2025年(病理技师)病理技术试题及答案

2025年(病理技师)病理技术试题及答案一、单项选择题（每题1分，共40分）1.目前临床病理常规外检标本首选的固定液是A.95%乙醇B.10%中性缓冲福尔马林C.Zenker固定液D.Bouin固定液E.4%多聚甲醛2.按照《临床病理技术操作规范（2024版）》要求，常规石蜡活检标本切片的标准厚度为A.1-2μmB.3-5μmC.6-8μmD.9-10μmE.10-12μm3.病理标本固定时，固定液的体积至少应为标本总体积的A.1-2倍B.2-3倍C.3-4倍D.5-10倍E.15-20倍4.常规HE染色中，苏木精染液的染色特性是A.酸性染料，可将嗜酸性结构染为蓝紫色B.碱性染料，可将嗜碱性结构染为蓝紫色C.酸性染料，可将嗜碱性结构染为粉红色D.碱性染料，可将嗜酸性结构染为粉红色E.中性染料，可将所有细胞结构染为紫蓝色5.手术切除的大标本固定的时间要求（10%中性缓冲福尔马林，室温）为A.30分钟-1小时B.2-4小时C.6-72小时D.96小时以上E.1周以上6.用于肺癌EGFR、ALK等分子靶点检测的福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）标本，采用NGS方法检测时，要求镜下评估肿瘤细胞占比至少达到A.1%B.5%C.10%D.30%E.50%7.网状纤维染色最常用的经典方法是A.Masson三色染色法B.Gomori银浸染色法C.过碘酸-雪夫（PAS）染色法D.抗酸染色法E.维多利亚蓝染色法8.术中快速冷冻切片的常规切片厚度为A.2-3μmB.5-7μmC.8-10μmD.11-13μmE.14-16μm9.病理科处理新鲜手术标本、细胞学标本的操作区域，生物安全防护级别应为A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-4E.无特殊级别要求10.常规石蜡制片流程中，透明剂的核心作用是A.使组织硬化便于切片B.置换组织内的脱水剂，架起脱水剂与石蜡的溶媒桥梁C.脱去组织内的水分D.使组织细胞内的蛋白质凝固E.增强染色的对比度11.免疫组化染色中，最常用于核抗原（如ER、PR、Ki-67）热诱导抗原修复的缓冲液是A.pH6.0柠檬酸盐缓冲液B.pH9.0EDTA缓冲液C.pH7.2PBS缓冲液D.pH4.0醋酸盐缓冲液E.蒸馏水12.抗酸染色（齐-尼法）中，结核分枝杆菌的染色结果是A.菌体呈蓝色，背景呈红色B.菌体呈红色，背景呈蓝色C.菌体呈黑色，背景呈红色D.菌体呈黄色，背景呈蓝色E.菌体呈紫色，背景呈粉红色13.下列关于骨组织脱钙的描述，错误的是A.硝酸脱钙液脱钙速度快，但对组织抗原损伤较大B.EDTA脱钙液作用温和，对核酸、抗原保存好，适合免疫组化和分子检测C.脱钙终点可通过针刺法、X线透视法判断，其中X线法准确性最高D.脱钙时间越长，钙盐去除越彻底，染色效果越好E.脱钙后需要充分水洗去除残留脱钙剂，避免影响后续染色14.常规免疫组化染色中，内源性过氧化物酶阻断常用的试剂是A.3%过氧化氢溶液B.1%盐酸酒精C.0.1%胰蛋白酶D.5%牛血清白蛋白E.10%中性福尔马林15.病理科中性树胶封片时，要求中性树胶的折光率与玻璃载玻片接近，标准折光率约为A.1.20B.1.35C.1.50D.1.75E.2.0016.宫颈液基细胞学（TCT）标本制片后，常用的固定液及固定时间要求是A.10%中性福尔马林固定5分钟B.95%乙醇固定15分钟以上C.4%多聚甲醛固定30分钟D.AAF液固定1分钟E.丙酮固定10秒17.HE染色过程中，盐酸酒精分化的主要作用是A.使细胞核染色加深B.去除细胞质内非特异性结合的苏木精，使核浆分界清晰C.使伊红染色更鲜艳D.使切片从酸性环境恢复为碱性E.促进组织透明18.下列关于FFPE标本核酸特点的描述，正确的是A.福尔马林固定会导致核酸与蛋白质交联、核酸片段化，提取的核酸长度较短B.固定时间越长，核酸完整性越好，越适合分子检测C.FFPE标本中的RNA不会发生降解，可用于转录组检测D.固定温度不影响核酸完整性E.FFPE标本不需要脱蜡即可直接提取核酸19.PD-L1（22C3、SP263等克隆号）免疫组化检测时，要求石蜡切片切取后多长时间内完成染色，避免抗原降解A.切片后1个月内B.切片后2周内（4℃保存）C.切片后3个月内D.切片后6个月内E.无时间限制20.PAS染色中，阳性产物的颜色是A.蓝色B.黑色C.紫红色D.黄色E.绿色21.下列哪种情况属于病理标本接收的不合格情形，需退回补充处理A.标本袋标注患者姓名、住院号、标本部位与申请单一致B.固定液量为标本体积的8倍C.标本离体后2小时才放入固定液，且大标本未切开固定D.申请单填写完整，标注患者病史、术中所见E.小标本已用滤纸包裹，避免丢失22.常规石蜡切片烤片的标准温度和时间是A.37℃烤24小时B.60-65℃烤30-60分钟C.80℃烤10分钟D.100℃烤5分钟E.室温自然晾干23.按照《病理科建设与管理指南（2022版）》要求，病理活检石蜡块、阳性细胞学涂片的保存期限为A.5年B.10年C.15年D.30年E.永久保存24.Masson三色染色中，胶原纤维的染色结果是A.红色B.蓝色C.黄色D.黑色E.紫色25.免疫组化染色时，一抗孵育的常规条件是A.室温1小时或者4℃过夜B.37℃孵育4小时C.60℃孵育30分钟D.-20℃孵育2小时E.以上都不对26.下列哪种试剂是常用的石蜡制片脱水剂A.二甲苯B.梯度乙醇C.石蜡D.中性树胶E.苏木精27.冷冻切片切取后，最常用的快速固定液是A.10%福尔马林或95%乙醇B.无水丙酮C.4%多聚甲醛D.Zenker液E.Bouin液28.病理科产生的二甲苯废液、废弃福尔马林固定液的正确处理方式是A.直接倒入下水道B.收集后按危险医疗废物交由有资质的机构处理C.与生活垃圾一起丢弃D.加热蒸发后丢弃E.稀释后倒入下水道29.免疫组化DAB显色的原理是A.DAB在过氧化物酶存在下被过氧化氢氧化，生成不溶性棕褐色产物B.DAB与核酸结合生成蓝色产物C.DAB与胶原纤维结合生成红色产物D.DAB使细胞膜着色呈黑色E.以上都不对30.下列特殊染色中，可用于显示真菌的是A.抗酸染色B.PAS染色C.网状纤维染色D.苏丹Ⅲ染色E.普鲁士蓝染色31.普鲁士蓝染色是用于检测组织内的哪种成分A.含铁血黄素B.黑色素C.脂褐素D.钙盐E.黏液32.常规HE染色中，若切片出现核染色呈灰蓝色、无光泽，最可能的原因是A.苏木精染液氧化过度B.返蓝不充分C.伊红染色过深D.分化时间过长E.烤片温度过高33.下列哪项不是术中冷冻切片的适用范围A.判断病变良恶性B.评估手术切缘是否有肿瘤残留C.判断送检淋巴结是否有转移癌D.确定送检组织是否为目标病变组织E.对肿瘤进行精确的分型、分级，提供详细的预后指标34.免疫荧光染色最常用的固定液是A.10%中性福尔马林B.4%多聚甲醛C.95%乙醇D.丙酮E.Bouin液35.肾穿刺活检标本常规光镜检查的切片厚度要求是A.1-2μmB.2-3μmC.5-6μmD.8-10μmE.10μm以上36.下列关于细胞学涂片制作的描述，错误的是A.涂片要厚薄均匀，避免细胞重叠B.标本采集后要立即固定，避免细胞干涸变形C.含血液较多的标本，可先处理去除红细胞再涂片D.涂片越厚，细胞越多，诊断准确性越高E.涂片后要做好标记，避免混淆37.分子病理检测实验室进行PCR扩增时，为防止气溶胶污染，实验室分区应为A.试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区，单向流动B.所有操作在同一个区域完成C.标本制备和扩增在同一区域，试剂准备单独区域D.不需要分区，只要戴手套即可E.产物分析区可以和试剂准备区共用38.病理技术室常规质量控制指标中，石蜡切片优良率要求达到A.≥70%B.≥80%C.≥90%D.≥95%E.100%39.下列哪种固定液适合用于睾丸穿刺活检、生殖细胞标本的固定，能较好保存核结构A.Bouin固定液B.10%福尔马林C.95%乙醇D.丙酮E.二甲苯40.免疫组化染色中，血清封闭的主要作用是A.阻断内源性过氧化物酶B.减少组织电荷导致的非特异性抗体结合C.修复抗原D.使切片贴附更牢固E.增强显色强度单项选择题参考答案：1.B2.B3.D4.B5.C6.C7.B8.B9.B10.B11.B12.B13.D14.A15.C16.B17.B18.A19.B20.C21.C22.B23.E24.B25.A26.B27.A28.B29.A30.B31.A32.B33.E34.B35.B36.D37.A38.D39.A40.B二、多项选择题（每题2分，共20题，多选、少选、错选均不得分）1.下列属于常规病理标本固定目的的有A.防止组织自溶、腐败，保持细胞形态结构B.凝固细胞内蛋白质、核酸等成分，保存抗原活性C.使组织硬化，增加韧性，便于后续制片操作D.使组织内的病原体灭活，降低生物安全风险E.促进染色剂与组织成分结合，增强染色效果2.HE染色中出现细胞核染色过浅的可能原因有A.标本固定不及时，组织自溶导致核溶解B.苏木精染液氧化失效，染色能力下降C.盐酸酒精分化时间过长，过度洗脱苏木精D.伊红染色浓度过高E.抗原修复过度3.免疫组化染色出现非特异性背景染色的常见原因有A.一抗浓度过高，孵育时间过长B.内源性过氧化物酶、内源性生物素阻断不充分C.切片过厚，组织边缘干涸D.洗涤不充分，未结合的抗体残留E.二抗浓度过高，孵育温度过高4.下列属于国家病理质控中心（PQCC）规定的病理技术核心质控指标的有A.标本固定合格率B.常规石蜡切片优良率C.免疫组化染色合格率D.标本信息核对错误率E.分子检测报告及时率5.术中冷冻切片出现切片皱褶、不平整的原因有A.冷冻温度过高，组织硬度不足B.切片刀不锋利，有缺口C.抗卷板位置调整不当D.组织块冷冻过度，质地脆硬E.固定液浓度过高6.下列关于免疫组化对照设置的描述，正确的有A.每批次染色必须同时设置阳性对照、阴性对照B.待检组织内的正常表达成分可作为内对照，结果可信度高C.用PBS代替一抗设置空白对照，可排除二抗非特异性结合导致的背景D.阳性对照未出现预期阳性信号时，待检标本的阴性结果不可靠E.阴性对照出现阳性信号时，待检标本的阳性结果一定为假阳性7.石蜡切片出现脱片的可能原因有A.载玻片未做防脱处理，清洁度差B.切片过厚，有皱褶，贴附不牢C.烤片时间不足、温度过低D.抗原修复时缓冲液剧烈沸腾，冲刷组织E.组织含大量坏死、脂肪或凝血成分8.常规石蜡制片的流程包括A.固定、取材B.脱水、透明C.浸蜡、包埋D.切片、烤片E.染色、封片9.下列属于病理科生物安全防护要求的有A.处理新鲜标本时必须穿工作服、戴手套、口罩，必要时戴护目镜B.取材台必须配置排风、紫外线消毒设施，每日工作结束后消毒C.废弃病理标本必须经过高压灭菌或化学消毒后按医疗废物处理D.工作人员每年定期进行健康体检，接种相关疫苗E.可以在实验区进食、饮水10.下列关于分子病理检测标本处理的描述，正确的有A.避免使用含重金属的固定液（如Zenker液、Bouin液）固定分子检测标本B.标本固定时间控制在6-72小时，避免过度固定导致核酸交联C.脱钙骨组织优先选择EDTA脱钙，避免强酸脱钙导致核酸降解D.切片时要定期清洁切片机、毛笔、镊子，避免标本间交叉污染E.切好的白片可以长期室温放置，不影响核酸质量11.特殊染色中，可用于显示胶原纤维的方法有A.Masson三色染色B.VanGieson染色C.网状纤维银染D.PAS染色E.苏丹Ⅲ染色12.下列关于冷冻切片的描述，正确的有A.冷冻切片不需要经过脱水、透明、浸蜡过程，制片速度快B.冷冻切片的细胞形态清晰度优于石蜡切片，可作为最终诊断依据C.冷冻切片的诊断准确率约为95%-98%，存在一定的误诊风险D.富含脂肪的组织冷冻时需要更低的温度，保证切片硬度E.冷冻切片固定不及时会导致细胞肿胀、核染色质结构不清13.下列试剂属于病理科常用透明剂的有A.二甲苯B.TO型环保透明剂C.氯仿D.无水乙醇E.石蜡14.免疫组化抗原修复的常用方法有A.高温高压热修复B.水浴热修复C.胰蛋白酶、胃蛋白酶酶消化修复D.盐酸酒精修复E.冷冻修复15.病理标本取材时的注意事项有A.核对标本信息，确认标本数量、部位与申请单一致B.刀、剪锋利，避免挤压组织造成人为变形C.病变部位、切缘、淋巴结分别取材，做好标记D.小标本用滤纸包裹，避免在脱水过程中丢失E.取材厚度2-3mm，大小不超过2cm×1.5cm，保证脱水、浸蜡充分16.下列关于苏木精染液的描述，正确的有A.Harris苏木精是最常用的常规HE染色核染液B.苏木精本身染色能力弱，需要媒染剂（如铝盐）结合才能有效染色C.苏木精染液氧化成熟后才能使用，未成熟的染液染色能力差D.苏木精染液可以长期反复使用，不需要更换E.冰醋酸加入苏木精染液中可增强核染色的特异性，减少背景17.下列可导致免疫组化染色全片阴性（包括阳性对照）的原因有A.一抗失效，或抗体稀释比例错误（浓度过低）B.二抗失效，或二抗种属不匹配C.DAB显色液配制错误，未加入过氧化氢或试剂过期D.抗原修复步骤缺失，抗原未暴露E.一抗浓度过高18.病理细胞学检查的标本类型包括A.宫颈脱落细胞B.痰液、尿液脱落细胞C.胸腹水细胞D.细针穿刺细胞学标本E.术中印片细胞19.下列关于病理档案管理的描述，正确的有A.病理切片、石蜡块、细胞学涂片属于病理档案，必须规范管理B.借阅病理档案必须履行登记手续，不得随意丢失、损坏C.石蜡块因科研、会诊需要切取白片时，必须保留剩余蜡块D.病理切片保存期限为15年E.病理电子申请单、报告图像需要定期备份，永久保存20.病理技术人员的岗位要求包括A.经过专业培训，掌握病理技术操作规范和生物安全要求B.严格执行标准化操作流程，保证制片质量C.参与实验室质量控制和持续改进D.熟悉常用仪器设备的维护、保养E.可以直接出具病理诊断报告多项选择题参考答案：1.ABCDE2.ABC3.ABCDE4.ABCDE5.ABC6.ABCD7.ABCDE8.ABCDE9.ABCD10.ABCD11.AB12.ACDE13.ABC14.ABC15.ABCDE16.ABCE17.ABCD18.ABCDE19.ABCDE20.ABCD三、判断题（每题1分，共20分，正确打√，错误打×）1.手术切除的大标本可以直接放入固定液，不需要切开，待固定24小时后再取材。（×）2.10%中性缓冲福尔马林的pH值为7.2-7.4，可避免福尔马林酸化导致的细胞核染色不佳、甲醛色素沉积。（√）3.免疫组化抗原修复时间越长，抗原暴露越充分，染色效果越好。（×）4.常规HE染色中，红细胞被伊红染为鲜艳的橘红色，胶原纤维染为淡粉红色，平滑肌纤维染为深粉红色，染色层次分明。（√）5.病理标本取材时，所有的离体组织都必须取材，不得随意丢弃。（√）6.脱水时直接将组织放入无水乙醇，可以快速脱除组织内水分，缩短制片时间，提高制片质量。（×）7.二甲苯是常用透明剂，透明能力强，但对人体有一定毒性，操作时需要做好通风防护。（√）8.冷冻切片完成诊断后，剩余组织需要补充固定，常规脱水包埋做石蜡切片对照。（√）9.免疫组化染色中，只要阳性对照染色正常，就不需要设置阴性对照。（×）10.特殊染色的特异性高于免疫组化染色，可完全替代免疫组化。（×）11.病理科取材后的剩余标本，在报告发出后2周即可按医疗废物处理，不需要登记。（×）12.烤片温度过高、时间过长会导致组织收缩变脆，抗原破坏，免疫组化染色敏感性下降。（√）13.抗酸染色时，脱色时间过长会导致结核分枝杆菌脱色，出现假阴性结果。（√）14.分子病理检测时，每次检测必须设置阳性对照、阴性对照和内对照，避免假阳性、假阴性。（√）15.宫颈细胞学巴氏染色中，表层鳞状上皮细胞胞质呈粉红色，中层细胞胞质呈浅蓝色，细胞核呈深蓝色。（√）16.封片时树胶量过少、盖玻片放置不当会导致切片出现气泡，影响观察。（√）17.淋巴结活检标本需要做免疫组化时，标本固定时间不宜超过24小时，避免抗原交联。（√）18.苏丹Ⅲ染色可以显示组织内的脂肪成分，脂肪被染为橘红色，该染色需要用冷冻切片，不能用石蜡切片，因为石蜡制片过程中脂肪会被有机溶剂溶解。（√）19.病理技术操作中，出现标本编号错误、部位混淆属于严重质量差错，必须立即上报，启动追溯流程。（√）20.为提高制片速度，冷冻切片可以不用固定，直接染色。（×）判断题参考答案：1.×2.√3.×4.√5.√6.×7.√8.√9.×10.×11.×12.√13.√14.√15.√16.√17.√18.√19.√20.×四、简答题（每题5分，共4题，共20分）1.简述10%中性缓冲福尔马林固定液的配方、优点及常规标本固定的质控要点。参考答案：配方：40%甲醛溶液100ml，无水磷酸氢二钠6.5g，磷酸二氢钠4.0g，加蒸馏水至1000ml，调整pH至7.2-7.4。（1分）优点：①渗透速度快，组织固定均匀，收缩幅度小，能较好保存组织细胞的形态结构；②对蛋白质、核酸、抗原的保存效果好，可同时满足常规HE、特殊染色、免疫组化及分子病理检测的要求；③配制简单、成本低廉，适合大批量临床标本使用；④固定后组织硬度适中，便于后续脱水、包埋、切片操作。（2分）质控要点：①标本离体后30分钟内必须浸入固定液，避免室温放置时间过长导致组织自溶；②固定液体积为标本体积的5-10倍，大标本需每隔1cm做平行切开，空腔脏器剪开铺平，保证固定液充分渗透；③固定环境为室温（20-25℃），避免高温固定导致组织收缩、抗原破坏；④固定时间：穿刺及小标本固定6-12小时，大标本固定12-72小时，固定不足会导致结构模糊，固定超过72小时会导致核酸、抗原交联过度，影响后续检测；⑤定期检测固定液pH值，避免甲醛氧化为甲酸导致固定液酸化，产生甲醛色素。（2分）2.简述常规HE染色的标准化操作流程及优质切片的判定标准。参考答案：操作流程：①脱蜡至水：切片60℃烤片后，经二甲苯脱蜡2次各10分钟，梯度乙醇（100%、95%、80%、70%）各2分钟逐级复水，蒸馏水冲洗1分钟；②核染：Harris苏木精染液染色5-10分钟，自来水冲洗去除多余染液；③分化：1%盐酸酒精分化3-10秒，镜下控制分化程度，至细胞核清晰、细胞质无色即可，自来水冲洗；④返蓝：稀氨水或Scott液返蓝1分钟，自来水充分冲洗；⑤胞质染色：0.5%伊红Y染液染色1-3分钟，自来水快速冲洗；⑥脱水透明：经80%、95%、100%梯度乙醇各1分钟脱水，二甲苯透明2次各2分钟；⑦中性树胶加盖玻片封片。（3分）优质切片判定标准：①切片完整，厚度3-5μm，厚薄均匀，无刀痕、皱褶、震颤、气泡及污染物；②细胞核染色呈均匀蓝紫色，核膜、核仁、染色质结构清晰，无过染、欠染；③细胞质、胶原纤维、红细胞、肌纤维等嗜酸性结构呈层次分明的粉红色，红蓝对比清晰，核浆分界清楚；④切片透明充分，无云雾状发白区域，封片完整无溢胶、无空泡。（2分）3.简述免疫组化染色质量控制的核心环节。参考答案：①标本前处理质控：优先选择10%中性缓冲福尔马林固定标本，严格控制固定时间（6-72小时），避免固定不及时、固定液不合格导致抗原降解或过度交联；（1分）②试剂质控：所有一抗、二抗、显色试剂使用前必须进行预实验，确定最佳工作浓度，建立试剂使用台账，定期检查有效期，避免使用失效试剂；（1分）③操作流程质控：根据抗原定位（核、膜、胞质）选择合适的抗原修复方式和修复液，严格控制修复温度、时间；规范孵育温度、时间，全程避免切片干涸；严格执行洗涤流程，减少非特异性背景；（1分）④对照设置：每批次染色必须设置阳性对照、阴性对照、空白对照，优先利用组织内对照验证染色有效性，对照结果不合格的批次必须重新染色；（1分）⑤结果判读质控：染色完成后由技术人员首先评估染色质量，确认定位准确、对照合格、无明显非特异性背景后，方可提交诊断医师判读；定期参加PQCC室间质评，持续改进染色质量。（1分）4.简述分子病理检测FFPE标本处理的质控要求。参考答案：①标本固定：选用10%中性缓冲福尔马林，标本离体30分钟内固定，固定液量为标本的5-10倍，固定时间6-72小时，禁止使用含重金属的固定液（如Bouin、Zenker液）固定分子检测标本；②脱钙处理：骨组织标本优先选择EDTA温和脱钙，避免使用强酸脱钙导致核酸严重降解，脱钙终点经X线确认无钙盐残留后充分水洗；（1分）③标本评估：检测前由病理医师对HE切片进行肿瘤细胞占比评估，NGS检测要求肿瘤细胞占比≥10%，Sanger测序要求≥30%，肿瘤细胞占比不足时需通过显微切割富集肿瘤细胞，避免正常细胞过多导致假阴性；（1分）④切片防污染：切片前使用75%乙醇、核酸去除剂清洁切片机、刀架、镊子等工具，不同标本切片时更换一次性刀片或充分消毒，避免标本间交叉污染；白片切取后4℃保存，1个月内完成核酸提取，避免核酸降解；（1分）⑤核酸质控：提取的核酸需检测浓度、纯度、片段完整性，核酸质量达标后方可进行后续建库、扩增，核酸降解严重的标本需重新切片或重新取材；（1分）⑥实验对照：每批次检测必须设置阳性对照、阴性对照、内参对照，监控实验流程有效性，定期参加国家级室间质评，保证检测结果准确。（1分）五、案例分析题（共20分）某三甲医院病理科在2024年第四季度病理技术质控督查中，发现以下质量问题：①8例乳腺浸润性癌标本的ER、PR免疫组化染色出现核染色浅、非特异性背景高，部分区域核浆共染；②5例淋巴结标本的CD3、CD20染色出现细胞膜定位模糊、背景弥漫黄染；③3例切片在抗原修复过程中出现部分组织脱片；④2例批次的免疫组化染色全片无阳性信号，同步设置的阳性对照片也未显色。请结合病理技术操作规范回答以下问题：1.逐一分析上述各类质量问题的可能原因（12分）参考答案：（1）ER、PR为核定位抗原，出现核染色浅、背景高的原因：①固定不规范：部分标本离体后固定不及时，大标本未切开导致固定不全，核抗原降解；或固定时间超过72小时导致抗原交联过度，无法充分暴露；②抗原修复不匹配：ER、PR为核抗原，需pH9.0EDTA缓冲液高温高压修复，若使用pH6.0柠檬酸盐修复、修复温度不足、时间过短，会导致核抗原暴露不足，染色偏浅；若修复时间过长、温度过高，会导致组织抗原弥散、非特异性结合增加，出现核浆共染、背景升高；③抗体使用不当：一抗工作浓度过高或过低，浓度过高导致非特异性背景，浓度过低导致核染色浅；一抗孵育时切片部分区域干涸，导致抗体非特异性结合；④内源性酶阻断不充分，内源性过氧化物酶显色导致背景黄染；⑤苏木精复染过浅或返蓝不足，导致核染色辨识度下降。（4分）（2）CD3、CD20为细胞膜定位抗原，出现定位模糊、背景黄染的原因：①抗原修复过度：高温修复时间过长导致细胞膜蛋白变性、抗原弥散，无法准确定位在细胞膜上；②一抗浓度过高、孵育温度超过37℃，导致抗体与组织发生非特异性疏水结合，出现弥漫背景；③洗涤步骤不规范：PBS洗涤次数不足、冲洗不充分，未结合的一抗、二抗残留在切片上，导致背景染色；④二抗浓度过高，或二抗存在交叉反应，导致非特异性显色；⑤DA