乙肝疫苗制备资料

乙肝疫苗的制备乙肝疫苗的概念·乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物

。

疫苗

接种后,可刺激免疫系统产生保护性抗体,这种抗体存在于人的体液之中,乙肝病毒一

旦出现,抗体会立即作用,将其清除,阻止

感染,并不会伤害肝脏,从而使人体具有了

预防乙肝的免疫力,从而达到预防乙肝感染

的目的

。接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染

的最有效方法。

乙肝疫苗的发展史·乙肝疫苗形成于1986年,为了得到乙肝疫苗,研究

人员从研究复试病毒,到酵母,并研究纯化的蛋白

质序列

。并经过了大量的诱导免疫反应。·1991年,疫苗被应用于高危险人群

。主要是一些儿

童,因为儿童的感染率极高。·2005年,美国推行常规的疫苗注射

。给所有未注射

过乙肝疫苗的儿童注射

。治疗性疫苗是指在已感染

病原微生物或已患有某些疾病的机体中,通过诱导

特异性的免疫应答,达到治疗或防止疾病恶化的天

然、人工合成或用基因重组技术表达的产品或制品·目前使用的乙肝疫苗是基因工程

疫苗--重组酵母乙肝疫苗和重组CHO乙肝疫苗,其主要成分是乙肝病毒的表面抗原,即一种乙肝

病毒外衣壳蛋白,并非完整病毒。

这种表面抗原不含有病毒遗传物

质,不具备感染性和致病性,但

保留了免疫原性,即刺激机体产

生保护性抗体的能力

。

乙肝表面

抗原曾经是从乙肝病毒携带着的

血液,经纯化灭活等严格工序制

备而来,即血源性疫苗,该疫苗

由于安全

、来源和成本等原因已

被淘汰(如,有引起血源性疾病的

嫌疑和浪费大量的血·基因工程乙肝疫苗是采用基因工

程技术生产的,即构建含有乙肝

表面抗原基因的重组质粒,然后

转染相应的宿主细胞,如酵母、CHO细胞,生产乙肝表面抗原蛋

白

。利用重组酵母生产的叫重组

酵母乙肝疫苗,利用CHO细胞生

产的叫重组CHO乙肝疫苗,剂量

为每支5微克

。它们都可以用于

预防所有已知亚型的乙肝病毒感,都可以放心选用。乙肝疫苗的制备·基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原（HbsAg)亚单

位疫苗

，

它系采用现代生物技术将乙肝病毒表达表

面抗原的基因进行质粒构建

，

克隆进入啤酒酵母菌

或CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞)中

，

通过培养这

种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表面抗原亚单

位

。发酵后经过细胞破碎和一系列微滤、超滤、硅

胶吸附、洗脱等工序

，

再经过疏水层析

，

可使产品

抗原蛋白纯度达99%以上。

乙肝疫苗的制造工艺·

1.

目的基因的获取·2.工程菌的构建·3.

目的基因的表达·4.蛋白质的分离纯化目的基因的获取·编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取·一般目的基因的获取方法有

:cDNA文库法,

化学合成法

,反转录法·

CHO细胞的特点·①具有准确的转录后修饰功能,表达的糖基化药物蛋白在分子结构

、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子·②具有产物胞外分泌功能,便于下游产物分离纯化

;·③具有重组基因的高效扩增和表达能力

;·④具有贴壁生长特性,且有较高的耐受剪切力和渗透压能力,可以进行悬

浮培养,表达水平较高

;·

⑤CHO细胞属于成纤维细胞

(fibrob2last),很少分泌自身的内源蛋白,利

于外源蛋白的后分离工程菌的选择主要试剂限制性内切酶

、T4DNAligase、质粒DNA提取和柱式胶回收试剂盒乙型肝炎表面抗原检测试剂盒DMEM和透析胎牛血清胰蛋白酶

、氨甲喋呤（MTX)和脂质体LipofectamineTMHBsAg血凝检测试剂盒主要试剂限制性内切酶

、T4DNAligase、质粒DNA提取和柱式胶回收试剂盒乙型肝炎表面抗原检测试剂盒DMEM和透析胎牛血清胰蛋白酶

、氨甲喋呤（MTX)和脂质体LipofectamineTMHBsAg血凝检测试剂盒转入CHO细胞中表达与克隆载体连接,转化编码乙型肝炎表面抗原的基因提质粒与表达载体连接PCR扩增目的基因蛋白质的分离纯化固液分离离心沉淀膜过滤双水相萃取浓缩与初步纯化离子交换层析疏水层析亲和层析高度纯化DNA的去除

热原质的去除

病毒的去除分离纯化的基本要求技术条件温和,保持其生物活性选择性好,达到有效分离纯化的目的

技术间可以直接连接,节省工艺步骤收率高,过程快选择分离纯化方法的依据根据产物表达形式来选择根据分离单元之间的衔接来选择

根据分离纯化工艺的要求来选择分离纯化的流程·疏水柱层析·

阴离子交换层析·凝胶过滤层析1、发酵液的预处理连续高速离心

，

除去细胞残片

，

再超滤浓缩2、疏水柱层析介质:ButylSSepharoseFF加入适量硫酸铵

，

调节电导率与柱层析平衡

液电导率相等按照平衡柱床

、上样吸附

、平衡液洗