《Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定(核磁共振波谱法)》

ICS71.040.50

C20

团体标准

T/ZHLSSHXXX—2025

《Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定

（核磁共振波谱法）》

QualitativeanalysisofFmoc-Ser(tBu)-OHNuclear-

magneticresonancespectroscopy

2025-XX-XX发布2025-XX-XX实施

宁波市镇海区绿色石化发展促进会发布

T/ZHLSSHXXX—2025

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定（核磁共振波谱法）

重要提示（危险或警告或注意）：使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件

并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法

规规定的条件。

1范围

本文件规定了N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-O-叔丁基-L-丝氨酸（以下简称Fmoc-O-叔丁基-L-

丝氨酸）含量测定核磁共振波谱法的原理、试验步骤、试验报告、检验规则、标志、标签和包装。

本文件适用于Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。凡是注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）

适用于本文件。

GB/T8170数字修约规则与极限数值的表示和判定

JY/T0578超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱测试方法通则

JJF1448超导脉冲傅里叶变换核磁共振谱仪校准规范

3术语和定义

JY/T0578界定的术语和定义适用于本文件。

4要求

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸质量应符合表1所示的技术要求。

表1技术要求

项目指标

含量%（m/m）≥98.5

5原理

本文件以氘代二甲基亚砜为溶剂，将一定量的Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸和内标物1,3,5-三甲氧

基苯于核磁管中，在规定的参数条件下，测定试样的核磁共振氢谱，通过比较样品定量峰与内标

物定量峰面积，计算Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量。

6试验条件

6.1场地不得有强烈的机械振动和电磁干扰，铁磁性物品应远离磁体。

6.2温度：18℃～30℃。

6.3湿度：≤75%。

6.4电源：使用稳压电源或UPS电源，电源电压波动＜5%，频率稳定。

6.5地线：单独接地，状况良好。

1

T/ZHLSSHXXX—2025

7试剂和材料

7.1氘代二甲基亚砜：纯度＞99.5%，含有少量二甲基硅烷（简称TMS）。

7.2核磁管：为核磁专用样品管，选用与探头（常规5mm）匹配的样品管，外径为5mm。

8仪器设备

8.1核磁共振波谱仪：具有400MHz或更高频率的傅里叶变换核磁共振波谱仪（FT-NMR）。

8.2分析天平：十万分之一天平，感量0.01mg。

9样品

9.1样品要求：样品无磁性或不含有顺磁性物质，溶解性好，并与溶剂不发生反应。

9.2样品的制备：分别精确称取约10mg样品及内标物放进5mm核磁管内，加入约0.5ml氘代二

甲基亚砜，充分摇匀，备用。

10试验步骤

10.1仪器校准

按照JJF1448的规定对1H灵敏度、分辨率、线型及定量重复性进行校准。

10.2核磁共振氢谱检测参考条件

（1）测试温度：室温

（2）脉冲程序：单脉冲；

（3）试验温度：室温；

（4）数据点：64K；

（5）扫描宽度：δ-4.0～δ16；

（6）脉冲角度：90°；

（7）扫描次数：32次；

（8）空扫次数：2次；

（9）弛豫延迟时间：15s。

10.3数据采集及处理

将制备好的样品（9.2）放入核磁共振波谱仪内，按照10.2设置实验参数，并进行数据采集。

对收集到的自由感应衰减信号（FID）进行傅里叶变换、相位校正、基线校正，并参照附录A进行积

分及标峰。

10.4结果分析

10.4.1定性分析

对采集样品的核磁共振1H谱（见附录B）信号峰进行归属。

10.4.2结果计算与表示

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量按公式（1）计算：

��---------------------------(1)

sr

�s∗�∗�

�r

srsr

�%=�r∗�∗�∗�∗100%

2

T/ZHLSSHXXX—2025

公式中：

As——为Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的定量峰积分面积；

ns——为Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸定量峰包含对应基团的氢原子数量，为9；

Ms——为Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的分子量，383.44；

ms——为称取的Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸质量，单位为毫克（mg）；

Ar——为内标物1,3,5-三甲氧基苯的定量峰积分面积；

nr——为内标物1,3,5-三甲氧基苯定量峰对应基团的氢原子数量，为3；

Mr——为内标物1,3,5-三甲氧基苯的分子量，168.19；

mr——为称取的内标物1,3,5-三甲氧基苯质量，单位为毫克（mg）；

Wr——为内标物1,3,5-三甲氧基苯质量百分纯度，%。

结果保留两位小数。

11精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的2%。

12试验报告

试验报告应包括以下内容：

（1）样品信息，包括委托方、样品名称及状态、来样日期等；

（2）检测单位、检测依据、检测项目、检测日期等信息；

（3）使用的仪器名称和型号；

（4）报告编制人、审核人、批准人、批准日期；

（5）核磁氢谱图及分析结果。

13检验规则

13.1本文件规定的指标项目采用逐批检验的方式。

13.2每310-320Kg产品为一检验批。

13.3本产品应由生产厂质监部门按本文件检验或委托第三方机构检验。检验合格后再由生产厂质

监部门进行其它指标的检验。

13.4使用单位有权按照本文件的规定对所收产品进行验收。

13.5采用GB/T8170规定的修约值比较法进行判定。

13.6检验结果中如不符合本文件要求，应加倍送检样品重新检验，核验结果不符合本文件要求时，

整批产品为不合格。

14标签与包装

14.1包装：双层PE袋+铝塑袋，充氮气抽真空；10Kg/袋，20Kg/桶。

14.2标签：注明产品名称、批号、生产厂名、生产日期等信息。

3

T/ZHLSSHXXX—2025

15安全要求

本产品在操作人员进行作业时，应戴好防护用具避免眼和皮肤的接触，避免吸入蒸汽。存储条

件：20℃以下阴凉库。

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T/ZHLSSHXXX—2025

附录A

（资料性）

谱图记录

A.1标峰：

A.1.1定标：三甲基硅烷（TMS）化学位移定义为δ0；

A.1.2标峰：依次标注各信号吸收峰的化学位移值。

A.2积分：

按表A.1将化学位移δ13.0～δ0.5范围内谱峰准确积分。表A.1所列核磁共振氢谱中样品及内

标物的定量峰积分面积的限定。

表A.1定量峰积分面积的限定

样品名称化学位移/δ定量峰积分范围

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸1.13±0.2以最高峰对称，δ±0.3积分

1,3,5-三甲氧基苯6.09±0.2以最高峰对称，δ±0.3积分

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T/ZHLSSHXXX—2025

附录B

（资料性）

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸及1,3,5-三甲氧基苯核磁共振1H谱图

图B.1Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸及1,3,5-三甲氧基苯核磁共振1H谱图

图引标号说明：

A——内标物1,3,5-三甲氧基苯的定量峰；

B——Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的定量峰；

C——氘代试剂DMSO中参比物TMS的信号峰。

————————————————————

6

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定（核磁共振波谱法）

编制说明

一、编制目的和意义

N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-O-叔丁基-L-丝氨酸（以下简称Fmoc-O-叔丁基-L-

丝氨酸）可用作生物化学合成试剂，多用于多肽类药物分子和生物活性分子的结构修

饰与合成中。它可以作为生物试剂用于多肽的合成和修饰过程中，例如它可以用于修

饰蛋白质中的丝氨酸残基，从而改变其结构和生物活性。Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸结

构中含有一个活性的羧基和酰胺基团，其可以在适当的缩合剂作用下和醇类化合物或

者胺类化合物发生缩合反应，得到想要的酯类或者酰胺类衍生物，为多肽类药物分子

和生物活性分子的结构修饰和合成提供了重要的工具。

国内多肽药物（如糖尿病药物、抗癌肽）及疫苗研发的快速发展，推动了对Fmoc

保护氨基酸的需求。据行业报告，2024年中国市场销售收入达数亿元，预计至2030年

将保持显著的年复合增长率。另外生物制药企业对高纯度、低成本氨基酸衍生物的需

求推动市场，Fmoc-L-ser(tBu)-OH作为常规构建单元，供应商竞争激烈。Fmoc-O-叔

丁基-L-丝氨酸合成、生产过程中会产生中间产物或衍生物，影响产品的质量，因此

需对制备产品进行质量控制，确定Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量是进行质量控制最有

效的方法之一。

宁波人健化学制药有限公司突破了Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸合成新技术，年生产

量达到了60吨左右，是国内主要Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸生产商之一。产品的纯度是

影响产品价格的主要因素，因此每批产品均需进行纯度含量的测定。测定Fmoc-O-叔丁

基-L-丝氨酸（Fmoc-L-ser(tBu)-OH）含量通常采用高效液相色谱（HPLC）和定量核磁

共振（qNMR）方法，其中高效液相色谱法具有高灵敏度，测试结果比较准确，缺点是

需标准品，方法开发复杂，测试周期较长，严重影响了产品的研发和产品出货速度。

定量核磁共振（qNMR）法，无需标准品，测定绝对定量，测试速度快，是进行快速药

物定量分析最有效的方法之一。因此采用定量核磁技术测定Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸

含量标准的制定，是一个有效解决企业产品研发技术滞后和产品出货慢的方法。测定

1

定量核磁共振（qNMR）法在药物纯度检测领域具有使用范围广的特点，在相同标准情

况下，不同设备，不同人员测定结果，均具有较好的重复性，满足Fmoc-O-叔丁基-L-

丝氨酸含量的测定需求。

本标准的制定，除满足宁波人健化学制药有限公司及上下游企业本身产品质控需

求外，还可推广到全国使用，为Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸国内合成技术迭代，快速研

制新技术都具有很好的意义。

二、工作简况

（一）任务来源

宁波市镇海区绿色石化发展促进会关于《Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定

（核磁共振波谱法）》等三项团体标准立项的通知（镇绿石促〔2025〕2号）。

（二）标准制定相关单位及人员

本标准主要起草单位：中国科学院宁波材料技术与工程研究所。

本标准参与起草单位：宁波人健化学制药有限公司、宁波大学、宁波九胜创新医

药科技有限公司、宁波诺柏医药有限公司。

本标准主要起草人员：张公军、顾华平、李天华、徐娟芳、柯培玲、郑飞、舒小

容、徐林峰、韩澜、周立、左莉、公萍、杨增转、张科、张冰雪。

（三）主要工作过程

工作依据及通用程序

根据2019年9月1日《国家标准化管理委员会、民政局关于印发<团体标准管理规

定>的通知》等有关文件要求，团体标准要与国家标准、行业标准相互协调、相互支撑。

按照《标准化法》和GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构

和起草规则》、T/CAS1.1-2017《团体标准的结构和编写指南》及《宁波市镇海区绿

2

色石化发展促进会团体标准管理办法》的规定执行。

本标准的制定按规定的通用程序：提案、立项、起草、征求意见、技术审查、批

准、编号、发布、复审进行。

召开立项论证会

2025年5月，宁波市镇海区绿色石化发展促进会组织召开了团体标准《Fmoc-O-叔

丁基-L-丝氨酸含量的测定（核磁共振波谱法）》立项专家论证会。对《Fmoc-O-叔丁

基-L-丝氨酸含量的测定（核磁共振波谱法）》标准制定工作的产品适用范围、要求、

试验方法、检验规则及标志、包装、运输和贮存等方面内容加以论证和研讨，一致认

为该标准符合相关规定，同意立项。

起草标准征求意见稿

2025年6-10月，标准编制组根据相关材料和本单位的实践总结,并借鉴省内外先进

经验起草标准，形成标准征求意见稿。

三、标准编制原则和主要内容

（一）标准编制原则

本标准起草遵循规范性、科学性、适应性、先进性原则。促进医药化工行业实现

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸资源化、生产工艺现代化、产品环保无害化、市场竞争规范

化。

1.规范性原则

本标准根据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和

起草规则》、T/CAS1.1-2017《团体标准的结构和编写指南》及《宁波市镇海区绿色石

化发展促进会团体标准管理办法》等相关规定进行编写。

2.科学性原则

根据企业实际制订标准原则，确保标准能够代表工业发展的水平、标准的可行性、

可靠性和科学性要求。

3

3.适应性原则

本标准制订过程中，主要起草人员现场考察了主要研发、生产、下游应用企业及

检验检测单位，并与相关人员座谈，了解了企业的主要原料情况、生产工艺、产品结

构、市场销售等情况，多次多方征求意见、交换观点及采纳建议、反复修改，使标准

更好地适应企业的现状实际与未来发展。

4.先进性原则

查阅了相关的法律法规、标准资料、科研论文，考察了先进的生产工艺，确保本

标准在国内的先进性。

（二）标准编制主要内容

本标准规定了一种实验室检测方法，用来测定Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量。

通过不同条件试验总结出核磁共振谱仪法测定分析方法。包括样品准备、仪器分析、

数据处理和实验验证等方面的内容，详细说明实验室材料、试剂、仪器以及具体的操

作步骤，并就核磁测试条件的内容进行了详细的阐述，以便于在分析实施过程中加强

管理、保证数据质量。

1.原理

本文件以氘代二甲基亚砜为溶剂，将一定量的Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸和内标物

1,3,5-三甲氧基苯于核磁管中，在规定的参数条件下，测定试样的核磁共振氢谱，通

过比较样品定量峰与内标物定量峰面积，计算Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量。

2.原料来源

本标准所需产品为宁波人健化学制药有限公司生产的Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸。

3.本标准涉及的产品范围

4

本标准适应于不同生产工艺得到的含有少量无机非磁性物质或其它有机副产物的

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的测定。

4.质量要求

本标准主要用于高效、快速的检测Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的纯度，以便进行生产

过程中的质量控制，快速筛选工艺流程。因此本方法测得Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸≥98%，

为合格产品。

5.主要技术工作内容

5.1试剂和材料

5.1.1氘代二甲基亚砜：纯度＞99.5%，含有少量二甲基硅烷（简称TMS）。

5.1.2核磁管：为核磁专用样品管，选用与探头（常规5mm）匹配的样品管，外径为5

mm。

5.2主要仪器

5.2.1核磁共振波谱仪：具有400MHz或更高频率的傅里叶变换核磁共振波谱仪（FT-

NMR）。

5.2.2分析天平：十万分之一天平，感量0.01mg。

5.3样品

5.3.1样品要求：样品无磁性或不含有顺磁性物质，溶解性好，并与溶剂不发生反应。

5.3.2样品的制备：分别精确称取约10mg样品及内标物放进5mm核磁管内，加入约

0.5ml氘代二甲基亚砜，充分摇匀，备用。

5.4实验条件的选择

5.4.1氘代试剂的选择

根据Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸结构特点，选用氘代二甲基亚砜，可很好的溶解样

品，并与产品不发生反应，信号不重叠。

5.4.2内标物的选择

标准样品或内标物通常结构简单，有一组或两组核磁出峰。具有较高的纯度

5

（≥99%），吸湿性不强，化学性质稳定，可以长久保存，不挥发，且溶于指定的氘代

溶剂中，不与待测样品的定量峰互相干扰重叠。常见的定量核磁氢谱用内标物有对苯

二甲酸二甲酯、对苯二甲酸、苯甲酸、顺丁烯二酸、富马酸、1,3,5-三甲氧基苯等物

质。综合考虑溶解性、吸湿性、重叠情况、信号峰为单峰等因素，最合适的内标物为

1,3,5-三甲氧基苯。

5.4.3定量峰的选择及结果计算表示

通常选择无干扰的信号作为定量的特征峰。添加1,3,5-三甲氧基苯的Fmoc-O-叔丁

1

基-L-丝氨酸核磁氢谱图见图1.对其H-NMR信号进行归属。发现样品的δB1.13与内标

物的δA6.09不重合（图1），且附近无干扰峰，因此选用这两组信号作为定量的特征

峰。

图1添加1,3,5-三甲氧基苯的Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的核磁氢谱图

样品中Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量按公式（1）计算：

��---------------------------(1)

sr

�s∗�∗�

s�rr

�%=�∗�r∗�s∗�∗100%

公式中：r

As——为样品中Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的定量峰积分面积；

ns——为Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸定量峰包含对应基团的氢原子数量，为9；

Ms——为Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的分子量，383.44；

6

ms——为称取的样品质量，单位为毫克（mg）；

Ar——为内标物1,3,5-三甲氧基苯的定量峰积分面积；

nr——为内标物1,3,5-三甲氧基苯定量峰对应基团的氢原子数量，为3；

Mr——为内标物1,3,5-三甲氧基苯的分子量，168.19；

mr——为称取的内标物质量，单位为毫克（mg）；

Wr——为内标的质量百分纯度，%。

结果保留两位小数。

5.4.4仪器参数的选择

5.4.4.1弛豫延迟时间（D1）

弛豫延迟时间（D1）对NMR信号的积分值影响较大，定量实验中通常设定D1值不低

于5倍的定量峰中最长的弛豫延迟时间T1值。本实验利用翻转恢复试验对样品和内标物

分别进行了T1值的测定，测试结果发现，T1值均小于3s。为保证每次采样质子核磁共振

信号得到充分的弛豫，并且不影响NMR信号积分值的测定，设定D1为15s。

5.4.4.2扫描次数（NS）

扫描次数是实验中另外一个重要的参数。在D1设置为15s的前提下，分别对NS为4、

8、16、32、64进行了考察。测试结果见表1。结果表明，当NS＞4，Fmoc-O-叔丁基-

L-丝氨酸含量均趋于稳定，为保证具有较好的谱图，NS设定为32。

表1不同扫描次数Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量

扫描次数化学位移/δ吸收峰序号样品量/mg峰面积（A）含量/%

6.09A13.053

499.12

1.13B13.424.0647

6.09A13.05399.13

8

1.13B13.424.0650

6.09A13.05399.15

16

1.13B13.424.0658

6.09A13.05399.16

32

1.13B13.424.0660

6.09A13.053

6499.19

1.13B13.424.0676

7

5.4.4.3测试条件

结合5.4.4.1和5.4.4.2的条件的选择，采用以下方法进行样品的测试。

a)脉冲程序：单脉冲；

b)试验温度：室温；

c)数据点：64K；

d）弛豫时间：15s；

e）扫描宽度：-1.0×10-6～20×10-6；

f）脉冲角度：90°；

g）脉冲间隔时间：4s；

h）扫描次数：32次；

i）空扫次数：2次。

5.5重复性试验

按照5.4.4.3检测条件连续对制备好的样品（参照5.3.2）连续测定10次，获取1H-

NMR谱并积分，计算Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量，结果见表2。Fmoc-O-叔丁基-L-

丝氨酸含量的最大差值为0.05%，表明测试重复性较好。

表2Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量精密度试验

重复次数化学位移/δ吸收峰序号样品量/mg峰面积（A）含量/%

6.09A13.013

199.01

1.13B13.364.0545

6.09A13.013

299.01

1.13B13.364.0545

6.09A13.013

399.06

1.13B13.364.0562

6.09A13.013

499.05

1.13B13.364.0559

6.09A13.013

599.01

1.13B13.364.0545

6.09A13.013

699.02

1.13B13.364.0549

76.09A13.01399.04

8

1.13B13.364.0555

6.09A13.013

899.03

1.13B13.364.0553

6.09A13.013

999.02

1.13B13.364.0548

6.09A13.013

1099.04

1.13B13.364.0556

5.6精密度试验

按照5.3.2的方法平行制备样品6份，分别置于6支核磁样品管中。按照5.4.4.3测试

条件进行测定，获取1H-NMR谱并积分，计算Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量，结果见表3。

Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量的最大差值为1.49%。

表3Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量重复性试验

次数化学位移/δ吸收峰序号样品量/mg峰面积（A）含量/%

6.09A7.493

1100.47

1.13B9.284.9638

6.09A9.753

299.04

1.13B9.583.8806

6.09A10.153

399.17

1.13B9.943.8725

6.09A11.093

499.88

1.13B9.663.4691

6.09A13.633

5100.53

1.13B12.393.6439

6.09A10.843

699.86

1.13B11.194.1104

5.7稳定性试验

按照5.3.2的方法制备样品，分别于1、2、4、8、12、24h进行测定，获取1H-NMR

谱并积分，计算Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸的含量，结果见表4。Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨

酸的含量最大差值为0.09%，表明样品溶液在24h内稳定。

9

表4Fmoc-O-叔丁基-L-丝氨酸含量稳定性试验

时间h化学位移/δ吸收峰序号样品量/mg峰面积（A）含量/%

6.09A12.563

199.25

1.13B13.064.1151

6.09A12.563

299.22

1.13B13.064.1141

6.09A12.563

499.16

1.13B13.064.11