丹参川芎嗪检验规范

丹参川芎嗪检验规范1范围本规范规定了丹参川芎嗪制剂的检验项目、检验方法、操作规范、结果判定及处置要求，适用于丹参川芎嗪注射液、注射用丹参川芎嗪等制剂的原料入厂检验、中间产品过程控制及成品放行检验，也可供药品监管部门开展监督抽检时参考使用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。《中华人民共和国药典》2025年版四部《药品生产质量管理规范》（2010年修订）《中药注射剂安全性再评价技术要求》《国家药品标准丹参川芎嗪注射液》WS-10001-(HD-1138)-2002-20203检验基础要求3.1环境与设施检验操作应在符合C级及以上洁净级别的实验室中开展，其中无菌检查、微生物限度检查应在B级背景下的A级洁净区进行，细菌内毒素检查应在D级以上洁净环境中设置独立的阳性对照区、供试品区和阴性对照区，各区域压差不低于10Pa，温度控制在18℃~26℃，相对湿度控制在45%~65%。检验所用设备需定期校准：高效液相色谱仪每6个月进行一次性能验证，紫外-可见分光光度计每3个月进行波长准确度、吸光度准确度校准，分析天平每年进行计量检定，微量移液器每3个月进行示值误差校准。3.2试剂与对照品流动相所用甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水（电阻率≥18.2MΩ·cm），其余试剂为分析纯。丹参素钠对照品、川芎嗪对照品需购自中国食品药品检定研究院，按说明书要求储存，使用前需检查有效期，若出现吸湿、变色等异常情况禁止使用。对照品储备液应于-20℃避光储存，有效期不超过3个月，工作液现配现用。3.3人员要求检验人员需具备中药学、药物分析相关专业大专及以上学历，经岗位培训考核合格，掌握高效液相色谱法、紫外分光光度法等检验操作技能，熟悉药品检验偏差处理流程，能够独立判断检验结果的合规性。4性状检验4.1外观观察取供试品10支/瓶，自然光下目视观察：丹参川芎嗪注射液应为浅黄色至棕黄色的澄明液体，不得出现浑浊、沉淀、变色、分层现象，瓶身不得有裂纹、瓶口松动漏液问题。注射用丹参川芎嗪应为浅黄色至棕黄色的疏松块状物或粉末，不得出现吸潮、结块、变色、融化迹象，溶解后应符合注射液性状要求。4.2装量检查注射液采用容量法检查：取供试品5支，将内容物分别倒入经校正的干燥量筒中，室温下静置，读取每支装量，不得少于标示装量的97%，平均装量不得低于标示装量。注射用冻干粉针采用重量法检查：取供试品5瓶，分别称定内容物重量，每瓶装量差异限度为±5%，超出差异限度的不得多于1瓶，且不得有1瓶超出限度1倍。5鉴别检验5.1丹参素薄层鉴别取供试品2ml，加稀盐酸调节pH至2，用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参素钠对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（8:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。5.2川芎嗪紫外鉴别取供试品适量，加水稀释制成每1ml含盐酸川芎嗪约10μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在200nm~400nm波长范围内扫描，应在294nm波长处有最大吸收，在272nm波长处有最小吸收。5.3特征图谱鉴别采用高效液相色谱法建立特征图谱，以丹参素钠和盐酸川芎嗪为参照峰，记录60分钟色谱图，供试品特征图谱中应呈现4个特征峰，与对照提取物特征图谱中相应的特征峰保留时间相对偏差不得超过±5%，各特征峰的相对峰面积应符合规定：峰2（丹参素）相对峰面积不得低于0.6，峰4（川芎嗪）相对峰面积不得低于0.8。6检查项检验6.1pH值检查取供试品，室温下采用pH计直接测定，pH值应为4.0~6.0。测定前需用pH4.0、pH6.86的标准缓冲液校正pH计，校正斜率应在95%~105%之间，每个供试品平行测定2次，结果偏差不得超过0.05。6.2有关物质检查照高效液相色谱法测定，色谱条件采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（15:85）为流动相A，甲醇为流动相B，按下表进行梯度洗脱：|时间（分钟）|流动相A（%）|流动相B（%）||--------------|--------------|--------------||0~10|85|15||10~30|85→50|15→50||30~40|50|50||40~45|50→85|50→15||45~55|85|15|检测波长为280nm，理论板数按丹参素峰计算应不低于3000。取供试品作为供试品溶液，精密量取1ml置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%~25%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液中两个主成分峰面积之和的0.5倍（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中两个主成分峰面积之和的2.0倍（2.0%）。6.3不溶性微粒检查注射液取供试品1支，按《中国药典》2025年版四部通则0903不溶性微粒检查法第一法（光阻法）测定，每1ml中含10μm及10μm以上的微粒不得超过25粒，含25μm及25μm以上的微粒不得超过3粒。注射用丹参川芎嗪按标示量加微粒检查用水溶解后，同法测定，结果符合上述要求。6.4细菌内毒素检查取供试品，按《中国药典》2025年版四部通则1143细菌内毒素检查法进行，每1mg盐酸川芎嗪含内毒素的量应小于0.5EU。实验时应同时做阳性对照和阴性对照，阳性对照管应出现凝胶，阴性对照管应无凝胶形成，否则实验结果无效。6.5无菌检查取供试品，按《中国药典》2025年版四部通则1101无菌检查法薄膜过滤法进行，每支供试品接入相应的培养基中，硫乙醇酸盐流体培养基置30℃~35℃培养14天，胰酪大豆胨液体培养基置20℃~25℃培养14天，培养期间每日观察是否有浑浊或菌苔生长，均应无菌生长。6.6溶血与凝聚检查取家兔新鲜血液20ml，除去纤维蛋白原，加生理盐水制成2%红细胞混悬液。取试管6支，1~3号管分别加入供试品0.3ml、0.3ml、0.3ml，4号管为阴性对照（加生理盐水2.5ml），5号管为阳性对照（加蒸馏水2.5ml），6号管为供试品对照（加供试品0.3ml+生理盐水2.2ml）。各管加入红细胞混悬液2.5ml，摇匀后置37℃水浴中保温3小时，观察结果：阴性对照管无溶血和凝聚现象，阳性对照管全溶血，供试品管上清液澄明无色，红细胞全部下沉，振摇后均匀分散，即为无溶血反应；溶液出现棕红色或红棕色沉淀，振摇后不分散，即为有凝聚反应。供试品应无溶血和凝聚反应发生。7含量测定7.1丹参素含量测定照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.5%冰醋酸（10:90）为流动相；检测波长为280nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于2000。对照品溶液制备：取丹参素钠对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含丹参素钠50μg的溶液，即得（相当于每1ml含丹参素45μg）。供试品溶液制备：精密量取供试品2ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含丹参素以丹参素（C9H10O5）计，应为标示量的90.0%~110.0%。7.2盐酸川芎嗪含量测定照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（45:55）为流动相；检测波长为294nm。理论板数按盐酸川芎嗪峰计算应不低于2000。对照品溶液制备：取盐酸川芎嗪对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含盐酸川芎嗪40μg的溶液，即得。供试品溶液制备：精密量取供试品1ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含盐酸川芎嗪（C8H12N2·HCl）应为标示量的90.0%~110.0%。8检验过程质量控制8.1平行样要求性状、鉴别、检查项每批供试品平行检验2份，含量测定项平行检验3份，平行样结果的相对偏差不得超过2.0%，否则需重新取样检验。8.2偏差处理检验结果出现异常时，应首先排查实验室因素：检查仪器设备状态、试剂有效期、操作过程是否规范，确认无实验室偏差后，重新取加倍数量样品进行复检，复检仍不合格的，判定为不合格品。所有偏差需填写《检验偏差处理记录》，经质量负责人审核后归档。8.3记录管理检验记录应即时填写，不得追记、补记，字迹清晰，数据真实可追溯，修改时需划线签名并注明修改日期。检验记录需经检验人、复核人、质量授权人三级签字后方可出具检验报告，检验记录及报告保存期限不得少于产品有效期后1年，且