新型冠状病毒核酸检测培训考试试题附答案

新型冠状病毒核酸检测培训考试试题附答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）在病毒分类上属于哪一类？A.甲型流感病毒B.β属冠状病毒C.腺病毒D.呼吸道合胞病毒2.下列哪一项不是新冠病毒核酸检测常用的靶基因？A.ORF1ab基因B.N基因C.E基因D.血凝素基因3.口咽拭子采集时，正确的采样部位是？A.舌尖B.两侧咽扁桃体及咽后壁C.牙龈D.硬腭4.新冠病毒核酸检测样本不能立即送检时，短时间保存温度宜为？A.-20℃B.4℃C.室温D.37℃5.核酸提取过程中，含胍盐裂解液的主要作用是？A.沉淀DNAB.裂解病毒并抑制RNA酶C.标记荧光信号D.促进Taq酶活性6.实时荧光PCR中，Ct值的含义是？A.扩增片段长度B.荧光信号达到设定阈值所需循环数C.模板初始浓度D.引物退火温度7.一份样本检测结果为ORF1ab基因阳性，N基因阴性，内标正常，此时应如何处理？A.直接报告阳性B.直接报告阴性C.单靶标阳性需复核或重新采样D.报告检测失败8.未经培养的新冠病毒临床样本进行核酸检测，可在哪级生物安全实验室进行？A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-49.新冠病毒分离培养等活病毒操作应在哪级生物安全实验室进行？A.BSL-1B.BSL-2C.BSL-3D.BSL-410.下列哪种消毒剂对新冠病毒灭活效果较差，一般不单独用于新冠消毒？A.75%乙醇B.含氯消毒剂C.过氧化氢D.氯己定11.新冠核酸采样管中常含有粉红色液体，其主要成分通常是？A.生理盐水B.病毒裂解保存液，含胍盐和指示剂C.普通细菌培养基D.磷酸盐缓冲液12.实时荧光RT-PCR扩增程序中，逆转录步骤通常设置的温度为？A.95℃B.72℃C.50℃D.4℃13.新冠核酸检测常用的实时荧光PCR探针类型是？A.SYBRGreen染料B.TaqMan水解探针C.凝胶电泳检测D.直接测序14.PCR实验室中，扩增区与产物分析区应保持？A.正压B.负压C.常压D.无特殊要求15.新冠咽拭子样本运输时，按感染性物质分类属于？A.A类感染性物质B.B类感染性物质C.非感染性物质D.放射性物质16.下列哪项操作最容易导致实验室核酸扩增产物污染？A.使用带滤芯枪头B.开盖操作扩增产物C.严格分区操作D.定期消毒台面17.新冠核酸检测中，内标的作用是？A.精确定量病毒载量B.监测样本提取和扩增过程是否有效C.区分不同病毒株D.增加引物特异性18.某批次实验中阳性对照无扩增，阴性对照正常，该批次样本结果应如何判断？A.正常报告B.实验无效，需重新检测C.全部判为阳性D.全部判为阴性19.对新冠病毒核酸样本反复冻融最可能导致？A.RNA降解B.RNA浓度升高C.扩增特异性增强D.内标信号增强20.核酸提取后的RNA长期保存，应放置于？A.常温B.-70℃或以下C.37℃D.4℃长期保存二、多项选择题（每题3分，共30分，少选得1分，错选不得分）1.新冠核酸检测可采用的临床样本类型包括？A.鼻咽拭子B.口咽拭子C.痰液D.肺泡灌洗液E.尿液2.下列哪些情况应拒收新冠核酸检测样本？A.无标签或标签不清B.采样管破裂C.使用非专用采样管D.样本量过少E.未按要求冷藏运输3.PCR实验室分区通常包括？A.试剂准备区B.样本制备区C.扩增区D.产物分析区E.办公区4.新冠核酸检测室内质控应包含？A.阳性对照B.阴性对照C.空白对照D.内标E.室间质评5.造成新冠核酸检测假阴性的原因包括？A.采样部位不当B.病毒载量低于检测限C.核酸提取失败D.样本运输温度过高E.扩增试剂失效6.造成新冠核酸检测假阳性的原因包括？A.扩增产物污染B.阳性对照污染C.加样枪交叉污染D.非特异性扩增E.阈值设置过低7.采集咽拭子时，采样人员应佩戴的防护用品包括？A.N95口罩B.护目镜或面屏C.防护服D.双层手套E.鞋套8.新冠核酸检测实验室废弃物处理正确的有？A.高压灭菌后按感染性废物处理B.含氯消毒剂浸泡后按感染性废物处理C.直接丢弃至普通垃圾桶D.锐器放入锐器盒E.应有专门标识9.关于新冠核酸检测样本运输，正确的有？A.三层包装B.使用生物安全运输箱C.4℃冷藏运输D.外包装应有UN3373标识E.可与其他普通物品混运10.实时荧光PCR扩增曲线异常的表现包括？A.扩增曲线不呈S型B.基线不平C.阴性对照出现扩增D.内标无扩增E.阳性对照Ct值明显偏离预期三、填空题（每空1分，共20分）1.新型冠状病毒基因组为单股正链RNA，其结构蛋白包括刺突蛋白（S）、膜蛋白（M）、包膜蛋白（E）和____蛋白。2.实时荧光RT-PCR检测新冠病毒，常用靶基因包括____和____。3.采样后样本应置于____℃冷藏保存，并在____小时内送检；超过该时间应置于____℃保存。4.荧光PCR中，Ct值越高，表示样本中初始模板量越____。5.含胍盐采样管的主要作用是____和____。6.实验室核酸提取常用的方法有____法和____法。7.PCR扩增一般包括变性、____、延伸三个基本步骤，其中Taq酶延伸温度通常为____℃。8.新冠病毒对____和____敏感，56℃处理____分钟可灭活。9.发生实验室污染时，台面可用有效氯____mg/L的含氯消毒剂擦拭。10.样本运送属于B类感染性物质，运输包装应具有____标识。四、判断题（每题1分，共10分）1.新冠核酸检测阳性是确诊新冠的重要病原学依据之一。2.口咽拭子采集时，拭子可以接触舌头和牙龈。3.试剂准备区可以放置临床样本。4.实验过程中，从扩增区进入样本制备区无需更换工作服。5.实时荧光PCR可以在扩增结束后开盖电泳确认产物。6.使用75%乙醇进行手卫生和物表消毒均有效。7.样本在4℃条件下可长期保存而不影响RNA稳定性。8.实验室应定期对台面、仪器和环境进行核酸污染监测。9.阳性对照出现阳性结果，阴性对照无扩增，说明该批次实验有效。10.佩戴N95口罩后必须进行密合性检查。五、简答题（每题6分，共30分）1.简述新冠核酸检测样本采集、保存与运输的关键要求。2.简述实时荧光RT-PCR检测新冠核酸的室内质控内容及失控处理原则。3.简述防止实验室假阳性污染的主要措施。4.简述PCR实验室分区设置及其气流、物品流向要求。5.简述一份新冠核酸检测样本从接收到报告的主要流程。六、综合应用题（每题10分，共20分）1.某实验室用双靶标试剂检测一份鼻咽拭子样本，结果：ORF1ab基因Ct=32.5，N基因Ct=33.1，内标Ct=28.0；阳性对照ORF1abCt=30.0，N基因Ct=30.5；阴性对照无扩增；空白对照无扩增。请判断该样本结果并说明依据，提出下一步建议。2.某实验室在常规检测中发现多份样本N基因出现典型扩增曲线，但ORF1ab基因均为阴性，且N基因Ct值波动较大；同时阴性对照出现N基因弱阳性扩增，阳性对照正常。请分析最可能的原因、处理措施和预防措施。参考答案一、单项选择题答案1.B2.D3.B4.B5.B6.B7.C8.B9.C10.D11.B12.C13.B14.B15.B16.B17.B18.B19.A20.B二、多项选择题答案1.ABCD2.ABCDE3.ABCD4.ABCD5.ABCDE6.ABCDE7.ABCDE8.ABDE9.ABCD10.ABCDE三、填空题答案1.核衣壳（N）2.ORF1ab基因、N基因3.4、24、-70（或-80）4.少（低）5.灭活病毒、保护RNA（或抑制RNA酶）6.磁珠法、柱提法（或硅胶膜法）7.退火、728.热、紫外线、309.100010.UN3373四、判断题答案1.对2.错3.错4.错5.错6.对7.错8.对9.对10.对五、简答题答案1.采样前核对受检者信息，使用专用病毒采样管。口咽拭子采集两侧咽扁桃体及咽后壁，避免接触舌、牙龈和硬腭；鼻咽拭子沿鼻腔后壁进入采集。采样后将拭子头放入含胍盐的病毒保存液中，折断拭子杆，旋紧管盖。样本应4℃冷藏保存，24小时内送检；超过24小时应置于-70℃或以下保存。运输使用三层包装，内层为样本管，中层为防水袋，外层为生物安全运输箱，外包装具有UN3373标识，由专人转运，避免反复冻融和剧烈震荡。2.每批实验必须设置阳性对照、阴性对照、空白对照，样本中应有内标。阳性对照应在试剂盒说明书规定的Ct范围内出现典型S型扩增曲线；阴性对照和空白对照应无扩增；内标应正常扩增。以上条件同时满足时，该批次实验结果有效。若阳性对照无扩增、阴性对照出现扩增、内标异常或阳性对照Ct值明显偏离预期，应判定实验失控，该批样本结果不可报告。应分析失控原因，如试剂失效、操作错误、加样污染、仪器故障等，纠正后重新检测。3.防止假阳性污染的主要措施包括：严格分区操作，试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区独立使用，人员、物品单向流动；使用带滤芯枪头，避免气溶胶污染；阳性对照和质粒最后加样，避免开盖操作扩增产物；定期用核酸清除剂或有效氯1000mg/L含氯消毒剂擦拭台面、仪器和加样枪；紫外照射和通风；定期采集环境样本进行核酸污染监测；发现污染立即停止实验，清洁验证后再恢复检测。4.PCR实验室应分为试剂准备区、样本制备区、扩增区和产物分析区四个独立区域。试剂准备区应保持正压，样本制备区、扩增区和产物分析区应保持负压，防止核酸气溶胶外逸和交叉污染。物品流向为试剂准备区→样本制备区→扩增区→产物分析区，严禁逆向流动。人员进入各区域应更换相应工作服、手套，各区域器材不得混用。扩增产物不得返回上游区域，扩增后产物分析区应严格封闭管理。5.样本接收时核对信息、检查包装完整性和运输温度，不合格样本拒收并记录。登记编号后，如需灭活可在生物安全柜内进行。将样本进行核酸提取，同时设置阴阳性对照和空白对照。在试剂准备区配制反应体系，在样本制备区加入模板，在扩增区上机进行实时荧光RT-PCR扩增。反应结束后分析扩增曲线和Ct值，根据靶基因、内标及对照结果判读。审核无误后发出报告，阳性结果按规定进行传染病报告，样本按感染性物质保存和处置。六、综合应用题答案1.该样本结果应判为新冠病毒核酸阳性。依据：ORF1ab基因和N基因两个靶基因均出现典型S型扩增曲线，Ct值分别为32.5和33.1，低于试剂盒说明书规定的阳性判断值；内标Ct=28.0正常，说明样本提取和扩增过程有效；阳性对照Ct值在预期范围内，阴性对照和空白对照均无扩增，说明实验有效。Ct值处于中等水平，提示样本中存在一定载量的病毒核酸。下一步建议：按照阳性结果进行报告，同时结合受检者临床表现和流行病学史综合判断；必要时重新采样复核；样本按感染性物质保存和处置，按规定进行传染病报告和后续管理。2.最可能的原因是N基因核酸污染，污染来源可能为N基因阳性对照、质粒或既往扩增产物。阴性对照出现N基因弱阳性扩增，说明实验体系中存在N基