CN119488062A 一种高效诱导产巨大戟醇的铁海棠毛状根的方法 （江苏省中国科学院植物研究所）_第1页
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一种高效诱导产巨大戟醇的铁海棠毛状根本发明公开了一种高效诱导产巨大戟醇的本发明的诱导培养方法可实现大戟属植物铁海23）毛状根的诱导：将预培养后的外植体放入上述已制备好的侵染菌液中，侵染4～62.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤3.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤2）中振荡培养发根农杆菌菌液至OD600=的外植体首先置于1/2MS固体基本培养基+400mg/L头孢噻肟钠的除菌培养基上进行除3大戟醇甲基丁烯酸酯的成本一直居高不下。2013年LEO制药公司联合美国斯克里普斯研究导培养铁海棠毛状根的方法，获得的毛状根可提取获得比原植物中含量更高的巨大戟醇。4菌液接于含50mg/L卡那霉素的50mLYEB液体培养基中，相同条件振荡培养至菌液OD600基本培养基+400mg/L头孢噻肟钠的除菌培养基上进行除菌培养，待肉眼可见长出毛状根且培养基和外植体表面均无肉眼可见菌斑后，可在继代时逐步降低头孢噻肟钠的浓度，海棠活性次生代谢产物的生产及药用资源的进一步开发5次培养基，每次降低100mg/L头孢噻肟钠的浓度，除菌培养19天后观察到白色毛状根长出转化的原根基因组DNA。PCR扩增发根农杆菌Ri质粒T_DNA上的rolB和rolC基因序列，所用rolB基因的上游引物序列为5’_CGAGGGGATCCGATTTGCTTT_3’，下游引物序列为5’_根农杆菌ArA4质粒DNA扩增出的rolB和rolC基因片段大小一致（rolB：622bp；rolC：586bp正常植株原根DNA未扩增出rolB和rolC的基因片段，证明发根农杆菌ArA4中Ri质6于含50mg/L卡那霉素的50mLYEB液体培养基中，相同条件振荡培养，待菌液OD600=转化的原根基因组DNA。PCR扩增发根农杆菌Ri质粒T_DNA上的rolB和rolC基因序列，所用rolB基因的上游引物序列为5’_CGAGGGGATCCGATTTGCTTT_3’，下游引物序列为5’_根农杆菌ArA4质粒DNA扩增出的rolB和rolC基因片段大小一致（rolB：622bp；rolC：586bp正常植株原根DNA未扩增出rolB和rolC的基因片段，证明发根农杆菌ArA4中Ri质7

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