CN119454965A 用于治疗与纤毛病相关联的疾病的方法 （阿雷克森制药公司）

201880068999.X2018.10.12向有需要的受试者施用有效量的靶向至少一种G述纤毛病的动物模型系统以用于测试推定的治当所治疗动物的可测量表型与未治疗动物的可2有效量的至少一种靶向至少一种G蛋白偶联受体(G2.如权利要求1所述的方法，其中所述纤毛病相关疾病由NPHP1基因座的纯合缺失引3.如权利要求1所述的方法，其中所述纤毛病相4.如权利要求1所述的方法，其中所述纤毛病相关疾病由NPHP5.如权利要求1所述的方法，其中所述纤毛病相关8.如权利要求6所述的方法，其中所述至少一种剂选自由以下组成的组：前列腺素E110.如权利要求6所述的方法，其中所述至少一种疾病选自由以下组成的组：肾耗竭(NPHP)，Senior_Loken综合征(SLS)，Joubert综合征(JBTS)和相关病症疾病(JSRD)，3的屏障，以及控制G蛋白偶联受体(GPCR)在纤毛上的定位的转运衔接子，其被称为BBSome(Bardet–Biedl综合征(BBS)蛋白与作为基体的组分并参与将货物转运到初级纤毛的其他维持适当分化的纤毛的重要性通过大量与纤毛病相关联的人类疾病而被最的实例包括肾耗竭(NPHP)、SeniorLoken综合征(SLS)、Joubert综合征(JBTS)、Bardet为肾耗竭相关纤毛病(NPHP_RC)的综合征形式与不同的肾外表现{例如，视网膜发育不良、4[0008]仍然很需要对具有纤毛病(包括NPHP)的疾病的了解较少的分子基础进行表征以[0009]在一个实施方案中，本公开涉及治疗受试者的至少一种其包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种靶向至少一种G蛋白偶联受体(GPCR)的述纤毛病相关疾病由NPHP1基因座的杂合缺失和第二基因座处杂合或纯合功能丧失(LOF)的功能丧失突变和第二等位基因中的不同功能丧失突肿、口腔系带(oralfrenulae)和肝纤维化的额外特征的JBTS的所有变异形式)，Bardet_述动物或细胞模型表现出纤毛病相关疾病的可测量表型，(b)将所治疗的动物或细胞模型的可测量表型与未治疗动物或细胞模型的可测量表型进行比较，以及(c)当所治疗的动物测试剂鉴定为治疗纤毛病相关疾病的治疗剂。在具体实施方案中，所述动物模型可以是5和视网膜纤毛病。疾病(JSRD)，Bardet_Biedl综合征(BBS)，Meckel_Gruber综合征(MKS)，口面指综合征[0023]图8A_8C示出了在用前列地尔处理后从多个纤毛发生实验中获得的结果的元分析[0024]图9示出了(A_D)用前列地尔处理后从多个纤毛发生实验6[0030]图13示出了通过蛋白质印迹获得的人肾组织中的EP1_4表达谱和通过免疫组织化[0033]图14C示出了EP1_4受体编码基因在多种对照细胞系和多种NPHP患者来源的肾上[0034]图15示出进行了对纤毛发生的影响的测试的前列腺素(PG)调节剂(激动剂和拮抗[0051]图27示出了已被药物靶向的(drugged)和可被药物靶向的(druggable)基因的7[0062]图38A示出了wt小鼠和Nphp1_/_小鼠中的视网膜的高碘酸_希夫染色(periodic[0065]图39A和39B示出了以Cep290作为纤毛标记物并且分别以视紫红质和PNA(花生凝集素)作为外部区段(OS)和内部/外部区段的光感受器标记物的wt小鼠和Nphp1_/_小鼠视网[0070]图44示出了CP_544326对Nphp1_/_小鼠的ONL中的绿色标记的视紫红质错误定位的人NPHP)，其中>17％病例在20岁之后患有ESRD。已经在多于20种NPHP相关基因(例如，NPHP1的全基因座缺失(NPHP1(del))占NPHP病例的超过20％。传统上，罕见病门户网站[0076]纤毛病经常由编码过渡区(TZ)蛋白或鞭毛内运输(IFT)组分的基因中的突变导致8Schermer,B.,Nat.Genet.,43:723_4,2011)。在分子上，TZ由不同的多蛋白复合物，即NPHP1_4_8模块、NPHP5_6(Cep290)模块、MKS/B9模块和Inversin(INVS；NPHP2)隔室组成[0077]编码NPHP模块蛋白的一个或多个基因中的突变和/或失活可能会不利地影响纤毛组成的IFT_B复合物通过与驱动蛋白II(kinesinII)缔和来介导顺行运输。逆行运输由动力蛋白2和IFT_A复合物的6个亚基介导。已经在NPHP相关纤毛病中鉴定出6种编码IFT_A亚Hum.Mol.Genet.,17:3368_79,2008)并导致雄性不能生殖(Jiang,S.等人,法使运动室管膜纤毛成熟，这与其视网膜变性和脑积水表型一致(Rachel,R.等人,进行选择)中，由NPHP1纯合全基因缺失(NPHP(del))引起的NPHP在所有成年发病ESRD中具虽然在18岁与50岁之间的ESRD发病患者中发病率明显更高(0.9％的流行率)，但是NPHP的发病年龄可高达61岁。因为他们使用的方法低估了病因突变的总数，所以他们得出结论，NPHP是在当前的日常实践中可能未得到全面诊断的成人发病ESRD的相对频繁的单基因病[0080]在来自移植网络中的国际遗传学与翻译研究(InternationalGeneticsandTranslationalResearchinTransplantationNetwork,iGenTRAiN)联盟的肾移植受体9554个中有10个)的相对频率鉴定了纯合NPHP1(del)患者–他们先前均未被诊断为患有者(在此数据集内，近似频率为1/200)；这些患NPHP1复合杂合子(具有NPHP1功能丧失(LOF)突变的NPHP1(del))和/或上位性(在另一个基[0082]本文所述的NPHP(del)发现是使用英国基因组学数据库进行的研究的结果。此研研究覆盖的数据和结果做出贡献的NHS临床医生和医疗团队产生的数据和发现而实现。英研究所和英国国民健康保险制度(NationalInstituteforHealthResearchandNHSEngland)、维康基金会(TheWellcomeTrust)、英国癌症研究和医学研究委员会(CancerResearchUKandtheMedicalResearc器官的可获得性一直无法跟上移植需求。本公开的实施方案包括鉴定和/或治疗对于NPHP[0085]本文描述了用于鉴定可用于治疗纤毛病相关疾病或病症例如NPHP或NPHP1(del)或病症或者NPHP1(del)相关疾病或病剥离的肾上皮细胞永生化，所述肾上皮细胞主要是从NPHP1缺陷患者的尿液回收的近端肾的细胞中NPHPRNA和NPHP蛋白表达的可将NPHP患者来源的细胞和对照细胞在完全培养基中在39C(SV40表达的非允许温度)下培以使用OperaPhenix平台进行其他表型分析(例如，前列地尔和CP_544326纤毛发生滴定、[0090]上面所述的基于纤毛的测定可以用于鉴定恢复纤毛发生的化合物。图4示出了基[0091]使用图4中所示的过程，将NPHP患者来源的细胞用若干药物候选物处理以鉴定可(EP)受体而起到激动剂的作用，针对EP1、EP2、EP3和EP4的IC50值分别为3用并活化G蛋白的经活化GPCR。受抑制受体结合细胞外配体和/或有成效地与G蛋白相互作[0096]例如用taprenepag异丙基进行的GPCR激动剂处理可以在例如约0.1mg/kg至约前列地尔以剂量依赖性方式显著增加了NPHP患者来源的细地尔对NPHP患者来源的细胞中的纤毛发生的影响增加[0099]元分析还示出了前列地尔剂量对纤毛发生具有近似线性的影响。图9(组A和B)例图9(组C和D)显示，关于前列地尔对NPHP患者来源的细胞中的纤毛发生的影响的R2值为(40μM地诺前列酮和20μMdmPGE2)下观察到NPHP患者来源的细胞中纤毛发生恢复轻微降正常对照细胞中的纤毛发生速率没有显著影响，表明前列地尔对恢复NPHP1缺失患者中的[0107]图11C中的元分析示出了先前数据的线性回归分析，其中斜率反映了前列地尔对胞数据的线性回归显示斜率值在0,7665与0,9974之间，表明前列地尔对纤毛发生没有影酸经受环氧化酶(或前列腺素G/H合成酶)的双加氧酶合成各个类别的包括PGE2在内的类前列腺素。这些类别全部具有包括EP1_4在内的离散的醇抗炎药物(NSAID)的主要靶，但是这些药物可能对一种同种型或另一种同种型具有特异[0110]PGE2是肾病理生理学中得到最佳地表征的类前列腺素。PGE2由C并且通过细胞膜上的Lkt/ABCC4运输体被输出。释放的PGE2结合纤毛上的EP4受体，导致[0111]纤毛的形成和伸长需要COX_Lkt/ABCC4_EP4信号传导级联(在小鼠肾集合管细胞IFT。Lkt/ABCC4介导的PGE2信号传导影响cAMP水平并且通过IFT的顺行速度的增加来促进以自分泌和/或旁分泌方式起作用，因为细胞可以对其本身或其周边物释放的PGE2作出应[0112]图12示出了外源性PGE2的添加增加了对照细胞中的纤毛长度和纤毛细胞的百分[0113]PGE2由PGE合成酶(PGES)产生并且通过与其GPCR：EP1_4的结合来进行信号传qqCa2+青光眼、精神障碍和HIV的药物靶。在许多障碍中，一个主要障碍是普遍缺乏关于推定的[0115]图13示出了EP1_4在肾和视网膜中表达_这两种器官均受到NPHP和NPHP_RC的影[0116]通过qRT_PCR确定包括EP受体在内的PG途径成分在URECS中的表达。图14A显示，但是在ω_亲油链中并入了促进增强的效力和选择性的主要修饰的配体。第二类激动剂是非类前列腺素系列的吡啶基磺酰胺衍生物，其中最强效的是taprenepag异丙基(PF[0120]第三类激动剂包括非前列腺素系列的N_苯基_y_内酰胺衍生物，包括AGN_210669IC50为16nM(Kb＝1.8nM)，它对EP2受体的选择性相对于其他类前列腺素受体增加了>10,[0122]Markovic的图5(其以引用的方式并入)示出了EP4受体的选择性激动剂：(a)基于不同的EP4激动剂。将四唑特征引入到a_链中替换末端羧酸官能团，意图改善生物可利用[0126]在EP4激动剂领域中有些独特之处，因为它[0127]Markovic的图6(其以引用的方式并入)示出了EP4受体的选择性拮抗剂和由于微仅依赖于图17(组b)的化合物的苄基基团上的三氟甲基取代基的取代模式。极大的功能变[0129]图16A显示，CP_544326(一种非类前列腺素EP2激动剂)将纤毛发生恢复至与前列902.688(一种类前列腺素EP4激动剂)没有显著影响纤毛发生。这些结果指示EP2在纤毛发[0133]图19示出了通过层次聚类分析的样品的微阵列数据。首先根据提取类型(Qiazol与RLT)对数据进行聚类。然后根据条件(例如对照与前列地尔处理)对Qiazol样品进行聚[0135]图21示出了通过层次聚类分析的样品的微阵列数据。从RLT提取样品中获得的数[0136]对于从RLT提取样品获得的微阵列数据，在DMSO与培养基之间没有显著差异，例节的基因的数量几乎相同。前三位受调节的基因也几乎相同并且共享相同的信号传导途[0137]对于从Qiazol提取样品获得的微阵列数据，在DMSO与培细胞粘附和细胞外基质的下调以及干扰素信数据同对照与患者的RNAseq的微阵列数据交叉而进行的途径分析揭示了，与对照细胞相[0141]图25示出了有关药物对纤毛发生的影响的多组学分析的过程。图26A_26E示出了例如有关在五个独立的实验中前列地尔对纤毛发生，例如％纤毛细胞的影响的表型分析。[0142]图27示出了从多组学数据(在DMSO0.04％中的NPHP患者来源的细胞与用前列地尔2μM处理的NPHP患者来源的细胞)的蛋白质差异表达分析鉴定的已被药物靶向的和可被[0143]图28(A_C)示出了根据多组学数据的途径分析(使用创新途径分析(Ingenuity用和(C)NPHP1_20基因相关的直接相互[0145]图29示出了来自斑马鱼NPHP4吗啉代(MO)模型的结果，其中向处于单细胞期的野肾囊肿(通过Tg(wt1b:GFP)转基因标记)，所述合适的手段例如立体镜和PerkinElmerDMSO处理相比，前列地尔处理(0.5μM)显著地降低注射了nphp4MO的胚胎的严重前处理(5μM)显著地降低注射了nphp4MO的理相比，地诺前列酮处理对斑马鱼NPHP4MO的背侧弯曲没有显著影响(p＝0.0577，t_检重和轻度前肾囊肿并显著地增加斑马鱼NPHP4MO的％正常前肾囊肿(p<0.008，Fischer精马鱼NPHP4MO。图35显示，与DMSO处理相比，CP_544326处理显著地降低斑马鱼NPHP4MO的％严重前肾囊肿并显著地增加斑马鱼NPHP4MO的％轻度和正常前肾囊肿(p<0.01，研究设计。在腹膜内注射taprenepag异丙基(1mg/kg或8mg/kg)或taprenepag(8mg/kg)之在血浆(图37A)、肾(图37B)、睾丸(图37C)、视网膜(图37D)和玻璃体液(图37E)中比[0153]NPHP1的纯合缺失是少年型肾耗竭1的最常见病因。NPHP1中的纯合或复合杂合突变也与例如Joubert综合征4(大脑异常)和Senior_Loken综合征1(视网膜病变)相关联。产生NPHP1KO动物以测试taprenepag是否可以用于治疗这些疾病。为了建立CRISPR/Cas9工小鼠的肾和视网膜切片进行组织化学染色。Nphp1_/_小鼠模型没有表现出肾表型。相比之五个远平面上对每个视网膜层进行检测和定量厚度小鼠模型表现出组织良好的光感受器结构，其中视紫红质沿OS定位，在连接纤毛处以比之下，Nphp1_/_小鼠无法形成连接纤毛，并且在IS和OS中表现出明显的视紫红质错误定+/+和Nphp1_/_小鼠进行视网膜电图(ERG)检查(图40A_C强度的光刺激下表现出明显更低的ERG振幅。图40C是ERGa波在不同强度的光刺激下的放[0157]在测试CP_544326对纤毛病相关表型的影响之前，通过免疫组织化学研究潜在靶[0158]图42示出了用于评估CP_544326对Nphp1_/_小鼠模型中发生的视网膜变性的影响CP_544326(18mg/kg)。表型读出涵盖如先前针对Nphp1_/_小鼠模型的表征所述的结构和功[0159]图43示出了CP_544326对由ONL/OPL比率表示的光感受器层ONL厚度的影响，所述比率由IHC切片上的视网膜层的半自动定量计算。与媒介物处理相比，CP_544326处理544326(18mg/kg)或媒介物处理的Nphp1+/+或Nphp1_/_小鼠进行视网膜电图(ERG)检查。ERG个或更多个一起还可以应用于与上面所述的类型不同的其他类型的方法。无需进一步分据现有技术的立场在很大程度上构成所附权利要求书中阐述的本公开的一般或特定方面