中草药中各类化学成分提取分离方法

中草药中各类化学成分提取分离方法2.酸性化合物：结构中含有酚羟基化合物——黄酮、醌类、苯丙素（香豆素、木脂素)及其苷类结构中含有羧基化合物——有机酸、葡萄糖醛酸中草药中各类化学成分提取分离方法2/69黄酮蒽醌香豆素木脂素中草药中各类化学成分提取分离方法3/693.两性化合物:

结构中现有碱性基团也有酸性基团

氨基酸、蛋白质4.中性化合物:

分子结构中既无碱性基团也无酸性

基团化合物，如萜类和挥发油、

甾体等。

中草药中各类化学成分提取分离方法4/69二、无效成份

1.脂溶性

蜡－高级不饱和脂肪酸（16－30碳)和

高级一元醇结合酯

脂肪油－不饱和脂肪酸（链长短不一)与丙三醇形成甘油酯，通常称为混合甘油酯。

叶绿素及胡萝卜素

中草药中各类化学成分提取分离方法5/692.水溶性

多糖类－淀粉、纤维素、树胶、果胶、粘液质多元酚类化合物－鞣质中草药中各类化学成分提取分离方法6/69中草药有效成份提取

一、溶剂提取法二、水蒸汽蒸馏法三、升华法中草药中各类化学成分提取分离方法7/69一、溶剂提取法是依据天然药品中各种成份在溶剂中溶解性质,选取对有效成份溶解度大,而对不需要溶出成份溶解度小溶剂,将有效成份从药材组织中溶解出来方法。

中草药中各类化学成分提取分离方法8/69溶剂可分为:水、亲水性和亲脂性有机溶剂惯用溶剂:极性由弱到强依次排序为石油醚＜四氯化碳＜苯＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水中草药中各类化学成分提取分离方法9/69被溶解物质也有亲水性及亲脂性之分。溶质在溶剂当中溶解遵照相同相溶原理,亲水性化学成份易溶于水或亲水性有机溶剂中,亲脂性成份易溶于亲脂性有机溶剂中。

中草药中各类化学成分提取分离方法10/69石油醚→油脂、蜡、叶绿素、挥发油、游离甾体及三萜类化合物氯仿或醋酸乙酯→游离生物碱、有机酸及黄酮、香豆素苷元丙酮或乙醇、甲醇→苷类、生物碱盐、鞣质等水→氨基酸、糖类、无机盐等中草药中各类化学成分提取分离方法11/69惯用溶剂提取法（一)冷提法1.浸渍法2.渗漉法（二)热提法1.煎煮法2.回流提取法3.连续回流提取法中草药中各类化学成分提取分离方法12/69冷提法1.浸渍法:是用水或醇浸渍药材一定时间，然后合并提取液，并将其减压浓缩方法。该法因为普通都是在低温下进行，不用加热，所以适合于挥发性成份及受热易分解成份提取。但提取时间较长，效率低。用水浸提时还要注意提取液防腐问题。

中草药中各类化学成分提取分离方法13/692.渗漉法:是将药材装入渗漉筒中，先用水或醇浸渍数小时，然后从渗漉筒下口使提取液流出，上口不停地加入新溶剂，此方法因为药材与溶剂之间能够一直保持较大浓度差，所以提取效率较高。该法一样适合用于挥发性及受热易破坏分解成份提取。不过有溶剂花费量较大缺点。中草药中各类化学成分提取分离方法14/69热提法1.煎煮法:该方法是我国中医中药最早使用传统提取方法。是将药材用水加热煮沸提取，在提取过程当中大部分成份可被不一样程度提取出来，不过对于挥发性成份及加热易被破坏成份不宜使用。中草药中各类化学成分提取分离方法15/692.回流提取法:是用有机溶剂作为提取溶剂，在回流装置中对药材进行加热回流提取，该方法提取效率较高，但因为长时间加热，所以不适合受热易破坏分解成份。3.连续回流提取法:是回流提取法发展，含有消耗溶剂量更小，提取效率更高优点。惯用索氏提取器或连续回流装置。

中草药中各类化学成分提取分离方法16/69水－是一个强极性溶剂。无机盐、糖类、分子不太大多糖、鞣质、氨基酸、蛋白质、有机酸盐、生物碱盐和极性苷类等都能被水溶出。以水作为提取溶剂缺点是：提出杂质多。冷提法提出杂质少且对热不稳定成份较适宜，提取效率低;而热提法效率高，但对热不稳定成份不宜，尤其不适于挥发性成份和淀粉、粘液质多药材提取。中草药中各类化学成分提取分离方法17/69亲水性有机溶剂－也就是普通所说与水能混溶有机溶剂，如乙醇、甲醇、丙酮等，其中以乙醇最为惯用。含有经济、安全、无毒;对细胞穿透能力强;大多数天然成份都可溶解等优点，常称为万能溶剂。

中草药中各类化学成分提取分离方法18/69二、水蒸汽蒸馏法

适合用于含有挥发性、能随水蒸汽蒸

馏而不被破坏、难溶或不溶于水成份提取,如挥发油、小分子香豆素类、小分子醌类成份。

中草药中各类化学成分提取分离方法19/69三、升华法

固体物质受热不经过熔融,直接汽化,遇冷后又凝固为固体化合物,称为升华。中草药中有一些成份含有升华性质,能够利用升华法直接自中草药中提取出来。如樟脑、咖啡因。中草药中各类化学成分提取分离方法20/69中草药有效成份分离与精制依据物质溶解度差异进行分离依据物质在两相溶剂中配比不一样进行分离依据物质吸附性能差异进行分离依据物质分子大小差异进行分离依据物质离解程度不一样进行分离中草药中各类化学成分提取分离方法21/69一、依据物质溶解度差异进行分离1.结晶及重结晶法:利用温度改变引发溶解度改变使物质得以分离。2.溶剂分离法:a.经过加入另一个溶剂以改变溶剂极性，使一部分物质沉淀析出，从而实现分离。如:水提醇沉法中草药中各类化学成分提取分离方法22/69b.酸性、碱性或两性化合物，经过加入酸或碱来调整溶剂PH值，改变分子存在状态（游离型或离解型)，从而改变溶解度而实现分离。中草药中各类化学成分提取分离方法23/693.沉淀法:酸性或碱性化合物经过加入某种沉淀试剂使之生成水不溶性盐类等沉淀析出而实现分离。如生物碱加入有机酸可生成不溶于水有机酸盐沉淀，酸性化合物可加入钙盐、铅盐、钡盐等生成不溶性沉淀。

中草药中各类化学成分提取分离方法24/69二、依据物质在两相溶剂中分配比不一样进行分离液-液分配基本原理1.分配系数K值:一个溶质在两相溶剂中分配比。K值在一定温度和压力下为一常数。

K=CU/CL中草药中各类化学成分提取分离方法25/692.分离因子β:两种溶质在同一溶剂系统中分配系数比值。β=KA/KB(KA>KB)β≥100，一次萃取就可实现基本分离100≥β≥10，需萃取10~12次β≤2，需萃取100次以上β≌1，无法实现分离中草药中各类化学成分提取分离方法26/693.分配比与PH：溶剂系统PH改变影响酸性、碱性、及两性有机化合物存在状态（游离型或离解型)，从而影响在溶剂系统中分配比。

游离型——极性小溶剂

离解型——极性大溶剂中草药中各类化学成分提取分离方法27/69普通PH<3，酸性物质多呈非离解状态（HA)、碱性物质则呈离解状态（BH+)；PH>12，则酸性物质呈离解状态（A－)、碱性物质以非离解状态（B)存在。

中草药中各类化学成分提取分离方法28/694.液-液萃取与纸色谱纸色谱与液-液萃取分离原理都是分配。Rf值与K值之间有以下关系

Kor/w=1/r(Rf/1-Rf)

中草药中各类化学成分提取分离方法29/69当层析滤纸湿重（W湿）为干重（W干）1.5倍时，r=2设A.B两种（或两组）物质Rf值分别为Rfa及Rfb。β=Rfa(1-Rfb/1-Rfa)（Rfa＞Rfb）当β＞50时，简单萃取即可，β＜50时，则需采取逆流分溶法。

中草药中各类化学成分提取分离方法30/69主要分离方法1.简单液-液萃取法2.逆流分溶法（CCD)3.液滴逆流色谱法（DCCC)4.高速逆流色谱法（HSCCC)5.纸色谱法（PC)6.气-液分配柱色谱法（GLC)7.液-液分配柱色谱法（LLC)中草药中各类化学成分提取分离方法31/69纸色谱法支持剂：纤维素固定相：纤维素上吸附水展开剂：与水不相混溶有机溶剂或水饱

和有机溶剂Rf值：极性大，Rf值小;极性小，Rf值大。应用：适合于亲水性较强物质。

中草药中各类化学成分提取分离方法32/69液-液分配柱色谱法柱色谱：在色谱管中完成化合物之

间分离过程称为柱色谱。柱色谱分：常压柱色谱、加压柱色谱载体（支持剂)：硅胶、硅藻土及纤

维素等按洗脱次序分：正相色谱、反相色谱中草药中各类化学成分提取分离方法33/69正相色谱:

固定相:水、缓冲溶液

流动相:氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱极性有机溶剂

洗脱次序:极性小化合物先出柱，极

性大后出柱。

应用:适合用于水溶性或极性较大化合

物，如生物碱、苷、糖类、有机酸等。

中草药中各类化学成分提取分离方法34/69反相色谱：

固定相：石蜡油，化学键合相（如十八烷基硅胶键合相)

流动相：水、甲醇、乙腈等强极性有机溶剂

洗脱次序：极性大，先出柱；极性小，后出柱。

应用：适合于脂溶性成份，如高级脂肪酸、油脂、游离甾体等中草药中各类化学成分提取分离方法35/69当前液-液分配柱色谱中固定相主要为化学键合相。反相液-液分配柱色谱法是当前应用最为广泛一个柱色谱分离、分析方法。

中草药中各类化学成分提取分离方法36/69三、依据物质吸附性差异进行分离固-液吸附应用最多吸附类型：1.物理吸附（溶液分子与吸附剂表面分子分子间作用力)：硅胶、氧化铝及活性炭为吸附剂吸附色谱。2.化学吸附：如黄酮等酚酸性物质被碱性氧化铝吸附，生物碱被酸性硅胶吸附等。

中草药中各类化学成分提取分离方法37/693.半化学吸附:如聚酰胺与黄酮类、蒽醌类等化合物之间氢键吸附。介于物理吸附与化学吸附之间。

中草药中各类化学成分提取分离方法38/69物理吸附基本规律→相同者易吸附

固液吸附三要素：吸附剂、溶质、溶剂1.极性吸附剂（氧化铝、硅胶)特点：a.对极性强物质吸附能力强b.溶剂极性减弱，则吸附剂对溶质吸附能力增强；反之，则减弱。

中草药中各类化学成分提取分离方法39/69c.溶质即使被硅胶、氧化铝吸附,一旦加入极性较强溶剂时,又可被置换洗脱下来。中草药中各类化学成分提取分离方法40/69ABⅠCHCl3:MeOH(7:3)ⅡCHCl3:MeOH(3:7)中草药中各类化学成分提取分离方法41/692.非极性吸附剂（活性炭)：

对非极性物质亲和能力强，溶剂极性降低，则活性炭对溶质吸附能力也随之降低；反之，则提升。中草药中各类化学成分提取分离方法42/69极性及其强弱判断:极性强弱是支配物理吸附过程主要原因极性就是指分子中电荷不对称程度，并大致上和分子偶极距、极化度及介电常数等概念相对应。中草药中各类化学成分提取分离方法43/691.主要官能团极性由弱到强排序为：—CH2—CH2—＜—CH2=CH2—＜—OCH3＜—COOR＜>C=O（CHO)＜—NH2＜—OH＜—COOH2.化合物极性则由分子中所含官能团种类、数目及排列方式等综合原因所决定。

中草药中各类化学成分提取分离方法44/693.溶剂极性大小则大致上由介电常数决定，惯用溶剂介电常数及其极性由弱到强排序为：

环己烷（1.88)，苯（2.29)，无水乙醚（4.47)，氯仿（5.20)，乙酸乙酯（6.11)，乙醇（26.0)，甲醇（31.2)，水（81.0)中草药中各类化学成分提取分离方法45/69极性不完全等同于亲水性亲水性强，则极性强;极性强，则亲水性并不一定强。

AB亲水性A>B极性B>A中草药中各类化学成分提取分离方法46/69吸附柱色谱用于物质分离:1.选取极性小溶剂装柱和溶解样品或用极性稍大溶剂溶解样品后，以少许吸附剂拌匀挥干，上柱。2.溶剂系统可用TLC进行筛选。以TLC展开时使组分Rf值到达0.2~0.3溶剂系统作为最正确溶剂系统进行洗脱。

中草药中各类化学成分提取分离方法47/693.为防止化学吸附，酸性物质宜用硅胶、碱性物质宜用氧化铝作为吸附剂进行分离。通常在分离酸性（或碱性)物质时，洗脱溶剂中常加入适量醋酸（或氨、吡啶、二乙胺)，以预防拖尾，改进分离效果。

中草药中各类化学成分提取分离方法48/69聚酰胺吸附色谱法：属于氢键吸附（半化学吸附)尤其适合分离酚类、醌类、黄酮类化合物。1.聚酰胺吸附原理：

经过分子中酰胺羰基与酚类、黄酮类化合物酚羟基，或酰胺键上游离胺基与醌类、脂肪酸上羰基形成氢键缔合而产生吸附。

中草药中各类化学成分提取分离方法49/69固定相移动相中草药中各类化学成分提取分离方法50/692.吸附强弱规律（含水溶剂中)a.形成氢键基团数目越多，则吸附能力越强。

中草药中各类化学成分提取分离方法51/69b.成键位置对吸附也有影响。易形成份子内氢键化合物,其吸附性能减弱。

中草药中各类化学成分提取分离方法52/69c.分子中芳香化程度越高,则吸附性能越强。

中草药中各类化学成分提取分离方法53/693.各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强排序为:水→甲醇→丙酮→氢氧化钠水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液中草药中各类化学成分提取分离方法54/694.应用:a.尤其适合于酚类、黄酮类化合物制备和分离b.对生物碱、萜类、甾体、糖类、氨基酸等其它极性与非极性化合物分离也有着广泛应用。c.用于提取物脱鞣质处理。

中草药中各类化学成分提取分离方法55/69大孔吸附树脂法分为极性和非极性

1.原理：吸附和分子筛以苯乙烯为母体，二乙烯苯为交联剂（非极性)中草药中各类化学成分提取分离方法56/692.影响原因:a.普通非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化合物在水中易被极性树脂吸附。b.物质在溶剂中溶解度大，树脂对此物质吸附力就小，反之就大。

中草药中各类化学成分提取分离方法57/69c.分子量小、极性小化合物与非极性大孔吸附树脂吸附作用强;反之，与极性大孔吸附作用强。能与大孔吸附树脂形成氢键化合物易吸附。

中草药中各类化学成分提取分离方法58/693.应用:广泛应用于天然化合物如苷、糖类、生物碱、多糖、黄酮、三萜类化合物分离和富集工作。4.洗脱液选择:最惯用水、乙醇，另外甲醇、丙酮、乙酸乙酯也被应用。

中草药中各类化学成分提取分离方法59/69四、依据物质分子大小差异进行分离惯用方法:

超滤法、超速离心法、透析法、凝胶滤过法等。主要用于水溶性大分子化合物分离和精制，而凝胶滤过法还可用于分离分子量1000以下化合物。

中草药中各类化学成分提取分离方法60/691.凝胶滤过法分离原理：反分子筛

凝胶为在水中可膨胀球形颗粒，

含有三维空间网状结构。大分子在颗粒间隙移动，较早流出;小分子则自由渗透并扩散到凝胶颗粒内部，经过色谱柱时阻力增大，较晚流出。因而，化合物按分子量由大到小次序得到分离。

中草药中各类化学成分提取分离方法61/692.凝胶种类：惯用凝胶主要有两种a.葡聚糖凝胶（sephadexG)：只适合用于水中应用，不一样规格分离不一样分子量范围化合物。b.羟丙基葡聚糖凝胶（sephadexLH-20)该类凝胶不但可在水中用，也可在有机溶剂中或在水与有机溶剂混合溶剂中使用，在由极性和非极性溶剂组成混合溶剂中常起到反相分配色谱作用。应用范围更广泛。

中草药中各类化学成分提取分离方法62/69网孔大小与交联度相关

交联度高，孔隙小，吸水时膨胀就小;反之，交联度小，膨胀幅度大，孔隙大。中草药中各类化学成分提取分离方法63/693.惯用溶剂：a.碱性水溶液（0.1mol/LNH4OH)含盐水溶液（0.5mol/LNaCl)等。b.醇及含水醇，如甲醇、甲醇—水c.其它溶剂：如含水丙酮，甲醇-氯仿

中草药中各类化学成分提取分离方法64/69五、依据物质离解程度不一样进行分离主要包含:离子交换和电泳离子交换树脂法:1.原理:可交换离子与树脂上交换基团进行离子交换，并被吸附，用适当溶剂从柱上洗脱下来，实现物质分离。2.固定相:离子交换树脂3.洗脱液:稀酸或稀碱溶液中草药中各类化学成分提取分离方法65/694.分类：a.阳离子交换树脂

强酸性（—SO3-H+）

弱酸