空肠弯曲菌检测培训

GB/T4789.9-2008食品微生物学检验空肠弯曲菌检验空肠弯曲菌简介

空肠弯曲菌（Campylobacterjejuni

），革兰氏阴性菌，弯曲菌属。菌体轻度弯曲似逗点状，长1.5～5μm,宽0.2～0.8μm。菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。沙门氏菌属的生物学特性培养特性：微需氧菌，在含2.5～5%氧和10%CO2的环境中生长最好。最适温度为37～42℃。在正常大气或无氧环境中均不能生长Skirrow琼脂平板上：42±1℃微需氧培养48±2h，一种可疑菌落为灰色、湿润、扁平、有光泽、呈沿接种线向外扩散生长倾向；另一种可疑菌落为分散突起的单个菌落，其菌落大小一般为1～2mm，边缘整齐，发亮。mCCD琼脂平板上：42±1℃微需氧培养48±2h，其菌落大小一般为1～2mm，光泽、潮湿、扁平、呈扩散生长倾向血平板上：灰色菌落。生化特性：空肠弯曲菌氧化酶试验阳性，过氧化氢酶试验阳性，马尿酸钠水解试验阳性，吲哚乙酸酯水解试验阳性。食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌microbiologialexaminationoffoodhygiene—examinationofcampylobacterjejuni2008-11-21发布2009-03-01实施中华人民共和国卫生部发布本标准规定了食品中空肠弯曲菌（Salmonella）的检验方法。本标准适用于食品中空肠弯曲菌的检验。范围操作步骤1、前增菌在选择性增菌培养基Preston肉汤接种空肠弯曲菌，在微需氧条件下，42℃±1℃震荡（25-100r/min）或静止培养24h±2h。2、分离培养2.1、增菌液接种将24h增菌液分别划线接种Skirrow与mCCD琼脂平板上，微需氧条件下42℃±1℃静止培养48h±2h。2.2、可疑菌落筛选Skirrow琼脂平板：灰色、湿润、扁平、有光泽、呈沿接种线向外扩散生长倾向，其菌落大小一般为1～2mmmCCD琼脂平板：光泽、潮湿、扁平、呈扩散生长倾向，其菌落大小一般为1～2mm。操作步骤3、鉴定空肠弯曲菌的形态和生化鉴定接种哥伦比亚血平板，微需氧条件下42℃±1℃静止培养48h±2h3.1进行革兰氏染色3.2氧化酶试验3.3过氧化氢酶试验3.4马尿酸盐水解试验（接菌量大）3.5吲哚乙酸酯水解试验（接菌量大）样品处理Preston肉汤增菌42℃±1℃

，24h±2h

微需氧条件空肠弯曲菌检验程序

接种Skirrow与mCCD琼脂平板挑取可疑菌落，接种哥伦比亚或MH血琼脂平板42℃±1℃

，48h±2h微需氧条件革兰氏染色、形态观察

氧化酶试验过氧化氢酶

试验马尿酸钠水解试验吲哚乙酸酯水解试验PCR鉴定（可选）

报告1、细菌形态观察对可疑菌落进行革兰氏染色，复染时使用0.5%的苯酚品红溶液。弯曲菌为革兰氏阴性，菌体弯曲如小逗点状，两菌体的末端相接时呈S形、螺旋状或海鸥展翅状。2、氧化酶试验使用无菌棉签蘸取可疑菌落，将氧化酶试剂直接滴加到沾有菌的棉签上，如果在10s内出现紫红色、紫罗兰或深蓝色为阳性。弯曲菌属为阳性。

鉴定过程鉴定过程3、过氧化氢酶试验挑取菌落，加到干净玻片上的3％过氧化氢溶液中，如果在30s内出现气泡则判定结果为阳性。空肠弯曲菌、结肠弯曲菌和海鸥弯曲菌为阳性。鉴定过程4、马尿酸盐水解试验挑取菌落（菌量要大），加到盛有0.4mL1％马尿酸钠的试管中制成菌悬液。混合均匀后在36℃水浴中温育2h或36℃培养箱中温育4h。沿着试管壁缓缓加入0.2mL

茚三酮溶液，不要振荡，在36℃的水浴或培养箱中再温育10min后判读结果。若出现深紫色则为阳性；若出现淡紫色或没有颜色变化则为阴性。鉴定过程5、吲哚乙酸酯水解试验挑取菌落（菌量要大）至羟基吲哚醋酸盐纸片上，再滴加一滴灭菌蒸馏水。如果吲哚乙酸脂水解，则在5min～10min内出现深蓝色；若无颜色变化则表示没有发生水解。(10min之内观察，否则会出现假阳性结果)弯曲菌的鉴定

特征空肠弯曲菌结肠弯曲菌海鸥弯曲菌乌普萨拉弯曲菌过氧化氢酶试验+++-或微弱马尿酸盐水解试验+---吲哚乙酸酯水解试验++-+综合以上生化实验的结果，报告25g（ml）样品中