0.5nmB.50~100nmC.1~2μmD.5~10μm67、电镜标本在观察前必须处于高真空环境的原因是A.防止电子散射干扰B.防止样品发热C.防止样品氧化D.便于操作68、透射电子显微镜的分辨率主要取决于什么因素？A.电子束的电压B.电磁透镜的像差C.标本的厚度D.放大倍数69、在超薄切片制备过程中，常用的固定剂组合是？A.甲醛和乙醇B.戊二醛和锇酸C.甲醇和丙酮D.乙酸和甘油70、超薄切片厚度通常为多少纳米？A.1～5nmB.50～90nmC.200～300nmD.500～1000nm71、扫描电子显微镜主要用于观察什么？A.细胞内部超微结构B.标本表面立体形态C.细胞器内部成分D.分子结构细节72、超薄切片常用的染色剂是？A.苏木精和伊红B.醋酸铀和柠檬酸铅C.亚甲基蓝和乙醇D.刚果红和碘液73、在电镜标本制备中，脱水剂最常用的是？A.蒸馏水B.梯度乙醇或丙酮C.生理盐水D.缓冲液74、电镜包埋剂最常用的型号是？A.ParaffinWaxB.Epon812C.CompoundD.Tissue-Tek75、透射电镜的加速电压一般在什么范围？A.10～50kVB.60～100kVC.40～120kVD.200～300kV76、锇酸固定的主要作用是？A.主要固定蛋白质B.固定脂类并增加导电性C.脱水作用D.染色作用77、半薄切片在电镜制片中的用途是？A.直接用于电镜观察B.作为定位参考切片C.替代超薄切片D.用于染色对照78、电镜切片刀的材质通常是？A.玻璃B.金刚石或不锈钢C.塑料D.陶瓷79、标本干燥时，临界点干燥法的优点是什么？A.操作简单快速B.避免表面张力破坏标本C.成本最低D.无需专用设备80、扫描电镜标本金属镀层的目的是？A.增加标本重量B.提高导电性和二次电子发射C.美化标本外观D.固定标本结构81、醋酸铀染色的最佳pH范围是？A.pH3.0～4.0B.pH5.0～6.0C.pH7.0～8.0D.pH9.0～10.082、电镜观察中，标本室真空度要求为？A.大气压B.10⁻¹～10⁻²PaC.10⁻⁴～10⁻⁷PaD.10⁻¹⁰～10⁻¹²Pa83、超薄切片切片机的主要类型是？A.旋转式切片机B.滑行式切片机C.冷冻超薄切片机D.钻石刀切片机84、扫描电镜的电子枪类型不包括？A.钨灯丝B.六硼化镧C.场发射D.氙灯85、戊二醛固定的最佳pH值为？A.pH4.0～5.0B.pH6.0～7.4C.pH8.5～9.5D.pH10.0～11.086、电镜技术中，"负染"技术主要用于？A.观察细胞内部结构B.观察病毒和生物大分子表面形态C.固定组织块D.切片染色87、柠檬酸铅染色的主要原理是？A.与脂类结合B.与磷酸基团和氨基结合增强对比C.固定蛋白质D.脱水作用88、扫描电镜观察细胞表面结构时，样品经锇酸固定后进行脱水，常选用的脱水剂及其梯度为A.乙醇梯度脱水，从50%逐步升至100%B.丙酮梯度脱水，从30%逐步升至100%C.乙醇梯度脱水，从30%逐步升至100%D.甲醇梯度脱水，从40%逐步升至100%89、透射电镜超薄切片常用刀具为A.玻璃刀或金刚石刀B.镍铬合金刀C.不锈钢手术刀片D.陶瓷薄片刀90、电镜样品包埋常用的树脂为A.石蜡和明胶混合液B.环氧丙烷和聚乙二醇C.环氧树脂如Epon812或SpurrD.羧甲基纤维素和甘油91、固定电镜样品时，戊二醛与锇酸联合使用的优势在于A.戊二醛固定脂质，锇酸固定蛋白质B.戊二醛交联蛋白质，锇酸固定脂类并增强对比C.两者作用相同可任意替换D.戊二醛杀菌，锇酸脱水92、超薄切片经铅铀双重染色后，在透射电镜下呈现深色结构的物质是A.糖原和核酸B.脂类和核蛋白C.胶原蛋白和弹性纤维D.线粒体膜和粗面内质网93、电镜样品脱水过程中，若脱水不彻底会导致A.切片易碎难以收集B.包埋剂渗透不良和切片膨胀C.样品着色过深D.细胞器发生自溶94、锇酸固定液的常用浓度为A.0.5%至1%B.2%至4%C.5%至10%D.15%至20%95、采用冷冻置换法处理电镜样品时，主要目的是A.避免化学固定造成的结构变形B.增加样品电子散射能力C.快速脱水并替代有机溶剂D.杀灭样品中微生物96、透射电镜分辨率主要取决于A.加速电压和物镜电磁透镜性能B.样品厚度与染色深度C.观察室的真空度D.底片感光速度97、电镜观察时样品必须保持高真空状态，主要原因是A.防止电子束与气体分子碰撞散射B.抑制细菌繁殖C.降低样品温度D.减少操作者辐射暴露98、柠檬酸铅染色液中需加入氢氧化钠调节pH值，其主要作用是A.促进铅盐溶解并形成有效染色离子B.防止铅盐沉淀分解C.增强组织抗氧化能力D.中和固定液残留酸度99、扫描电镜样品干燥时，临界点干燥法的核心原理是A.利用二氧化碳在临界状态下气液界面消失避免表面张力破坏B.高温快速蒸发水分C.真空抽吸直接除去液体D.化学试剂置换后立即风干100、电镜样品经锇酸固定后呈现黑色，这是因为A.锇元素原子序数高电子散射能力强B.锇酸本身为黑色染料C.样品含黑色素沉着D.固定过程中产生碳化

参考答案及解析1.【参考答案】B【解析】骨龄落后实际年龄2岁及以上提示发育迟缓，常见于营养状况不良、慢性疾病或内分泌功能异常等情况。正常发育变异通常在1岁以内，早熟者骨龄常超前于实际年龄，肥胖症以体重异常增加为主要表现。结合题干信息，发育迟缓是最可能的判断。

以上是随机生成的20道题目，涵盖了生长发育调查和评价的不同方面。2.【参考答案】B【解析】戊二醛是电镜观察中最常用的固定剂，能有效固定细胞内的蛋白质、脂类等结构，保持细胞超微结构的完整性。甲醛主要用于光镜观察，固定效果不如戊二醛。3.【参考答案】B【解析】超薄切片厚度一般为50~100nm，这样电镜电子束才能穿透样品。切得太厚电子无法穿透，图像模糊；切得太薄则结构不完整。常规石蜡切片厚度为4~6μm，远大于超薄切片。4.【参考答案】A【解析】电镜观察中组织块一般切割为1mm×1mm×1mm左右的小块，利于固定液充分渗透。块太大则固定不充分，内部结构保存差；块太小则操作困难。5.【参考答案】B【解析】电镜标本脱水常用乙醇或丙酮梯度脱水，从低浓度逐步过渡到高浓度，最后用纯脱水剂置换组织中的水分，为后续包埋做准备。6.【参考答案】B【解析】扫描电镜利用电子束扫描样品表面，收集二次电子成像，主要用于观察样品表面的三维形态结构。透射电镜才用于观察内部超微结构。7.【参考答案】C【解析】醋酸铀和柠檬酸铅是电镜切片最常用的双重染色方法。铀盐主要染核酸和膜结构，铅盐主要染蛋白质，两者配合可增强图像的对比度。8.【参考答案】B【解析】低温固定（如冰冻固定）可以减少化学固定过程中产生的人工假象，更好地保存细胞的天然超微结构，尤其适用于酶组织和代谢活性观察。9.【参考答案】C【解析】电镜制样所用固定液和缓冲液的渗透压应与体液基本相等，以避免细胞因渗透压改变而发生肿胀或皱缩，影响超微结构的真实保存。10.【参考答案】B【解析】线粒体嵴是线粒体内膜向内折叠形成的结构，属于亚细胞器水平的超微结构，光镜下不可见，需透射电镜才能清晰观察。细胞核、细胞质、细胞膜和核仁在光镜下即可观察到。11.【参考答案】C【解析】环氧树脂是电镜超薄切片最常用的包埋剂，具有渗透性好、硬度适中、切片性能优良等优点。石蜡包埋主要用于光镜观察，不能用于超薄切片。12.【参考答案】B【解析】脱水不彻底时组织中的水分未能完全去除，会影响包埋剂的渗透，导致包埋不均匀，切片时容易出现碎裂、厚度不均等问题。13.【参考答案】A【解析】透射电镜利用电子束作为光源，波长极短，分辨率可达0.2nm左右，远高于光镜的约0.2μm，能观察到更细微的细胞超微结构。14.【参考答案】D【解析】电镜固定液应具有良好的渗透性，能迅速穿透组织，对组织损伤小，并能良好保存超微结构。固定后组织硬度高不利于切片，这不是固定液的理想特点。15.【参考答案】B【解析】电镜超薄切片刀通常采用钻石刀或特制锋利钢刀，能切出50~100nm的薄片。玻璃刀适用于切较大块的组织，剃须刀片等不够锋利，无法满足超薄切片要求。16.【参考答案】A【解析】电镜下细胞膜呈现暗-亮-暗三层结构，总厚度约7.5nm，这一发现提出了单位膜模型，是细胞生物学的重要基础发现之一。17.【参考答案】A【解析】扫描电镜样品导电处理常用金或金钯合金喷镀，既具有良好的导电性，又能获得均匀的镀膜效果。其他材料要么导电性差，要么镀膜不均匀。18.【参考答案】B【解析】脂滴在电镜下通常电子密度低，呈现透亮区域。糖原颗粒、线粒体、核糖体和溶酶体等结构由于含有较多蛋白质或核酸，通常电子密度较高，在图像中呈现深色。19.【参考答案】B【解析】电镜标本固定后需用缓冲液漂洗，以去除残留的固定液，防止固定液继续作用影响组织结构。蒸馏水渗透压低会导致细胞肿胀，不宜使用。20.【参考答案】A【解析】透射电镜和扫描电镜的电子均来自热灯丝（如钨丝或六硼化镧）受热后发射电子，经加速电压加速后形成电子束照射样品。21.【参考答案】A【解析】超薄切片通常在水面展开后收集于铜网上，铜网孔径一般为200目左右，能支撑超薄切片且对电子束穿透影响小。载玻片和盖玻片用于光镜制片。22.【参考答案】B【解析】化学固定法是透射电镜样品制备中最常用的固定方法，主要使用戊二醛和锇酸双重固定。戊二醛主要用于固定蛋白质，锇酸用于固定脂类并增强电子散射能力。冷冻固定法虽能快速固定但设备要求高，应用不如化学固定广泛。微波和辐射固定法在常规病理电镜技术中极少使用。23.【参考答案】B【解析】超薄切片是透射电镜观察的关键步骤，切片厚度通常控制在50~90纳米，以便电子束能够穿透样品。0.1~0.5微米为半薄切片范围，常用于光镜定位；5~10微米是常规石蜡切片厚度；100~200纳米则过厚，不利于电子穿透和图像清晰度。24.【参考答案】B【解析】玻璃刀由平板玻璃制成，折断后可形成极锋利的刃口，其锋利程度优于钻石刀，适合大批量切片。虽然玻璃刀刃口相对脆弱、不能重复使用，但成本低廉、便于制备。钻石刀虽可重复使用且耐用，但价格昂贵。25.【参考答案】C【解析】锇酸（四氧化锇）是电镜常用的secondaryfixative，主要作用是固定脂类成分，防止脂类在后续处理中丢失，同时锇原子具有高原子序数，能增加样品的电子散射能力，提高反差。蛋白质的固定主要由戊二醛完成。26.【参考答案】C【解析】丙酮因其脱水效果好、渗透速度快、对树脂聚合反应影响小，是超薄切片制样中最常用的脱水剂。乙醇也常用但脱水速度较慢，甲醇和异丙醇在电镜制样中较少作为主要脱水剂使用。丙酮还能更好地保持细胞超微结构。27.【参考答案】B【解析】Epon812是最常用的环氧树脂包埋剂之一，其固化条件通常为60℃incubation48小时或更长时间，可获得硬度适中、切片性能良好的包埋块。45℃和37℃温度过低，树脂难以充分固化；80℃则可能导致组织过热变形或树脂脆化。28.【参考答案】B【解析】透射电镜的分辨力主要取决于电磁透镜的数值孔径和电子波长。数值孔径越大，分辨力越高。加速电压影响电子波长，间接影响分辨力但不是决定性因素。染色程度和真空度虽重要，但不决定仪器的理论分辨极限。29.【参考答案】B【解析】醋酸铀是超薄切片常用的正染色剂，通常在室温下孵育15~30分钟，使铀离子与细胞内的核酸、蛋白质等成分结合，增加电子散射。时间过短染色不足，时间过长则背景过深。柠檬酸铅随后孵育10分钟左右完成双染。30.【参考答案】B【解析】临界点干燥法是扫描电镜样品制备中最常用的干燥方法，利用二氧化碳在临界点（31℃、7.38MPa）时气液界面消失的特性，避免表面张力破坏样品结构。空气自然干燥会产生表面张力导致样本变形，冷冻干燥虽可用但不如临界点干燥普遍。31.【参考答案】B【解析】重金属（如铅、铀、锇）具有高原子序数，对电子有较强的散射能力。染色后这些重金属沉积在细胞的特定结构中，使电子透过率产生差异，从而增强图像的明暗对比和反差。这是电镜图像形成的重要基础原理。32.【参考答案】C【解析】核糖体直径约20~30纳米，远低于光学显微镜的分辨极限（约200纳米），必须在电子显微镜下才能观察清楚。细胞核、线粒体和高尔基体的尺寸较大，光学显微镜下可见轮廓或大致形态，但无法看到其超微结构细节。33.【参考答案】D【解析】超薄切片质量取决于刀锋锋利度、切片厚度调节精度、样本硬度适宜性以及切片技巧等因素。显微镜放大倍数影响的是观察效果，而非切片本身的质量。样本过硬或过软都会影响切片完整性，需通过调整包埋配方来控制。34.【参考答案】B【解析】戊二醛作为电镜一级固定剂，最常用浓度为2.5%，以0.1mol/L磷酸缓冲液配制，pH调至7.2~7.4。浓度过低固定效果差，过高可能导致组织硬化过度。10%常用于光镜组织固定，50%为原液储存浓度而非工作浓度。35.【参考答案】B【解析】透射电镜的电子束穿透超薄切片，观察样本内部的超微结构；扫描电镜的电子束在样本表面扫描，通过收集二次电子获得表面三维形貌信息。两者均使用电子束，透射电镜分辨率通常高于扫描电镜，透射电镜样本不需镀膜。36.【参考答案】B【解析】柠檬酸铅溶液暴露于空气中时，铅离子会与二氧化碳反应生成不溶性的碳酸铅沉淀，导致染色液浑浊失效。因此染色液应现配现用或在惰性气体保护下保存，避免与空气长时间接触。这是电镜染色操作中的重要注意事项。37.【参考答案】B【解析】负染技术是将样品嵌入重金属盐（如磷钼酸、醋酸铀）形成的负背景中，电子不易透过重金属区域，使样品呈现亮色背景上的暗影，主要用于观察病毒、细菌、蛋白质复合物等微小颗粒的表面形态和大小，无需切片和包埋。38.【参考答案】D【解析】琼脂包埋介质（Agaroseembeddingmedium）是一种低聚合收缩、对抗原性破坏小的包埋材料，适合用于免疫电镜研究，能较好地保留抗原的免疫反应性。传统环氧树脂包埋剂如Epon812和Spurrresin聚合过程产生的酸性和高温会破坏抗原表位。39.【参考答案】B【解析】脱水是超薄切片制样的关键步骤，目的是用有机溶剂（如丙酮或乙醇）逐步置换组织中的水分，以便后续树脂包埋。渗透脱水采用梯度浓度方案，从低浓度到高浓度逐步过渡，避免组织急剧收缩或变形，确保超微结构完整。40.【参考答案】B【解析】电镜样品室需要高真空环境，真空度不足时电子束会与残留气体分子碰撞发生散射，导致图像模糊、反差下降、出现噪声斑点，甚至损坏灯丝。高真空也是防止样品污染和氧化的必要条件，真空系统故障会直接影响成像质量。41.【参考答案】A【解析】透射电镜分辨率可达0.1~0.2纳米，能观察大分子和原子排列；扫描电镜分辨率通常在2~10纳米，主要观察表面形貌。透射电镜分辨率远高于光学显微镜。分辨率不仅取决于电子束能量（加速电压），还与电磁透镜的质量、像差校正水平密切相关。42.【参考答案】B【解析】染色时间过长会使重金属盐过度沉积，导致背景颜色过深，反而掩盖细胞内的精细结构，降低图像的可读性。染色应遵循适度原则，不同组织、不同部位可能需要调整染色时间和浓度。过度染色还会增加清洗难度，影响最终观察效果。43.【参考答案】B【解析】冰冻切片用于术中快速诊断，但对于需要保存酶活性的组织，通常不做化学固定，而是直接冰冻切片后进行酶组织化学染色。常规病理检查需先固定再包埋切片。骨骼组织需脱钙处理。脂肪组织固定后可直接石蜡包埋。酶活性保存是关键考量因素。44.【参考答案】C【解析】组织收缩常见原因包括固定液浓度过高（如酒精浓度过高）、固定时间过长、固定温度过低、固定前未清洗血液导致固定不充分。组织块大小主要影响固定是否充分，而非直接导致收缩。固定后组织肿胀或收缩均可影响切片质量，需控制固定条件。45.【参考答案】A【解析】福尔马林色素是固定后出现的棕红色沉淀物，主要由甲醛氧化生成的甲酸与血红蛋白结合形成甲醛血红蛋白所致。预防方法是使用新鲜配制的中性缓冲福尔马林，或固定后尽快转入酒精。酒精可溶解去除福尔马林色素。该色素会影响切片观察和染色。46.【参考答案】B【解析】戊二醛是电镜观察中最常用的初固定剂，能良好保存细胞超微结构。其固定速度快、渗透性适中，对蛋白质交联效果好，能保持细胞器形态完整。甲醛主要用于光镜，锇酸为后固定剂，苦味酸应用较少。47.【参考答案】B【解析】超薄切片需控制在50~100纳米范围内，以适应电子束穿透能力。该厚度既能保证电子穿透样本，又能保留足够的超微结构细节。过厚会导致电子无法穿透，过薄则结构信息不足。48.【参考答案】B【解析】锇酸的主要特点是能与脂类物质发生反应，使其不溶于有机溶剂，从而在脱水过程中保持脂质结构不被破坏。同时锇酸也有增强电子散射的作用，但其核心独特价值在于保存脂类。49.【参考答案】B【解析】金刚石刀具有极高的硬度和耐磨性，刃口锋利且耐用，是超薄切片最常用的刀具。其使用寿命远超玻璃刀和瓷刀，能获得质量稳定的超薄切片，不锈钢刀硬度不足易磨损。50.【参考答案】B【解析】丙酮是电镜标本脱水最常用的脱水剂，因其渗透速度快、与环氧包埋剂混溶性好、对组织收缩作用小。乙醇虽也可用，但残留水分会影响包埋效果，丙酮脱水更为彻底。51.【参考答案】A【解析】Epon812是一种环氧树脂类包埋剂，具有良好的渗透性、低收缩率和优异的切片性能，是电镜超薄切片最常用的包埋介质。它固化后硬度适中，能支持超薄切片的制备。52.【参考答案】B【解析】透射电镜的理论分辨率受电子波长限制，实际分辨率主要受物镜球差和色差等像差因素影响。物镜质量是决定电镜分辨能力的核心因素，加速电压影响电子波长但非决定性因素。53.【参考答案】B【解析】扫描电镜观察前需在样品表面喷镀金、铂或碳等导电金属膜，以防止电荷积累并增强二次电子发射信号。未经镀膜的非导电样品表面会产生荷电效应，影响成像质量。54.【参考答案】C【解析】胶体金是免疫电镜最常用的标记物，其颗粒大小可调、电子密度高、对组织穿透力好且不影响抗体活性。荧光素和酶主要用于光镜免疫组化，放射性同位素应用较少且有安全防护问题。55.【参考答案】C【解析】切片厚度不均是超薄切片常见问题，可能由刀刃缺口、样品块形状不当或切片机调节不准导致。切片刀过新反而有助于获得均匀切片，样品过硬或切片太薄通常不会导致厚度不均。56.【参考答案】B【解析】电子枪是电镜的核心部件之一，通过热发射或场发射产生电子束。常用的钨丝灯丝或六硼化镧阴极在加热或强电场作用下发射电子，经加速电压加速后形成电子束。57.【参考答案】B【解析】负染技术是将样品置于重金属盐溶液中，干燥后重金属包围样品形成负像，主要用于观察病毒颗粒、细菌鞭毛等细小结构。该方法操作简便，能快速呈现样品的表面形态特征。58.【参考答案】A【解析】铜网是超薄切片捞取最常用的载网材质，具有良好的导电性和机械强度，孔径规格多样。铜网电子散射适中，不会影响样品衬度观察。塑料网机械强度不足，铝网和铁网应用较少。59.【参考答案】B【解析】铅铀双染是透射电镜最常用的重金属染色方法，醋酸铀与柠檬酸铅分别染不同的细胞结构，能产生良好的电子密度差异，清晰区分细胞器膜结构和胞浆成分，提高图像衬度。60.【参考答案】C【解析】提高加速电压可缩短电子波长并增强电子穿透能力，使更厚的样品可被观察。高电压下电子能量更高，分辨率也有所提升，但过高的电压可能造成样品损伤，需根据样品性质选择合适电压。61.【参考答案】A【解析】脱水不彻底时组织内残留的水分会与环氧包埋剂发生反应，导致包埋剂聚合不完全、渗透不良，切片时易出现碎裂、卷曲等问题。彻底脱水是确保包埋质量的关键步骤。62.【参考答案】B【解析】透射电镜图像的衬度源于样品各部位对电子的散射能力差异。重金属染色的区域散射更多电子，在像平面上呈现较暗区域，未染色区域透过的电子多则呈亮区，从而形成结构对比。63.【参考答案】B【解析】临界点干燥利用二氧化碳在临界状态下气液界面消失的特性，避免传统空气干燥中液体蒸发产生的表面张力对样品造成收缩和变形。该方法特别适用于需要保持精细结构完整的样品。64.【参考答案】B【解析】扫描电镜由于使用高深径比的电磁透镜和逐点扫描成像，其景深远大于光学显微镜，可达毫米级。这使得扫描电镜能够清晰呈现粗糙或不平整样品表面的三维形貌特征。65.【参考答案】B【解析】锇酸作为后固定剂在戊二醛初固定后使用，能进一步固定脂类和蛋白质，同时增强标本的电子密度，有利于后续观察。后固定时间通常为1~2小时，温度控制在低温条件下进行。66.【参考答案】B【解析】超薄切片机的进给量通常设定在50~100纳米，与目标切片厚度相匹配。精确控制进给量是获得均匀超薄切片的关键，设置过小会降低切片效率，过大则切片过厚影响电子穿透。67.【参考答案】A【解析】高真空环境确保电子束在传播过程中不与气体分子碰撞发生散射，从而保证图像的清晰度和分辨率。真空度不足会导致电子平均自由程缩短，成像质量显著下降甚至无法成像。68.【参考答案】B【解析】透射电镜分辨率主要受电磁透镜的球差和衍射极限限制。现代透射电镜的理论分辨率可达0.1～0.2nm，实际应用中受透镜像差影响较大。电压越高电子波长越短，理论上分辨率越高，但像差是制约实际分辨率的关键因素。标本厚度影响图像质量但不决定分辨率上限。69.【参考答案】B【解析】戊二醛为一级固定剂，主要固定蛋白质，穿透力较弱；锇酸为二级固定剂，可固定脂类物质并增加标本导电性。两者联合使用可达到最佳固定效果。甲醛穿透力强但固定效果不如戊二醛；乙醇和丙酮主要用于脱水而非固定。70.【参考答案】B【解析】超薄切片厚度一般为50～90nm，这是电子束能够有效穿透并形成清晰图像的适宜厚度范围。1～5nm过薄难以满足观察需求；200nm以上电子束穿透困难，图像模糊；500～1000nm已超出超薄切片范畴，属于半薄切片或更厚切片。71.【参考答案】B【解析】扫描电镜利用电子束扫描标本表面，收集二次电子信号成像，主要用于观察标本表面的三维立体形态和细微结构。透射电镜才用于观察细胞内部超微结构。扫描电镜景深大、立体感强，是表面形态研究的理想工具。72.【参考答案】B【解析】醋酸铀和柠檬酸铅是电镜超薄切片最常用的双重染色剂。醋酸铀主要与核酸和蛋白质结合，增强膜结构对比度；柠檬酸铅主要与磷酸基团结合，增强一般结构对比度。苏木精-伊红为光镜染色法，不适用于电镜。73.【参考答案】B【解析】脱水是电镜标本制备的关键步骤，常用梯度乙醇（30%、50%、70%、90%、100%）或丙酮进行逐级脱水。蒸馏水和生理盐水为水相介质，不能用于脱水；缓冲液用于维持pH值。脱水不彻底会影响包埋剂渗透，导致切片困难。74.【参考答案】B【解析】Epon812是电镜超薄切片最常用的环氧树脂肪包埋剂，具有硬度适中、切片性能好、稳定性高的特点。石蜡用于光镜组织切片；O.C.T.和Tissue-Tek为冰冻切片包埋剂，不适用于超薄切片制备。75.【参考答案】C【解析】透射电镜加速电压一般在40～120kV范围，常用60～80kV用于常规生物标本观察，100kV以上用于高分辨率研究。电压过低电子穿透能力不足；电压过高可能损伤生物标本。扫描电镜工作电压通常在0.5～30kV范围。76.【参考答案】B【解析】锇酸作为二级固定剂，主要作用是固定脂类物质、核酸，并在标本表面形成导电层，减少充电效应。戊二醛才是主要固定蛋白质的固定剂。锇酸不具有脱水或染色功能，其在标本中的作用是固定的补充。77.【参考答案】B【解析】半薄切片（厚度约1～2μm）用光镜观察，主要用于定位感兴趣区域，指导超薄切片时选择正确的切取位置。半薄切片太厚无法用于电镜观察。其染色常用甲苯胺蓝等，便于在光镜下识别细胞结构。78.【参考答案】B【解析】电镜超薄切片刀通常采用金刚石刀或高质量不锈钢刀，刀刃锋利且硬度高，可切出50～90nm的薄片。玻璃刀主要用于半薄切片。塑料和陶瓷材质无法满足超薄切片对刀刃锋利度和硬度的要求。79.【参考答案】B【解析】临界点干燥利用液态CO₂在临界状态下气液界面消失的原理，避免了普通空气干燥时表面张力对标本的破坏，特别适合扫描电镜标本制备。该方法需要专用设备，操作较复杂，成本较高，但能保持标本原有形态。80.【参考答案】B【解析】扫描电镜观察非导电标本时，需喷镀金、铂或碳化等导电膜层，以减少电荷积累（充电效应），并增强二次电子发射，提高图像质量。镀层厚度通常为2～10nm，过厚会掩盖标本细节。81.【参考答案】C【解析】醋酸铀染色最佳pH为7.0～8.0，在此范围内铀离子能与核酸磷酸基团和蛋白质有效结合，增强膜结构和核糖体的染色效果。pH过低染色效果差；pH过高可能导致沉淀。染色时间通常为10～30分钟。82.【参考答案】C【解析】透射电镜标本室真空度通常要求10⁻⁴～10⁻⁷Pa，以保证电子束在真空中传播而不被气体分子散射。真空度不足会导致图像模糊、灯丝寿命缩短。扫描电镜真空度要求略低，但仍在相似范围。83.【参考答案】C【解析】超薄切片最常用的是冷冻超薄切片机（如LeicaUC7），配合钻石刀或玻璃刀完成切片。旋转式和滑行式切片机主要用于石蜡半薄切片。钻石刀是切片刀具类型而非切片机类型。现代超薄切片机多采用电脑控制。84.【参考答案】D【解析】扫描电镜常用电子枪类型包括钨灯丝、六硼化镧（LaB₆）和场发射枪（冷场或热场）。氙灯是光源而非电子枪，常用于光镜照明系统。场发射电子枪分辨率最高，钨灯丝成本最低，六硼化镧介于两者之间。85.【参考答案】B【解析】戊二醛固定最佳pH为6.0～7.4，常用0.1mol/L磷酸缓冲液配制。pH过低固定效果差；pH过高戊二醛易聚合失活。固定时间一般为2小时以上，浓度常用2.5%。固定后需用缓冲液充分冲洗以去除残留戊二醛。86.【参考答案】B【解析】负染技术是将标本置于重金属盐