中药材薄层层析

中药材薄层层析薄层色谱法:在中药材及其制剂定性判别中得到广泛应用,这关键是因为其含有分离分析双重功效,大大提升了判别工作灵敏度和专属性,成为中药判别关键方法。薄层色谱法还可用于药品杂质检验和含量测定。中国药典大多数品种采取硅胶薄层色谱法,少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝薄层色谱法。1.薄层色谱法判别理论基础基于相同物质在同一色谱条件下,表现出相同色谱行为这一基础规律。在同一块薄层板上点加供试品和对照物,在相同条件下展开,显色检出色谱斑点后,将所得供试品与对照物色谱图进行对比分析,从而对药品进行定性判别。2.薄层色谱特点简便、快速、易普及、含有分离和分析双重功效,且可采取共薄层对照分析法, 故专属性亦较强。3.对照物选择对照物分为对照品（关键为有效成份和特征性成份单体, 也包含对照提取物）和对照药材两种。对照物设置有以下三种方法:1）对照品对照:用已知中药制剂某一个有效成份或特征性成份对照品制成对照液,与样品在同一条件下层析,比较相同位置有没有同一颜色（或荧光）斑点,来检测是否含有某原料药材。可设置一个或数种对照品。2）对照药材对照:缺乏对照品情况下使用3)对照品和对照药材同时对照(“双对照”)为了正确检验制剂投料真实性,有时仅用对照品无法判别出来,这时可增加原药材作为对照药材。比如含有黄连、黄柏制剂,单用小檗碱对照品来判别是不足足以说明,此时应增加黄连作为对照药材进行检视。要求样品色谱图中关键斑点应与对照品和对照药材色谱图中相关斑点相一致,从而大大提升了薄层色谱判别法专属性和整体性,可有效地检出药品是否使用了假冒药材。

4.影响薄层色谱判别关键原因影响原因较多,比如供试液净化程度,吸附剂性能和薄层板质量、点样质量、展开剂组成和饱和情况、对照品纯度、展开距离、相对湿度和温度等。关键有以下四个方面:1）样品预处理及供试液制备中药成份复杂,未知成份多,在制剂中往往多种成份尽可能多提取出来,其中现有欲测成份也有“杂质”,常常因为相互干扰或背景污染而难以得到满意分离效果,甚至难以识别,所以供试液净化程度就很关键。为了得到较清楚色谱图,供试液制备要求:被测成份尽可能多提取出来,杂质要尽可能多除去。

薄层色谱点样点样是关键一步,既关系到能否得到可重现薄层色谱,也关系到定量结果正确是否,不良点样是测定误差关键起源。吸附剂活性与相对湿度影响硅胶为亲水性吸附剂,其含水量越高,吸附活性越弱,自点样开始直展开前,薄层板都是暴露在空气中,其活性取决于空气相对湿度,薄层板在不一样相对湿度条件下,其吸附活性亦不一样,致使薄层色谱重现性较差。4)温度影响在其她条件相同时,展开时温差较大会造成斑点扩散及被

分离物质Rf值和物质相互分离度不一致,影响薄层色谱重现性。六、仪器与材料（略)七、操作步骤通常操作步骤为:供试液制备→制备薄层板（制板)→点样→展开→显色与检视1.供试液制备:包含提取和净化（除去杂质,消除干扰)常见预处理方法有:溶剂提取法（包含冷浸、回流、超声提取);萃取法,升华法,蒸馏法、小型层析柱柱色谱法、离子交换法等。

2.制备薄层板（略)3.点样

定量点样.原点起始线≥5

mm≥8

mm1

~

1

.5

cm溶剂前沿展开剂液面（展开距离)8~15cm(点样位置)展开（略)显色与检视颜色较深成份:可直接在日光下检视其斑点。无色或浅色成份:多用喷雾法或浸渍法以适宜显色剂显色,或再加热使之显色。有荧光物质:或遇一些试剂可激发荧光物质可在紫外灯（365nm)下观察荧光色谱。有成份:可用试剂蒸气（如碘蒸气、氨蒸气)熏蒸显色。

无色有紫外吸收且不产生荧光成份:可用荧光淬灭法显色。即在含有荧光剂硅胶板（如硅胶GF254板),在紫外光灯（254n下观察板面上该成份形成荧光淬灭色谱。

6.统计薄层色谱图象可采取摄像设备拍照,以光学照片或电子图象形式保留。也能够用扫描仪统计对应色谱图。7.结果判定供试品色谱中,

在与对照品、对照药材或对照提取物色谱对应位置上,

显相同颜色或荧光斑点,

则判定为符合定。薄层色谱数码相机成像系统试验二、黄连薄层色谱判别供试液:黄连粉末0.2g+甲醇6ml→振荡10min→滤液对照药材溶液:黄连对照药材同上法操作,滤液为对照药材溶液薄层板:硅胶GF254硅胶板点样量:各2~5μl（用微量毛细管)展开剂:苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-水,(6:3:1.5:1.5:0.3)约20m