生物制品碘盐测定指南（试行）

生物制品碘盐测定指南（试行）1范围本指南适用于生物制品生产用原料碘盐、生产过程中间品含碘盐组分、终产品中碘盐（以碘离子计，含碘酸钾、碘化钾两种碘强化剂形式）的含量测定，也可用于生物制品生产环境残留碘盐的快速筛查，不适用于含有机碘（如碘海醇、聚维酮碘、酪氨酸结合碘等）的生物制品碘含量测定。本指南规定的方法检出限、定量限、准确度符合《中国药典》2025年版三部生物制品理化分析通则、GB5009.267-2020《食品安全国家标准食品中碘的测定》相关要求，仲裁方法为直接滴定法。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法《中国药典》2025年版三部通则0103生物制品原料质量控制要求《中国药典》2025年版三部通则9101分析方法验证指导原则GB5009.267-2020食品安全国家标准食品中碘的测定WS/T107.1-2016尿中碘的测定第1部分：砷铈催化分光光度法3术语和定义3.1生物制品用碘盐指添加于生物制品生产原料、缓冲液、稳定剂体系中的碘酸钾（KIO₃）、碘化钾（KI），或以碘离子、碘酸根离子形式存在的无机含碘盐类组分，不包括有机结合态碘。3.2总碘盐含量指样品中碘酸根、碘离子折算为碘化钾或碘酸钾的总质量分数或质量浓度，结果以mg/kg、mg/L或μg/剂表示。3.3检出限（LOD）指在95%置信水平下，方法能够定性检出样品中碘盐的最低浓度。3.4定量限（LOQ）指满足相对标准偏差（RSD）≤10%、加标回收率80%~120%的前提下，方法能够准确定量样品中碘盐的最低浓度。4方法原理汇总4.1直接滴定法（仲裁法）样品经水溶解后，碘酸钾在酸性介质中与碘化钾反应析出单质碘，以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至蓝色褪去，根据硫代硫酸钠消耗量计算碘酸钾含量；若样品中碘强化剂为碘化钾，先加入溴水将碘离子氧化为碘酸根，除去过量溴后再按上述步骤滴定，折算碘化钾含量。4.2砷铈催化分光光度法在酸性条件下，碘离子催化砷铈氧化还原反应，反应速率与碘离子浓度呈正相关，在400nm波长下测定剩余Ce⁴+的吸光度，吸光度值与碘离子浓度的对数呈线性负相关，通过标准曲线计算总碘含量，折算碘盐含量。4.3离子色谱法样品经水提取、固相萃取柱净化后，经阴离子交换色谱柱分离，电导检测器测定，根据保留时间定性，外标法定量碘酸根、碘离子的含量，分别折算对应碘盐含量，可同时区分两种碘盐形态。4.4快速筛查法（便携式分光光度法）采用预封装显色试剂盒，样品溶解后直接加入试剂盒显色，通过便携式分光光度计读取浓度值，适用于生产环境残留、原料初筛场景，结果仅作定性或半定量参考，阳性样品需采用仲裁法复核。5试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T6682规定的一级水，需经无碘空白验证：取10mL水加1mL10%碘化钾溶液、1mL1mol/L硫酸、2滴淀粉指示剂，不显蓝色即为合格。5.1通用试剂5.1.1无水碳酸钠（Na₂CO₃，优级纯）5.1.2浓硫酸（H₂SO₄，ρ=1.84g/mL，优级纯）5.1.3浓盐酸（HCl，ρ=1.19g/mL，优级纯）5.1.4冰乙酸（CH₃COOH，ρ=1.05g/mL，优级纯）5.1.5碘化钾（KI，优级纯，不含碘酸盐）：使用前需做空白验证，10%碘化钾溶液加淀粉指示剂不显蓝色即为合格。5.1.6可溶性淀粉5.1.7饱和溴水溶液5.1.8甲酸钠溶液（200g/L）：称取20g甲酸钠，水溶解后定容至100mL，室温保存。5.1.9硫代硫酸钠标准滴定溶液：按GB/T601配制和标定，分为0.1mol/L（高含量碘盐测定用）、0.002mol/L（低含量样品测定用，临用前用0.1mol/L标准溶液稀释）两个浓度规格。5.1.105g/L淀粉指示剂：称取0.5g可溶性淀粉，加少量水调成糊状，倒入100mL沸水中，煮沸至溶液透明，冷却后备用，临用前配制。5.1.11碘酸钾标准储备液（1000mg/L，以I计）：准确称取110℃干燥至恒重的基准碘酸钾0.1686g，水溶解后定容至100mL，4℃避光保存，有效期6个月。5.1.12碘化钾标准储备液（1000mg/L，以I计）：准确称取经硅胶干燥24h的优级纯碘化钾0.1308g，水溶解后定容至100mL，4℃避光保存，有效期3个月，每月采用滴定法标定1次，浓度偏差超过±2%需重新配制。5.2砷铈催化分光光度法专用试剂5.2.1亚砷酸溶液（0.05mol/L）：称取4.946g三氧化二砷（剧毒，操作需在通风橱内进行，佩戴防毒面具、护目镜、橡胶手套），溶于20mL10mol/L氢氧化钠溶液中，加水稀释至500mL，加入2滴酚酞指示剂，用1mol/L硫酸调至红色褪去，加入150mL1mol/L硫酸，定容至1000mL，室温避光保存，有效期6个月。5.2.2硫酸铈铵溶液（0.02mol/L）：称取13.27g硫酸铈铵，溶于100mL1mol/L硫酸中，加水定容至1000mL，室温避光保存，有效期3个月。5.3离子色谱法专用试剂5.3.1淋洗液储备液（100mmol/LNaOH-10mmol/LNa₂CO₃）：称取4.0g优级纯氢氧化钠、10.6g优级纯无水碳酸钠，水溶解后定容至1000mL，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃密封保存，有效期1个月。5.3.2淋洗液工作液：取100mL淋洗液储备液，水稀释至1000mL，经0.22μm微孔滤膜过滤、超声脱气20min，临用前配制。5.3.3固相萃取小柱：RP-C18柱，500mg/6mL，使用前依次用5mL甲醇、10mL水活化。5.4快速筛查法专用试剂盒：经方法学验证，检出限≤1mg/kg，相对偏差≤15%，在有效期内使用。6仪器设备6.1通用仪器6.1.1分析天平：感量0.1mg、0.01mg各1台，经计量校准。6.1.2恒温水浴锅：控温精度±0.5℃。6.1.3酸度计：精度±0.01pH单位，经计量校准。6.1.4移液器：量程10μL~100μL、100μL~1000μL、1mL~10mL，经计量校准。6.1.5容量瓶、移液管、滴定管：均为A级玻璃量器，经计量校准。6.1.6马弗炉：控温范围室温~1000℃，控温精度±5℃。6.2各方法专用仪器6.2.1直接滴定法：25mL或50mL棕色酸式滴定管。6.2.2砷铈催化分光光度法：紫外-可见分光光度计，配1cm比色皿，波长范围340nm~800nm，经计量校准。6.2.3离子色谱法：带电导检测器的离子色谱仪，配阴离子交换色谱柱（柱效≥15000理论塔板数，碘酸根、碘离子与常见阴离子分离度≥1.5）。6.2.4快速筛查法：便携式分光光度计，经计量校准。7样品采集与保存7.1样品采集7.1.1原料碘盐：按《中国药典》三部原料抽样规则执行，每批次按包装单元数的√n+1随机抽样（n为总包装单元数），每单元取样量不少于50g，混合均匀后四分法缩分至100g，分装为2份，1份测定，1份留样。7.1.2生物制品中间品、终产品：按生物制品批抽样规则执行，液体样品每批次抽样量不少于20mL，固体、半固体样品不少于20g，冻干制剂抽样量不少于10支。7.1.3环境残留样品：采用擦拭法采集，用10cm×10cm脱脂棉蘸取5mL无碘水擦拭待测表面，将脱脂棉放入带塞离心管中待测，同时做空白擦拭样。7.2样品保存所有样品避光密封，室温保存，运输过程避免阳光直射，样品自采集之日起7日内完成测定，冻干样品、含稳定剂的中间品可延长至15日；留样样品需保存至产品有效期后6个月，以备复核。8测定步骤8.1直接滴定法（仲裁法）8.1.1样品前处理8.1.1.1原料碘盐：准确称取10.000g混匀样品，置于250mL碘量瓶中，加100mL无碘水溶解，摇匀待测。8.1.1.2液体中间品、终产品：准确移取10.00mL样品，置于250mL碘量瓶中，若样品含蛋白等有机组分，加入1mL10g/L蛋白酶K溶液，37℃水浴酶解1h，冷却后待测；若样品含抗坏血酸、亚硫酸钠等还原剂，需先加入0.5mL30%过氧化氢，室温放置10min，加热煮沸5min除去过量过氧化氢后待测。8.1.1.3固体、冻干中间品、终产品：准确称取2.0000g样品（或10支冻干制剂复溶后合并移取10.00mL），加50mL无碘水溶解，超声提取20min，经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液置于250mL碘量瓶中待测。8.1.2碘酸钾含量测定向待测液中加入1mL1mol/LH₂SO₄溶液，摇匀后加入2mL100g/LKI溶液，立即塞紧瓶塞，摇匀，暗处放置5min，用0.002mol/L硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至浅黄色，加入2mL5g/L淀粉指示剂，继续滴定至蓝色完全褪去，30s不变色即为终点，记录硫代硫酸钠消耗体积V₁，同时做空白试验，记录空白消耗体积V₀。若为高纯度原料碘酸钾测定，可采用0.1mol/L硫代硫酸钠标准滴定溶液，降低滴定误差。8.1.3碘化钾含量测定向待测液中加入5mL饱和溴水，摇匀，放置10min至溶液呈稳定黄色，加入2mL200g/L甲酸钠溶液，摇匀，放置15min至黄色完全褪去，通入无碘空气吹3min除去残留溴，再按8.1.2步骤操作，记录硫代硫酸钠消耗体积V₂，同时做空白试验，记录空白消耗体积V₀'。8.1.4结果计算8.1.4.1碘酸钾含量：X₁=(V₁-V₀)×c×35.67×1000/m式中：X₁为样品中碘酸钾含量，mg/kg（或mg/L、μg/剂）；c为硫代硫酸钠标准滴定溶液浓度，mol/L；V₁为样品消耗硫代硫酸钠体积，mL；V₀为空白消耗硫代硫酸钠体积，mL；35.67为1/6碘酸钾的摩尔质量，g/mol；m为样品取样量，g（或mL、剂）。8.1.4.2碘化钾含量：X₂=(V₂-V₀')×c×27.66×1000/m式中：X₂为样品中碘化钾含量，mg/kg（或mg/L、μg/剂）；27.66为1/6碘化钾的摩尔质量，g/mol；其余参数同8.1.4.1。8.1.5方法学参数检出限：0.5mg/kg（以I计）；定量限：1.5mg/kg；精密度：6次平行测定结果RSD≤2%；加标回收率：95%~105%。8.2砷铈催化分光光度法8.2.1样品前处理液体样品：准确移取0.1mL~1.0mL样品，置于15mL离心管中，加2mL1mol/LNaOH溶液，100℃水浴消解30min，冷却后加水定容至10mL，经0.45μm滤膜过滤，取1mL滤液待测。固体样品：准确称取0.1000g~0.5000g样品，置于瓷坩埚中，加入2mL1mol/LNaOH溶液，105℃烘干后置于马弗炉中，550℃灰化4h，冷却后加5mL无碘水溶解灰分，转移至10mL容量瓶定容，过滤后取1mL滤液待测。8.2.2标准曲线绘制分别吸取碘标准工作液（0.1mg/L，以I计，临用前由碘标准储备液稀释配制）0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mL置于25mL比色管中，加水定容至10mL，对应碘浓度为0、2、5、10、20、50、100μg/L。向各管加入2.5mL亚砷酸溶液，摇匀后置于30℃恒温水浴中保温10min，每管间隔30s准确加入0.5mL硫酸铈铵溶液，立即摇匀，放回水浴中保温，准确反应20min后，于400nm波长下，用1cm比色皿，以水为参比测定吸光度，以碘浓度的对数为横坐标，吸光度的对数为纵坐标，绘制标准曲线，线性相关系数r≥0.999。8.2.3样品测定取1mL待测滤液置于25mL比色管中，加水定容至10mL，按标准曲线测定步骤操作，记录吸光度，代入标准曲线计算样品中碘浓度C。若测定值超出线性范围，需稀释后重新测定，稀释倍数不得超过100倍。8.2.4结果计算X=C×V×f×1.308/m（碘化钾）或X=C×V×f×1.686/m（碘酸钾）式中：X为样品中碘盐含量，mg/kg（或mg/L、μg/剂）；C为待测液中碘浓度，μg/L；V为样品定容体积，mL；f为稀释倍数；1.308为碘折算为碘化钾的系数；1.686为碘折算为碘酸钾的系数；m为样品取样量，g（或mL、剂）。8.2.5方法学参数检出限：0.02mg/kg（以I计）；定量限：0.06mg/kg；精密度：6次平行测定RSD≤5%；加标回收率：90%~110%。8.3离子色谱法8.3.1样品前处理准确称取0.5000g样品（或移取5.00mL液体样品），加20mL无碘水，超声提取30min，经RP-C18固相萃取小柱净化，弃去前3mL流出液，收集后续流出液，经0.22μm微孔滤膜过滤后待测。8.3.2色谱条件阴离子交换色谱柱：IonPacAS19（250mm×4mm），保护柱IonPacAG19（50mm×4mm），也可采用其他等效阴离子交换色谱柱，需满足碘酸根、碘离子与氯离子、硫酸根等常见阴离子的分离度≥1.5；淋洗液：40mmol/LNaOH+4mmol/LNa₂CO₃，流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量25μL；电导检测器，抑制电流112mA。8.3.3标准曲线绘制分别配制碘酸根、碘离子混合标准工作液，浓度系列为0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、50.0mg/L，按色谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，线性相关系数r≥0.999。8.3.4样品测定取待测液进样测定，根据保留时间定性碘酸根、碘离子，代入标准曲线得到对应浓度C₁（碘酸根，mg/L）、C₂（碘离子，mg/L）。8.3.5结果计算碘酸钾含量X₁=C₁×V×f×1.208/m碘化钾含量X₂=C₂×V×f×1.308/m式中：1.208为碘酸根折算为碘酸钾的系数；1.308为碘离子折算为碘化钾的系数；其余参数同8.2.4。8.3.6方法学参数碘酸根检出限0.01mg/L，碘离子检出限0.008mg/L；定量限为检出限的3倍；精密度RSD≤3%；加标回收率92%~108%。8.4快速筛查法8.4.1样品处理：取1g样品加10mL无碘水溶解，取1mL上清液加入试剂盒反应区，室温反应5min。8.4.2测定：将试剂盒插入便携式分光光度计，读取浓度值，浓度超过1mg/kg即为阳性，需采用仲裁法复核。9质量控制要求9.1每批次测定需带2个空白样品，空白值不得超过方法检出限，否则需重新处理样品、更换试剂。9.2每20个样品需带1个标准物质质控样，质控样测定值应在证书标示值的±10%范围内，否则批次结果无效。9.3每个样品做平行样测定，平行样相对偏差≤5%（仲裁法）、≤10%（分光光度法、离子色谱法），否则重新测定。9.4标准滴定溶液每月复标1