CN119464173A 一种全细胞催化制备d-甘露糖的方法 （山东三元生物科技股份有限公司）

本发明中利用表达α葡萄糖磷酸变位酶基酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖以淀粉或淀粉衍生物为底物，加入磷酸盐以及2异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基A1)将α葡萄糖磷酸变位酶基因、葡萄糖磷酸变位酶基因、双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸分别转入大肠杆菌A2)将α葡萄糖磷酸变位酶基因、葡萄糖磷酸变位酶基因、双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸以任意排列组合方式A3)将α葡萄糖磷酸变位酶基因、葡萄糖磷酸变位酶基因、双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸中的任意2个核苷酸以任意排列组合方式共转入一株大肠杆菌中，其余2个核苷酸以任意排列组合方式共转入A4)将α葡萄糖磷酸变位酶基因、葡萄糖磷酸变位酶基因、双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸中的任意2个核苷酸A5)将α葡萄糖磷酸变位酶基因、葡萄糖磷酸变位酶基因、双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸中的任意3个核苷酸D甘露糖的系统中，α葡聚糖磷酸化酶的浓度为0.5％3葡萄糖磷酸变位酶的浓度为0.5％3双功能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6磷酸异构酶的浓度为2甘露糖6磷酸3的浓度为0.12聚磷酸葡萄糖激酶的浓度为0.12％。化制备D甘露糖。其中，利用表达异淀粉酶基因的工程菌处理淀粉或淀粉衍生物的温度为70～85℃；处4被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技能酶葡萄糖磷酸异构酶/甘露糖6一磷酸异构酶基因以及甘露糖6一磷酸磷酸酶基因的工程5构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸分别转入大肠杆菌构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸以任意排列组合方构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸中的任意2个核苷酸以任意排列组合方式共转入一株大肠杆菌中，其余2个核苷酸以任意排列组合方式共转构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸中的任意2个核苷构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的核苷酸中的任意3个核苷因在Uniprot上的编号为Q9SD76；葡萄糖磷酸变位酶来源于Thermococcuskodakarensis，6[0025]4葡聚糖转移酶来源于Streptococcusmutans，基因在Uniprot上的编号为为0.44葡聚糖转移酶的浓度为0.12优选为0.8聚磷酸葡萄糖激酶的浓度为0.12优选为1％。7[0042](3)聚磷酸葡萄糖激酶(PPGK)在甘露糖合成途径中扮演着至关重要的角色，它能异构酶/甘露糖6磷酸异构酶基因以及甘露糖6磷酸磷酸酶基因的工程[0050]本实施例中，α葡聚糖磷酸化酶aGP来源于Arabidopsisthaliana，基因在基因组DNA都可从ATCC的官方网站(8反应温度℃32.5545.6249.3841.70044.889549.6452.3552.2252.0949.2045.46Mg2+的终浓度分别为[0074]本实施例中涉及的1mL反应体系为：淀粉浓度150g/L，磷酸盐缓冲液的终浓度1PGI添加量为2M6PP添加量为4％时为质量百分数，D一甘露糖的生成率最高为的编号为P10342，该基因构建重组表达载体pET32a_IA。将质粒都转化至大肠杆菌BL21_[0094]以上基因分别构建重组表达载体pET32a_4GT，pET32a_PPGK(Q73W41/F5YW32/1244GT添加量为2PPGK添加量为1为质量百分数，加水补至1mL。置