2026年物医药细胞培养技术员岗位试题(附答案)

2026年物医药细胞培养技术员岗位试题(附答案)一、单项选择题（每题2分，共20题，40分）1.以下哪种成分不属于基础培养基的常规添加物？A.氨基酸B.维生素C.胎牛血清D.无机盐答案：C2.细胞培养过程中，若显微镜下观察到培养液浑浊、pH值迅速下降，最可能的污染类型是？A.支原体污染B.细菌污染C.真菌污染D.病毒污染答案：B3.贴壁细胞传代时，通常建议在细胞汇合度达到多少时进行？A.10%-20%B.30%-40%C.70%-80%D.90%-100%答案：C4.细胞冻存液的经典配方（体积比）是？A.90%培养基+10%DMSOB.80%培养基+10%FBS+10%DMSOC.70%培养基+20%FBS+10%DMSOD.50%培养基+40%FBS+10%DMSO答案：C5.支原体污染的检测方法中，灵敏度最高且可定量的是？A.相差显微镜观察B.PCR检测法C.DAPI荧光染色法D.培养法答案：B6.消化贴壁细胞时，胰酶-EDTA溶液中EDTA的主要作用是？A.激活胰酶活性B.螯合Ca²+、Mg²+，破坏细胞间连接C.调节溶液pH值D.防止细胞破裂答案：B7.CO2培养箱中CO2的主要作用是？A.维持细胞呼吸B.调节培养基pH值（与HCO3-缓冲对协同）C.促进细胞贴壁D.抑制细菌生长答案：B8.原代细胞与传代细胞相比，最显著的特点是？A.增殖能力更强B.保留更接近体内的生物学特性C.更容易发生接触抑制D.对培养基要求更低答案：B9.无血清培养基的主要优势是？A.成本更低B.成分明确，减少批间差异C.无需添加生长因子D.更适合原代细胞培养答案：B10.采用台盼蓝染色法进行细胞计数时，活细胞呈现的颜色是？A.蓝色B.无色C.红色D.绿色答案：B11.培养悬浮细胞时，若需扩大培养体积，通常建议传代比例不超过？A.1:2B.1:5C.1:10D.1:20答案：C12.细胞冻存时，最佳降温速率是？A.0.1℃/minB.1℃/minC.10℃/minD.100℃/min答案：B13.以下哪种操作会增加细胞污染风险？A.超净工作台使用前紫外照射30minB.手消毒后直接接触培养瓶瓶口C.培养基分装时保持瓶口距离火焰2-3cmD.离心管使用前高压灭菌答案：B14.检测细胞活性时，MTT法的原理是？A.检测细胞内ATP含量B.活细胞线粒体将MTT还原为甲瓒C.台盼蓝排斥实验D.流式细胞术检测膜通透性答案：B15.培养干细胞时，为维持其未分化状态，培养基中通常需添加？A.抗生素B.血清C.bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）D.胰酶答案：C16.细胞培养用超纯水的电导率应低于？A.0.1μS/cmB.1μS/cmC.10μS/cmD.100μS/cm答案：A17.若细胞出现“脱壁死亡”，可能的原因不包括？A.消化时间过长B.培养基pH值过高C.血清浓度过高D.支原体污染答案：C18.悬浮细胞传代时，常用的细胞收集方法是？A.直接吹打B.胰酶消化C.离心（1000rpm，5min）D.过滤答案：C19.细胞培养室的环境温度通常控制在？A.18-22℃B.25-28℃C.30-32℃D.37℃答案：A20.以下哪种细胞系属于贴壁依赖型？A.CHO（中国仓鼠卵巢细胞）B.293T（人胚肾细胞）C.Jurkat（人T淋巴细胞）D.U937（人单核细胞）答案：A二、填空题（每空1分，共15空，15分）1.DMEM培养基（高糖型）中葡萄糖浓度通常为______g/L。答案：4.52.细胞冻存时，常用的冷冻保护剂除DMSO外，还包括______。答案：甘油3.胰酶消化贴壁细胞的常用浓度为______（质量体积比）。答案：0.05%-0.25%4.支原体的直径范围约为______μm，普通显微镜无法直接观察。答案：0.2-0.35.无血清培养基中常用的生长因子包括EGF（表皮生长因子）、FGF（成纤维细胞生长因子）和______（至少写一种）。答案：IGF（胰岛素样生长因子）/PDGF（血小板衍生生长因子）6.细胞传代时，若需保留部分原代细胞继续培养，应采用______传代法。答案：分瓶7.CO2培养箱的湿度应维持在______左右，以防止培养基蒸发。答案：95%8.台盼蓝染色法中，染料无法透过______的细胞膜，因此仅死细胞被染色。答案：完整（或活细胞）9.原代细胞首次传代后，通常被称为______细胞。答案：传代10.细胞培养中最常见的微生物污染是______和______（需答两类）。答案：细菌；支原体11.悬浮细胞的生长曲线通常包括延迟期、对数生长期、______和衰亡期四个阶段。答案：平台期12.细胞复苏时，从液氮中取出冻存管后应立即放入______℃水浴快速融化。答案：3713.检测细胞支原体污染的“金标准”方法是______。答案：培养法14.为避免细胞“接触抑制”，贴壁细胞传代时的接种密度通常为______（细胞数/mL）。答案：5×10⁴-2×10⁵三、简答题（每题5分，共5题，25分）1.简述胎牛血清（FBS）在细胞培养中的主要作用。答案：①提供细胞生长必需的生长因子（如EGF、FGF）、激素（如胰岛素）和贴壁因子（如纤维连接蛋白）；②中和培养基中的毒性物质（如重金属离子）；③提供缓冲能力，稳定pH值；④补充细胞无法自身合成的营养成分（如某些氨基酸、脂类）；⑤保护细胞免受机械损伤（如吹打时的剪切力）。2.如何判断细胞培养过程中是否发生污染？若确认污染，应采取哪些处理措施？答案：判断方法：①肉眼观察：培养基浑浊（细菌/真菌污染）、颜色异常（pH迅速变化）；②显微镜观察：细菌可见运动的杆状/球状颗粒，真菌可见菌丝；③支原体污染需通过PCR或DAPI染色检测；④细胞形态异常（皱缩、脱壁、空泡化）。处理措施：①立即标记污染细胞，与其他细胞隔离；②污染的培养基、耗材高压灭菌后丢弃；③超净工作台用75%酒精擦拭，紫外照射30min；④若为珍贵细胞，可尝试抗生素（如支原体清除剂）处理，但需评估对实验的影响；⑤记录污染类型和来源，排查操作漏洞（如培养基过期、操作不规范）。3.无血清培养基与含血清培养基相比，有哪些优缺点？答案：优点：①成分明确，减少批间差异，利于实验结果的可重复性；②降低血清中未知因子对细胞功能的干扰（如分化诱导）；③减少后续纯化难度（如蛋白质药物生产中无需去除血清蛋白）；④降低病毒/支原体污染风险。缺点：①成本较高（需添加重组生长因子）；②对细胞适应能力要求高，部分细胞需逐步驯化；③营养成分单一，某些原代细胞或干细胞难以维持活性；④缺乏血清的保护作用，细胞对剪切力、pH波动更敏感。4.简述贴壁细胞传代的关键操作步骤（以HeLa细胞为例）。答案：①观察细胞：显微镜下确认汇合度（70%-80%），无污染；②弃旧培养基，PBS洗涤1-2次（去除血清，避免抑制胰酶）；③加0.25%胰酶-EDTA（覆盖细胞层），37℃消化30s-2min（镜下观察细胞变圆、边缘收缩）；④立即加入含血清培养基终止消化（血清中的蛋白酶抑制剂中和胰酶）；⑤吹打细胞（沿培养瓶壁轻柔吹打），制成单细胞悬液；⑥离心（1000rpm，5min）收集细胞，弃上清；⑦用新鲜培养基重悬，按1:3-1:5比例接种至新培养瓶；⑧标记细胞信息（名称、传代时间、操作者），放入CO2培养箱培养。5.细胞冻存与复苏的核心原则是什么？请简述具体操作要点。答案：核心原则：冻存时“慢冻”（避免胞内冰晶损伤），复苏时“快融”（减少复温过程中冰晶形成）。冻存操作要点：①选择对数生长期细胞（活性>90%）；②胰酶消化后离心收集，用冻存液（70%培养基+20%FBS+10%DMSO）重悬（密度1×10⁶-1×10⁷/mL）；③分装入冻存管，标记信息；④程序降温（4℃30min→-20℃1h→-80℃过夜→液氮长期保存）或使用程序降温盒（1℃/min）；⑤记录冻存位置（液氮罐分区）。复苏操作要点：①从液氮中取出冻存管，立即37℃水浴（轻摇）至仅余少量冰渣；②75%酒精擦拭管外壁，超净台内打开；③将细胞悬液缓慢加入含5-10倍体积预热培养基的离心管中（稀释DMSO，减少毒性）；④离心（1000rpm，5min），弃上清；⑤用新鲜培养基重悬，接种至培养瓶；⑥24h后换液（去除残留DMSO）。四、操作题（每题10分，共2题，20分）1.请详细描述从液氮罐中复苏一株冻存的CHO-K1细胞（贴壁型）的完整操作流程，包括关键注意事项。答案：操作流程：（1）准备工作：①提前30min开启超净工作台紫外灯，同时预热培养基（DMEM+10%FBS+1%双抗）、PBS至37℃；②检查水浴锅温度（37±0.5℃），准备75%酒精、离心管（15mL）、移液枪、培养瓶（T25）等；③佩戴手套、口罩，手消毒后进入超净台。（2）取出冻存管：①确认冻存管信息（细胞名称、冻存时间、代数）；②用长镊子从液氮罐气相区（-150℃以下）取出冻存管（避免液氮进入管内导致复温时爆炸）；③迅速放入37℃水浴，轻摇至管内仅余米粒大小冰渣（约1min）。（3）细胞处理：①取出冻存管，75%酒精擦拭外壁，超净台内打开；②用1mL移液枪吸取细胞悬液，缓慢滴入含5mL预热培养基的15mL离心管中（边滴加边轻摇，避免DMSO浓度过高损伤细胞）；③1000rpm离心5min，弃上清（注意：离心前平衡离心管）；④用2mL新鲜培养基重悬细胞沉淀，吹打时避免产生气泡。（4）接种培养：①将细胞悬液转移至T25培养瓶，补加培养基至5mL，轻轻晃动使细胞均匀分布；②标记培养瓶（细胞名称、复苏时间、代数、操作者），放入37℃、5%CO2培养箱（湿度95%）；③24h后观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基（去除残留DMSO）。关键注意事项：①冻存管从液氮取出后需快速融化（<2min），避免复温过程中冰晶重新形成；②DMSO对细胞有毒性，复苏时需尽快稀释并离心去除；③水浴时避免冻存管完全浸入水中，防止管盖污染；④离心转速和时间需根据细胞类型调整（CHO细胞通常1000rpm即可，过高速可能导致细胞破裂）；⑤复苏后前24h避免频繁观察，减少培养箱开关次数（温度、CO2浓度波动影响贴壁）。2.某实验室在进行单克隆抗体生产时，发现细胞培养3天后密度未明显增加，且显微镜下观察到细胞形态变圆、部分脱壁。请设计实验排查可能的原因，并提出解决方案。答案：排查步骤与解决方案：（1）确认污染情况：①取少量培养基涂片，革兰氏染色镜检（观察是否有细菌）；②取培养基接种LB琼脂平板（37℃培养24h），检测细菌污染；③PCR法检测支原体（提取细胞DNA，扩增16SrRNA基因）；④若发现污染（如细菌），立即丢弃污染细胞，更换培养基/血清批次，彻底消毒超净台和培养箱。（2）检查培养基质量：①核对培养基配方（是否误加无血清培养基）；②检测培养基pH值（正常应为7.2-7.4，若偏酸可能CO2浓度不足，偏碱可能瓶盖过紧）；③检查培养基是否过期（或储存不当，如反复冻融导致营养流失）；④更换新批次培养基（同类型），观察细胞生长是否改善（若改善则原培养基问题）。（3）评估细胞状态：①台盼蓝染色计数（活性应>90%），若活性低可能是冻存细胞老化（代数过高）或复苏操作不当（如冻存时细胞密度过低）；②检查细胞传代记录（若代数>50代，可能因接触抑制或衰老导致增殖减慢）；③复苏早期代数的冻存细胞（备份），对比生长情况（若新复苏细胞正常，则原细胞老化）。（4）分析操作因素：①回顾传代操作（是否消化过度导致细胞损伤？消化后离心转速是否过高？）；②检查CO2培养箱参数（温度是否37℃？CO2浓度是否5%？湿度是否95%）；③确认血清添加比例（是否漏加血清？或血清批次更换未驯化细胞）；④若为