(4.1)-病理检验技术

细胞学检验技术讨论宫颈癌曾经是威胁女性健康的第一大杀手。现在死亡率低于乳腺癌，排名第二。以宫颈癌为例探讨：1、为什么宫颈癌死亡率降低？2、细胞学检验的优势和劣势？3、细胞学检验和组织学检验的关系？第一节概述

细胞病理学又称诊断细胞学或临床细胞学，是通过观察细胞的结构和形态来研究和诊断疾病的一门科学。

与组织病理学检验关系十分密切。根据细胞标本来源不同目前可分为1、脱落细胞学检验2、细针穿刺吸取细胞学检验一、优点与不足(一)优点

1、方法简单易学，容易掌握。

2、设备简单、容易推广，费用低。

3、安全，患者痛苦少或无痛苦。

4、制片技术简捷，报告快速。5、癌细胞检出率较高（可达80％～90％）(二)不足1、取材不准，涂片过厚过薄，影响诊断结果2、难以分辨其微细结构3、不能全面观察病变组织的结构层次4、不一定能确定肿瘤发生的具体部位（尿中癌细胞）5、不能判断肿瘤浸润的程度和病灶范围6、脱落细胞易退变，易受人为因素影响第二节标本的采集和制片一、标本采集

标本采集是脱落细胞学检验成功与否的重要环节。

取材的好坏，直接关系到检查的准确性。(一)标本采集的原则1．采集目标细胞要尽可能直接从病变区域采集细胞。2．采集的标本要新鲜，要防止细胞自溶或腐败。3．采集标本时要避免污染，减少干扰物(如血液、黏液等)混入。4．采集的方法应简便、轻柔，要减少受检者痛苦，避免引起并发症，防止病变(特别是肿瘤)进一步播散。(二)标本采集的方法1．直视采集法即在肉眼直视下，利用刮片轻刮、吸管吸取等方法直接采集标本。2．摩擦法3．穿刺抽吸法主要利用穿刺针进行抽吸采取细胞标本。5．灌洗法

二、涂片

细胞学检验标本的制作一般采用涂片的方法，即将采集来的样品直接涂抹到载物片上。(一)操作注意事项1．操作要轻巧，避免人为损伤脱落细胞。2．厚薄要适宜。3．涂片应均匀。4．同一标本至少一次涂两张涂片，要做好标记，刻写编码，防止错号与漏诊的发生。(二)涂片操作方法1．推片法

注意：因癌细胞体积较大，常位于细胞涂膜的尾部，因此推片时不要将尾部推出玻片外。

2.涂抹法

最常用的方法，常用棉签棒、针头或吸管将标本均匀涂抹于玻片上。注意：涂片动作应轻柔利索，沿一个方向，一次涂抹而成。

其他：拉片法、喷射法、印片法三、固定目的：1、保持细胞的自然形态2、防止细胞自溶或细菌性腐败3、保持细胞内蛋白质、糖等成分易于着色(一)常用固定液1．95％乙醇固定液

最常用的固定液。但渗透性较差，如加入1％量的冰醋酸，可增强固定效果，并有对抗乙醇固定的收缩作用。2.乙醚乙醇固定液

渗透性强，固定效果好，适于一般细胞学染色，如巴氏染色和HE染色。

[配方]95％乙醇49.5mL

乙醚49.5mL

醋酸l0mL

3.三氯甲烷乙醇固定液

又称卡诺(Carnoy)固定液，穿透力强，固定效果好。试剂价格较贵，配置麻烦，一般只用于核酸染色、糖原染色和黏蛋白染色。

[配方]100％乙醇60ml

三氯甲烷30ml

醋酸10ml

4.甲醇

固定效果好，结构清晰，常用于瑞氏、MGG或免疫组化染色的自然干燥涂片的预固定。(二)固定方法1．带湿固定法即涂片尚未干燥时即进行固定的方法，适用于痰、宫颈刮片及食管拉网涂片的固定，不适用于太稀薄的标本。

2．干燥固定法待涂片自然干燥，再滴加或浸入固定液进行固定。(三)注意事项1、固定液要根据染色要求，选用合适的固定液。

如巴氏或HE染色，应选用95％乙醇固定。2、防止交叉污染，保持固定液浓度。3、全部细胞干燥后再固定，染色后细胞肿胀、核染色质结构模糊不清，此称为人为退变。4．一般固定不少于15min（穿透力强的固定液固定后不可过夜染色）

四、染色细胞涂片常用的染色方法有HE和巴氏染色等。对阳性或认为有保存价值的涂片需要加盖玻片进行封固保存。(一)巴氏染色(Pap)染色法巴氏染色（Pa）上皮细胞细胞核深蓝色，胞质随细胞类型和分化程度不同可呈橘黄、粉红和蓝绿色，红细胞鲜红色，白细胞细胞质呈淡蓝色，胞核呈深蓝黑色黏液粉红或淡兰色。常用于观察女性雌激素对阴道上皮的影响。(二)苏木素-伊红染色

适用于各种细胞的染色，是细胞学检验中最常采用的方法。

本法细胞质色彩不丰富，不宜用于观察阴道涂片的雌激素水平测定。（三）瑞氏染色最常用于：血液、骨髓涂片。

染色细胞结构清晰，能较好地显示细胞质及其中颗粒，经乙醇固定，细胞不收缩。

对较厚的涂片染色不佳，故一般不适用于痰和宫颈涂片的染色。染色结果：细胞核染紫红色，细胞质染成紫蓝色，黏液染粉红或淡蓝色。瑞氏染色（Wright）细胞