甜瓜杂交种品种纯度鉴定技术规程 KASP标记法_第1页
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1GB/T3543.1农作物种子检验规程第1部分：总则GB/T3543.2农作物种子检验规程第2部分：托样GB/T3543.5农作物种子检验规程第5部分：品种质量品种纯度鉴定NY/T2594植物品种鉴定DNA分子标记法总则2DNA:脱氧核糖核酸(Deoxyribonucl7试剂38仪器设备10检测程序父本、母本和F₁各30株幼嫩组织如胚根、子叶、真叶等(4mm直径叶片打孔器等量取样，重量约10.1.2待检测样品取样孔深孔板中(提前置入1粒直径4mm的钢珠),每个96孔深孔板放置88粒种子胚根。本文件推荐使用胚b)每个离心管或96孔深孔板单孔中加s,取400μL上清于新的离心管或96孔深孔板中(提前加入400μL异丙醇),上下颠倒50次混匀；410.3.1PCR扩增表1基于微孔板或微量反应的PCR反应体系96孔板(10μL)384微孔板(2pμL)DNA模板(80ng/μL)5151反向引物(100μM)火延伸温度降低0.6℃,95℃变性25s,61℃退火延伸4511.1每份样品包含2个96孔板，每个96孔板用2个KASP标记进行鉴定，综合2个KASP标记的11.4参照阳性对照(亲本)基因型，记录异常基因型种子的数量。品种纯度(P)以%表示，按公式(1)计算：……511.5两个样品板即为两个重复，参照GB/T3543.5中表3,两个重复之间在容许误差范围之内的，以写(表2),并由检测员和技术负责人签字。样品板1标记1标记1检测员：技术负责人：日期：日期：注1:检测结果仅对送检样品负贵，不对送检样品以外的种子负6引物编号因组DHI92V4.0)变异引物序列F1引物序列F2TCGAGGATCCTGATTGAATGGCAGTGGAGTCCATGCTGCGTACATCAGAAT7引物编号因组DHL92引物序列F1引物序列F2引物序列RTAGCTC一CTGAAGTATCCT8表A.133个SNP位点及KASP分型引物信息(续)引物编号因组DHL92V4.0)变异引物序列F1引物序列F2引物序列RCTGAGAATTCAGGATTTGAGACCAACACCCTCCTCA9表A.133个SNP位点及KASP分型引物信息(续)引物编号因组DHL92V4.0)变异引物序列FI引物序列F2GCTCATCCT

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