CN119454953A 厌氧血液储存和病原体失活方法 （希玛奈克斯特股份有限公司）

201780031963.X2017.05.25本发明涉及厌氧血液储存和病原体失活方少的血液组合物包含具有减少的微粒的SAGM和体减少的血液组合物包含具有减少的微粒的2从含有红细胞的血液产品中除去氧气以制备氧饱和度(SO2)小于25％的氧气减少的血用265至400nm的UV光以3.2至7.0J/cm2的UV剂量辐射含有核黄素的氧气减少的血液产其中与病原体减少的血液产品相比，所述病原体减少且氧气2.权利要求1所述的方法，其还包括在厌氧条件下储存所述病原体减少且氧气减少的3.权利要求1所述的方法，其还包括从所述氧气减少的含有红细胞的血液产品中减少5.权利要求1所述的方法，其中所述病原体减少且氧气减少的含有红细胞的血液产品7.权利要求9所述的方法，其中相对于在存在氧气的情况下处理的病原体减少的血液3[0003]本申请要求2016年5月27日提交的美国临时申请No.62/342,756和2017年1月11日在添加剂溶液中，例如美国的AS_1(Adso18)、AS_3(Nutrice18)、AS_5(optisol8)和AS_7(SOLX8),或欧盟的SAGGM或PAGGSM[0006]本领域的最新进展已经提供了通过利用UV光在储存之前用光敏剂照射血液成分来灭活细菌和病毒病原体(参见例如基于补骨脂素的INTERCEPT8系统、基于核黄素的MIRASOL8系统)，也没有光敏剂(THERAFLEX8UV_Platelet系统)。这些系统交联并灭活致病物种中的DNA，从而降低它们对患者造成的风险。INTERCEPT8系统使用氨托沙林HCl(一种合成的补骨脂素)和UV_A光，以3J/cm处理后去除或减少残留的氨托沙林和光产物。Miraso18系统使用核黄素的UV光来靶向核黄素_核苷酸复合物的吸收。没有光敏剂的系统通常使用254nm的UV_C光。一些光敏剂和光产物在这些系统中的长期影响仍有待确原体(参见Henschler等人“DevelopmentoftheS_303pathogeninactivationtechnologyforredbloodcellconcentrates，”TransfusMedHemother38：33_424[0008]虽然不限于任何特定理论，但认为与S_303形成共价DNA和RNA加合物是基于分子[0009]S_303自发分解为毒性较低的S300是病原体灭活过程中的第二反应。通常将过量的S_303(约0.2mM)加入到RBC中以提供足够的试剂以与样品中的所有DNA和RNA完全反应。Cerus病原体灭活过程中，这主要通过使S_303降解为S_300(一种毒性显着较低的化合物)并在细胞内外平衡。这允许GSH淬灭S_303的细胞外反应而对病原体灭活没有显着影响(参见Olcina等人的HypoxiaandtheDNAdamageresponse.HypoxiaandCancerinCancer[0011]本领域的最新进展还包括在添加剂溶液中使用厌氧储存的包装红细胞以减少通的血液中的有效氧可减少储存期间红细胞内ofmicroparticlesininflammationandtransfusion：Aconcisereview，力5可取决于所使用的仪器。参见Poncelet等人“Tipsandtricksforflowcytometry_通过减少溶血来延长病原体减少的血液产品的[0015]已开发出血液和血液产品的病原体灭活以提高其安全性。虽然可以灭活各种细[0016]在这里，我们证明使用Mirasol系统在治疗病原体之前减少全血中的氧气可以改善血液质量。设计用于去除全血和红细胞浓缩物中的氧气与病原体减少相结合的血已经使用265至400nm之间的UV气减少的全血已经使用265至400nm之间的UV光6于25在37℃下的pCO2为90mmHg或更低。[0028]图4是显示根据本发明的实验结果的图，比较对照含有无菌盐水(1avg)的全血的核黄素(4avg)的氧还原的pRBC、含有无菌盐水(5avg)的氧气减少的全血、和含有核黄素[0029]图5是显示根据本发明的实验结果的图，比较对照含有无菌盐水(1avg)的全血的核黄素(4avg)的氧减少包装pRBC、含有无菌盐水(5avg)的氧气减少的全血和含有核黄素7明的范围。出于本说明书和描述的目的，以下定义和术语被理解为具有其共同含义。术语 且还包括通常在血液中发现的这些组分的组合，例如全血的部分分离的部分，先前分离的料制成的用于储存血液的任何容器，无论储存的持续时间如何，并且包括本领域常用的通血液储存袋13。血液采集袋1在本领域中是公知的并且通常由柔性塑料，例如聚氯乙烯膜或RenolitSolmedwrapflex8薄膜制成。2016年3月10日提交的国际专利申请No.PCT/US2016/021794中提供了用于生产加工袋的示例性方法，该专利申请通过引用整体并入本脂制成，例如Wackersilpuran30_μm厚的硅树脂膜。在另一方面，内血袋6由Millipore8[0038]吸氧吸附剂材料7通常设置在透气小袋中，并适于吸收外阻挡袋5和内血袋6之间不存在，例如S0rbentSystemsTellTab8。在2016年3月10日提交的国际专利申请No.PCT/US2016/021794中提供了适用于本说明书的处理袋4和内部血袋6的其[0039]内血袋6的流体路径通过血液传输线9连接到UV辐射室10，血液传输线9具有流量具有UV_C透明部分，例如嵌套在血液传输管9和血液传输管12之间的石英(SiO2)或蓝宝石氧。合适的血液储存袋13描述于2016年4月22日提交的国际专利申请No.PCT/US2016/9[0043]图2显示了不连续的三线单采血液成分系统，其中全血通过可插入受试者臂的静脉进入装置110从受试者取出。抽血管线120将静脉进入装置110流体连接到血液成分分离凝血剂管线130穿过的抗凝血泵132控制通过抗凝血剂管线130的流量和引入全血的抗凝血通常将抗凝血剂尽可能靠近静脉进入装置110引入全血中。管线/导管通常包括夹持阀164[0045]一旦从受试者取出所需量的抗凝全血并包含在血液成分分离装置150内，血液成[0046]血液处理系统100的一些方面包括输送泵210和连接到血浆袋158的稀释/提取管过打开输送泵并将血浆从血浆袋158引入抽取管线120内的抽出的血液中来稀释抽出的血[0047]在血液成分分离装置150中分离血液样本并且移除所需的成分并将其存储在适当的存储容器156或158中之后，系统通过专用线路将未提取的和/或不需要的成分返回到受[0048]图3示出了与不连续三线单采血液成分系统一起使用的本说明书的一个方面，其设备173、处理储存器174和UV辐射室177，它们通过输送管线170和再循环管线175流体连[0049]在血液分离装置150中的血液成分分离完成后，通过关闭本说明书的流量控制阀179和打开流量控制阀171，将所需血液成分的流动引导到本说明书的输送管线170中。因血浆袋158或血小板袋156。输送管线170中的流体流可以通过来自输送泵122或输送泵210[0050]输送管线170中的流体流动由流量控制阀171控制并流入输送泵172并继续流入脱且设置在再循环管线175上的流量控制阀176将打开，从而允许流体通过输送泵172再循环Liqui-cel8和MiniModule8设备，以及用于体外循环灌注的血液氧合，例如MedtronicAfinity8系列充氧器和SorinInspire8系列充氧器。在一些方面，脱氧设备173可操作地连脱氧设备173可操作地连接到测量其中包含的流体的氧含量的装置(未示出)，以提供用于体积有效的预定时间段之后关闭泵。在UV辐射室177内并且可操作地连接到电源(未示出)，或者UV光源可以可操作地连接到UV[0052]优选地控制UV辐射室中的流体流动，或者通过UV辐射室177内包含的静态样品的面为约3J/cm2。然后，脱氧和UV照中除去氧气以制备氧气减少的血液制品，从血液产品中减少血液病原体包括添加核黄素至终浓度为40至60μM，用265至400nm之间的UV光照射含有所述核黄素的血液产品。在某些方面，该方法还包括在厌氧条件下储存所述氧气减少病原体减少的血液产品。本说明书中还包括和提供的用于减少溶血的病原体减少的方法包括从血液产品中除去氧气和二氧化碳以制备氧气和二氧化碳减少的血液产品，从血液中减少血液病原体包括添加核黄素至最终氧化碳耗尽的储存条件。产品中除去氧气以制备氧气减少的血液制品，从血液产品中减少血液病原体包括加入S_少的溶血的病原体减少方法包括在减少血液病原体之前从血液产品中除去氧气以制备氧病原体减少方法包括在减少血液病原体的同时从血液产品中除去氧气以制备氧气减少的二氧化碳减少的血液产品，并且从血液产品中减少血液病原体包括添加S_303至最终浓度原体减少方法包括从血液产品中除去氧气和二氧化碳以制备氧气和二氧化碳减少的血液中减少血液病原体包括添加S_303至最终浓度约0.1至0.3mM并加入谷胱甘肽(GSH)至终浓括添加S_303至终浓度为约0.1_0.3mM和加入谷胱甘肽(GSH)至终浓度为2_1耗尽的血液产品的氧饱和度小于25通常小于10并且可以是约5％的SO2。二氧化碳耗尽的血液产品是在37℃下测量时具有低于20mmHg的二氧化碳水平的血液产品。细胞体积百分比对于男性为约40_54对于女性为约38_47％。男性和女性的血小板计数在约37℃并在收集期间和收集后不久快速冷却至约30℃,但在约6小时内缓慢冷却至环境温度。在收集时，可以在30_37℃开始或在室温(通常约25℃)下根据本公开的方法处理全剂通常通过过滤或离心处理以除去白细胞和血小板。白细胞减少的全血具有至少5个对数胞(OR_LRpRBC)可包括氧和二氧化碳减少的白细胞减少的链球菌和鲍氏不动杆菌(Acinetobac于Wagner等人“DevelopingpathogenreductiontechnologiesforRBCsuspensions”wholeb1ood：acomprehensiveanalysisofpathogenreductionandrefrigeroftheS_303pathogeninactivationtechnologyforredbloodcellconcentrates”inTransfusionMedicineandHemotherapy，38：33_42(2011)，Guignard等人“TheclinicalandbiologicalimpactofnewpathogeninactivationtechnologiesonofplateletandplasmabloodcomponentsfortransfusionusingtheINTERCEPT年6月9日授予King等人的美国专利No.5,120,659中描述和二氧化碳减少的血液产品的病原体减少的方的条件下病原体减少导致在非氧减少的制剂中在病原体减少中观察到约30％的溶血水平。在厌氧储存21天后观察到至少45％的减少。在另一方面，在厌氧储存35天后观察到至少原体减少导致在非氧气和二氧化碳减少的制剂中病原体减少中观察到的约30％的溶血水病原体处理的氧和二氧化碳减少的白细胞减少的全血(OR_LRWB)中的溶血水平。在一个方形成可以反映未被表征或未知的对红血生理学[0077]由于通过在病原体处理之前减少血液中的氧气而提供的红细胞的初始健康状况[0084]本公开提供并包括照射具有添加的光敏剂的氧气减少的血液制品以降低病原体[0085]在本发明的一个方面，具有核黄素的氧气减少的血液制品在265至400nm之间照[0086]本说明书提供并包括照射具有核黄素的氧气减少的血液制品，其UV辐射曝光f在[0089]如本文所提供的，在需氧或厌氧条件下储存期可长达9周，并提供减少的微粒形品在265至350nm之间照射。用于氧气减少的血液制品的辐射的合适波长基于光敏剂确定，Schubert等人，“Wholebloodtreatedwithriboflavinandultravioletlight：Qualityassessmentofallbloodcomponentsproducedbythebuffycoat血液在常规储存条件下维持。虽然常规储存条件允许氧气随时间进入并且例如减少对ATP血已经使用265至400nm之间的UV[0099]在根据本说明书的方面中，包含具有小于25％的氧饱和度(SO2)的全血的氧气减减少的全血具有40_60μM核黄素，具有1至25％的氧饱和度(SO2)，并且具有在37℃时10至20mmHg之间的pCO2，其中所述氧气减少的全2和S_303的分解动力学，以及当与在氧气存在下进行的病原体减少方法相比时它们在储存的减少包括从血液产品中除去氧，添加S_303至终浓度为0.2mM，并加入GSH至终浓度为2至微粒的水平降低超过60％。在一个方面，在储存至少一周后，微粒的水平降低了60％至粒水平降低五倍以上来提供S_303病原体灭活和氧气减少的血液制品中微粒形成的减少。周后将微粒水平降低大于五倍来提供S_303病原体灭活和氧气减少的血液制品中微粒形成303病原体灭活和氧气减少的血液制品中微粒形成的减少。在一个方面，在储存至少六周暴露于细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸、％SO2和S_303的分解动力学的两个参数方面有所改2和S_303的分解动力学2和S_露于细胞膜表面的磷脂酰丝氨酸、％SO2和S_303的分解动力学的五个参数方面有所改善。[0106]本说明书提供了S_303病原体灭活和氧减少的改进的血液组合物，其通过将病原[0107]本说明书提供了S_303病原体灭活和氧减少的改进的血液组合物，其溶血水平低[0108]本说明书提供了具有改善的可变形性的S_303病原体灭活和氧还原改善的血液组提供了S_303病原体灭活和氧还原改善的血液组合物，其通过同时还具有减少的二氧化碳[0110]本说明书提供了S_303病原体灭活和氧减少的改进的血液组合物，其通过具有增[0111]本说明书提供了S_303病原体灭活和氧减少的改进的血液组合物，其通过在储存微粒的水平降低超过60％。在一个方面，在储存至少六周后，微粒的水平降低了60％至和氧还原的改进的血液组合物，其通过同时还具有减少的二氧化碳而具有改善的微粒水[0112]本说明书还提供了S_303病原体灭活和氧还原的改进的血液组合物，其通过维持磷脂酰丝氨酸沿细胞膜的胞质表面的不对称分布而在细胞膜表面上具有改善的磷脂酰丝[0113]本说明书通过使％SO2小于30％来提供S_303病原体灭活和氧还原改善的血液组[0115]本说明书的方法提供了改善血液产品中病原体灭活S_303的功效，包括从红细胞液产品中S_303病原体灭活功效的改进包括从血液产品中除去氧，添加S_303至终浓度为[0117]本说明书提供了S_303病原体灭活和氧气减少的血液组合物，其具有与汇集的血[0118]本说明书提供了具有改进参数的S_303病原体灭活和氧减少血液的单位，当与在样品1否否否否否否否否否否是[0132]每个全血单元(样品5和6)通过转移到与SorinD100膜氧合器连接的收集袋中的全血进行处理以消耗氧气并且使用95％N2和5％CO2气体的混合物以700毫升/分钟的流速进然后根据标准的上下血沉棕黄层涂覆方法处理组分。分离的RBC用附着的白细胞减少过滤[0134]实施例3：MiRASOL8病原体减少将厌氧和需氧血液置于1至6℃的血库冰箱中。每天监测罐式压力表，确保其读数为5±用于微囊泡MV计数(Schubert等人，“Wholebloodtreatedwithriboflavinandultravioletlight：Qualityasses用HettrichZentrifugen的HAEMATOKRIT210装置根据制造商的说明确定。使用GemPremier3000血气分析仪(InstrumentationLaboratories)定量代谢物(葡萄糖和乳酸)和钾(K+2(6D)、葡萄糖(6E)、乳酸(6F)和pH(6G)的结果，用核黄素(2avg)控制全血，用无菌盐水[0146]通过转移到与SorinD100膜氧合器(SorinGroup，Arvada，CO)连接的全血采集合物以700毫升/分钟的流速泵送，在约23℃下实现预处理％SO2小于25％和pCO2约70mmHg。[0148]使用17号皮下注射针通过静脉穿刺接近献血者并连接到血浆分离系统。将约450mL全血(WB)从供体吸入到单采血液成分系统中并在离心和分离血液成分之前与抗凝血[0150]使用17号皮下注射针通过静脉穿刺接近献血者并连接到血浆分离系统。将约450mL全血(WB)从供体吸入到单采血液成分系统中，并在通过辐射室之前与抗凝血剂和核[0159]测量5单位的具有AS3添加剂溶液的白细胞减少的包装红细胞(LRpRBC)的全血细[0161]使用平均值和中值测量数据的中心趋势，并用标准偏差确定数据的扩散。使用[0162]以下内容对应于母案申请中的原始权利要求书，现作为说明书的一部分并入此[0168]2.项1所述的方法，还包括在厌氧条