药物分析紫外分光光度法教案

药物分析课程药物分析紫外分光光度法原理·仪器·应用·质控汇报时间：2026药物分析·紫外分光光度法课程导览四章教学结构，明确本章学习路径壹原理

根基光吸收定律与定量基础贰仪器

与操作五大部件与规范流程叁三大

应用鉴别、检查、含量测定肆质控

与验证校正检定与方法学要求原理根基吸光度与浓度成正比，是定量分析的基石01理论根基光吸收的核心定律A=ε·b·c定量分析的理论根基朗伯-比尔定律平行单色光通过均匀非散射溶液，吸光度A与浓度c、液层厚度b的乘积成正比ε为摩尔吸光系数特定波长与溶剂条件下的特征常数透光率与吸光度T=透过光强/入射光强；A=−lgT两种比例系数摩尔吸光系数浓度以mol/L计，多用于分子结构研究百分吸光系数浓度以g/100mL计，多用于含量测定吸收强度判据ε>104强吸收103

以上满足比色分析<102弱吸收吸光度加和性多组分互不干扰时，总吸光度等于各组分吸光度之和——溶剂空白扣除与多组分同时测定的依据药物分析·紫外分光光度法04/17光谱基础紫外吸收从哪里来吸收本质分子内电子跃迁：含共轭双键、苯环、羰基等发色基团的分子吸收光子能量，π电子或非键电子从成键轨道跃迁至反键轨道。250～280nm苯环结构最大吸收波长——含苯环药物可被紫外法定量的结构基础谱带而非锐线单次电子跃迁伴随振动与转动能级变化，多个吸收谱线叠加成连续谱带。三个影响因素壹溶剂极性升高

→

吸收峰变宽、波长略移贰溶质电离状态随pH改变

→

吸收形态改变叁取代基与共轭效应引入

→

吸收峰红移测定波长、溶剂与pH必须严格依据品种项下规定，否则吸收峰归属与定量都会失真。药物分析·紫外分光光度法05/17仪器与操作分光测吸光，定律算浓度02紫外-可见分光光度计·仪器结构仪器由五大部件组成光源单色器吸收池检测器信号处理显示系统壹光源可见光区用钨灯或卤钨灯（350～1000nm）；紫外区用氢灯或氘灯（180～360nm），氘灯强度大、稳定性好、寿命长贰单色器狭缝+色散元件+透镜；光栅条痕密度可达

600、1200、2400条/mm叁吸收池紫外区必须用石英池，可见光区可用玻璃池肆检测器硒光电池、光电管、光电倍增管、光电二极管阵列；光电倍增管灵敏度最高，多用于中高档仪器药物分析·紫外分光光度法07/17方法学要点规范操作与关键读数壹溶剂先过关以空气为空白，用1cm石英吸收池测溶剂吸光度：220～240nm≤0.40241～250nm≤0.20251～300nm≤0.10300nm以上≤0.05合格才可排除背景吸收干扰。贰操作按序走1开启电源自检2设定工作波长3润洗装液4参比溶液校正透射比并调零5吸光度模式测定样品石英吸收池用220nm蒸馏水做成套性检验，透射比偏差应小于

0.5%。叁读数守区间0.3～0.7供试品吸光度宜落在信号足够强、避开非线性区，测量误差最小，标准曲线相关系数常接近

0.999。越出区间应稀释或改变光程，不直接采信偏高值。紫外区读数跳动多提示氘灯老化，需及时更换。药物分析·紫外分光光度法08/17三大应用从特征波长到含量计算，方法各有归位03定性鉴别鉴别靠特征波长药物分析·紫外分光光度法·通则040110/17鉴别指纹：特征吸收峰位置

+

相对比值，共同判定真伪。壹布洛芬实例溶剂：0.4%氢氧化钠溶液·浓度：每1mL约含

0.25mg最大吸收265nm与273nm最小吸收245nm与271nm肩峰259nm贰通则0401判定±2nm供试品吸收峰波长须在规定波长

±2nm以内偏离超限

→

综合判断真伪、纯度或仪器波长失准叁其他品种维生素B1203nm、246nm

特征峰，最大吸收

246±2nm苯扎氯铵257nm、262nm、269nm

处最大吸收维生素K1254nm

与

249nm

吸光度比值应为

0.70～0.75，以比值增强专属性紫外分光光度法·应用示例杂质检查用吸光度设限壹氢氯噻嗪·芳香第一胺杂质源于合成中间体与分解产物，含芳伯氨基而主药没有。经重氮化后与二盐酸萘乙二胺偶合，生成玫瑰红色偶氮化合物，在

518nm

处测定，吸收度不得过

0.10。氢氯噻嗪

分子结构贰葡萄糖注射液·5-羟甲基糠醛葡萄糖弱酸性下降解生成5-羟甲基糠醛，可能损害横纹肌及内脏。葡萄糖无紫外吸收，降解产物在

284nm

有吸收，规定吸收度不得大于

0.32，以此控制分解程度。葡萄糖注射液

安瓿药物分析·紫外分光光度法11/17含量测定含量测定有四种方法通则

0401

规定四种含量测定方法，课堂聚焦前两种。对照品比较法同条件配制供试品与对照品，溶剂一致对照品浓度控制在供试品规定量的

100%±10%计算公式cX=(AX/AR)×cR吸收系数法不依赖对照品，用已知百分吸收系数计算品种吸收系数通常应大于

100对仪器波长与吸光度准确度要求更高，须校正检定示例对乙酰氨基酚百分吸收系数为

715，257nm处测吸光度即可计算标示量百分比。药物分析·紫外分光光度法12/17吸收系数法·实例应用对乙酰氨基酚含量测定实例吸收依据苯环与酰胺共轭结构在

257nm

提供稳定紫外吸收。测定路径取本品约

40mg，精密称定，用

0.4%

氢氧化钠溶液溶解并稀释至约

8μg/mL，于

257nm

处测定吸光度，按吸收系数

715

计算含量。方法学练习稳定性配制后

0.5h、1h、1.5h、2h

连续测定精密度同一样品重复

6次，或平行制备

6份线性6.4～9.6μg/mL

系列浓度，A=a+bC，要求r≥0.999回收率高中低

三个浓度水平测定并计算药物分析·紫外分光光度法13/17质控与验证数据可信，源于校正与验证04质量控制仪器要校正也要检定紫外法数据可信的前提是仪器处于受控状态，三项校检缺一不可。壹波长校正贰吸光度检定叁杂散光检查三项配合，才能保证波长定位与吸光度量值准确。药物分析·紫外分光光度法15/17汞灯谱线：237.83、253.65、313.16、365.02nm氘灯谱线：486.02nm、656.10nm钬玻璃吸收峰：279.4、287.5、333.7、360.9、418.5nm，不同来源略有差别用重铬酸钾硫酸溶液：120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，以0.005mol/L硫酸溶解并稀释至1000mL规定波长处吸收系数：235nm124.5257nm144.0313nm48.62350nm106.6相对偏差允许

±1%

以内1.00%碘化钠溶液：220nm透光率应

<0.8%5.00%亚硝酸钠溶液：380nm透光率应

<0.8%方法学闭环方法学验证保证结果可靠验证三指标壹线性与范围吸光度与浓度线性良好，相关系数通常不低于

0.999贰精密度重复测定，考察仪器与方法的重复性叁回收率高中低三个浓度水平加样回收，评判准确度应用示例奥硝唑在

319nm

测吸光度后计算标示量百分比，落在

100%

附近方为合格。干扰与防控青霉素类抗生素·光降解在

254nm

照射

30分钟后，最大吸收峰下降超过

15%，光降解产物在200～230nm形成新吸收带。对乙酰氨基酚·氧化产物溶液在

37℃

存放

48小时后生成氧化产物，于

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