2025年病理科病理技术员实验操作考核试题及答案解析

2025年病理科病理技术员实验操作考核试题及答案解析一、单项选择题（共20题，每题1.5分，总计30分，每题只有1个正确答案）1.按照2024版国家病理质控中心（PQCC）常规组织处理技术规范，手术切除大标本的首次固定操作中，10%中性缓冲福尔马林固定液的用量与标本体积的最低比例、标本切开固定的最大厚度要求分别为（）A.5:1，0.5cmB.10:1，1.0cmC.4:1，2.0cmD.20:1，0.3cm2.术中快速冷冻病理检查时，按照操作规范，常规送检的乳腺、甲状腺等不含大量脂肪的实性组织，冷冻切片机冷台温度、切片厚度的质控合格范围为（）A.-15～-18℃，4～6μmB.-20～-22℃，8～10μmC.-25～-30℃，5～8μmD.-35～-40℃，10～15μm3.常规HE染色操作中，苏木素染色后使用1%盐酸酒精分化的质控标准，以下描述正确的是（）A.分化时间固定为30秒，无需镜下观察B.分化至肉眼见组织切片呈淡红色、细胞核呈浅灰蓝色即可终止C.分化后直接入伊红染色，无需返蓝D.分化时间需根据苏木素使用时长、室温灵活调整，镜下控制至细胞核清晰、核浆分界清楚为标准4.采用柠檬酸缓冲液（pH6.0）进行高压热修复的免疫组化操作中，以下操作参数符合2024版PQCC免疫组化质控要求的是（）A.缓冲液没过切片最高点即可，加热至喷气后开始计时2分钟，自然冷却至室温B.缓冲液需完全浸没切片组织位点，加热至安全阀稳定喷气后计时2.5分钟，室温自然冷却或流水缓慢冲淋冷却20分钟以上C.修复时间越长抗原暴露越充分，喷气后计时10分钟可提高阳性检出率D.修复完成后可立即将切片置入PBS缓冲液，无需冷却5.开展HER2基因FISH检测的石蜡切片操作中，按照2025版《乳腺癌HER2检测指南》要求，切片的厚度、烤片温度和时长的合格参数为（）A.2～3μm，60℃烤片2小时B.4～5μm，56℃烤片12～16小时（过夜）C.10μm，70℃烤片30分钟D.1～2μm，65℃烤片1小时6.按照2024版《病理科生物安全操作规范》，处理疑似结核分枝杆菌感染的标本时，个人防护和操作区域要求正确的是（）A.在常规生物安全二级（BSL-2）实验室的Ⅱ级A2型生物安全柜内操作，佩戴N95口罩、双层手套、护目镜B.在开放实验台上操作，佩戴一次性医用外科口罩即可C.标本固定24小时后可在常规石蜡切片机上切片，无需额外防护D.操作产生的废弃物按常规医疗废物处理即可7.网状纤维染色（Gomori银染法）操作中，银氨液浸染经甲醛还原后的后续显色步骤质控要求是（）A.直接脱水后用中性树胶封片B.经氯化金调色、硫代硫酸钠固定去除残留银离子后，再行核固红复染C.浸染后直接入伊红复染D.银染后用盐酸酒精分化即可8.术中冷冻切片完成切片贴片后，需立即置入固定液固定，以下固定液选择和固定时长符合质控要求的是（）A.40%甲醛原液固定10分钟B.95%乙醇固定1～2分钟C.10%中性缓冲福尔马林固定30～60秒D.生理盐水固定5分钟9.常规石蜡切片的质量评价中，按照PQCC室间质评要求，合格切片的平整度、刀痕、皱褶的判定标准是（）A.切片无明显皱褶、无横贯整个组织面的刀痕，裱片后组织平整无气泡B.只要能看清细胞结构，刀痕和皱褶不影响判读即可C.切片允许存在少量气泡，封片后树胶不溢出即可D.切片厚度不均区域不超过组织面的1/2即合格10.开展EGFR基因突变ARMS-PCR检测的石蜡组织核酸提取操作中，按照2025版《肺癌EGFR基因突变检测指南》要求，用于检测的样本中肿瘤细胞占比最低需达到（）A.10%B.20%C.30%D.5%11.全自动密闭式组织脱水机运行过程中，按照质控要求，最后一级无水乙醇试剂的浓度低于多少时必须及时更换，避免脱水不充分（）A.98%B.95%C.90%D.85%12.宫颈液基细胞学（TCT）薄层制片操作中，按照2024版宫颈癌筛查病理质控规范，合格制片的有效细胞量、薄层直径的范围为（）A.保存完好的鳞状上皮细胞量≥5000个，薄层直径13mm，细胞分布均匀无重叠B.细胞量≥1000个，薄层直径20mmC.细胞量≥10000个，薄层直径5mmD.细胞量无明确要求，只要能看到细胞结构即可13.免疫组化染色操作中，关于阳性对照和阴性对照的设置，以下描述正确的是（）A.只要试剂在有效期内，无需每次染色都设置对照B.每批次染色需设置已知阳性表达的组织作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照C.阳性对照可随机选择任意组织，不需要和待检测组织类型一致D.阴性对照出现染色不影响最终结果判读14.抗酸杆菌染色（Ziehl-Neelsen法）操作中，正确的染色结果判定是（）A.抗酸杆菌呈蓝色，背景呈红色B.抗酸杆菌呈红色，背景呈蓝色C.抗酸杆菌呈黑色，背景呈红色D.抗酸杆菌呈绿色，背景呈黄色15.常规HE染色数字切片扫描操作中，按照2024版《数字化病理诊断质控规范》，用于常规临床诊断的全视野数字切片扫描分辨率最低要求为（）A.10倍物镜扫描，分辨率1μm/pixelB.20倍物镜扫描，分辨率0.5μm/pixelC.40倍物镜扫描，分辨率0.25μm/pixelD.4倍物镜扫描，分辨率2μm/pixel16.病理科实验操作产生的废弃二甲苯、中性树胶、DAB显色液等化学性废弃物，处理方式正确的是（）A.直接倒入实验室下水道B.分类收集到专用防渗带盖废液桶，标注废弃物类型、产生时间，交由有资质的危废处理机构处置C.和感染性废弃物一起高压处理后丢弃D.敞口放置在实验室内待其自然挥发17.按照《病理科建设与管理指南（2022版）》要求，常规石蜡标本蜡块、病理切片的保存期限为（）A.蜡块保存15年，切片保存10年B.蜡块和切片均需永久保存C.住院患者标本蜡块、切片自报告发出之日起保存30年，门诊患者保存15年D.报告发出后保存1年即可丢弃18.免疫组化DAB显色操作的质控要求，以下描述正确的是（）A.DAB显色液提前1天配制好，4℃保存备用B.显色时需在显微镜下实时观察显色程度，待阳性部位出现清晰棕黄色染色、背景无明显着色时立即终止显色C.显色时间固定为10分钟，无需镜下观察D.DAB显色液无需避光，配制后可反复使用19.骨组织及钙化标本脱钙操作中，以下操作符合质控要求的是（）A.为加快脱钙速度，将脱钙液加热至50℃处理标本B.采用10%EDTA脱钙时，每日更换脱钙液，采用针刺法或X线摄片法判断脱钙终点，脱钙完成后充分水洗再进入脱水流程C.脱钙时间越长越好，确保组织完全软化D.脱钙完成后可直接放入脱水机脱水，无需水洗20.病理科切片、取材操作过程中，为减少气溶胶暴露风险，以下操作错误的是（）A.切片机使用后及时清理切片碎屑，采用75%酒精擦拭消毒，操作时佩戴口罩B.取材时使用高频电刀操作，无需额外排风装置C.冷冻切片机定期进行紫外线消毒，清理冷冻机内碎屑时需待气溶胶沉降5分钟后再操作D.生物安全柜操作时避免将玻璃挡板抬至安全高度以上，操作后开紫外线消毒30分钟二、多项选择题（共10题，每题2分，总计20分，每题有2个及以上正确答案，多选、少选、错选均不得分）1.病理大标本取材操作中，以下操作符合质控规范要求的有（）A.取材前双人核对患者姓名、病理号、标本类型，确认标本与申请单信息一致B.使用的取材刀、镊子每取材完1例标本后及时擦拭干净，避免交叉污染C.肿瘤标本需测量大小、描述大体形态，切取肿瘤全层、肿瘤与正常组织交界、手术切缘及送检淋巴结，组织块厚度不超过3mm，平面大小不超过22mm×22mmD.取好的组织块立即放入标注清楚病理号的脱水盒内，加盖后放入固定液，避免组织干涸E.取材剩余标本固定后保存2周即可丢弃2.常规HE染色过程中，可能导致细胞核染色过浅的原因有（）A.苏木素染液氧化过度、染色能力下降B.盐酸酒精分化时间过长C.标本固定不及时，组织自溶导致核结构破坏D.返蓝步骤不充分E.伊红染色时间过长3.免疫组化染色出现非特异性背景染色的常见原因有（）A.抗体稀释比例过低、孵育温度过高B.抗原修复过程中缓冲液未没过组织，出现干片C.3%过氧化氢内源性过氧化物酶阻断时间不足D.正常山羊血清封闭时间不足E.PBS洗涤不充分，残留未结合的一抗、二抗4.术中冷冻切片操作中，可能导致切片出现大量冰晶空洞的原因有（）A.标本送检后未及时冷冻，室温放置时间过长B.冷冻速度过慢，组织内水分缓慢冻结形成大冰晶C.冷冻头温度设置过高，组织未完全冻实即开始切片，出现反复冻融D.标本表面残留过多生理盐水，未用纱布吸干即行冷冻E.切片厚度设置过薄5.分子病理实验室开展核酸扩增检测时，为防止扩增产物污染，需严格独立设置的功能区域有（）A.试剂准备区B.标本制备区C.扩增区D.产物分析区E.医护办公区6.以下关于病理科生物安全操作的描述，正确的有（）A.处理新鲜标本时必须佩戴双层手套、防渗隔离衣，若手部有皮肤破损需佩戴加厚丁腈手套，避免直接接触标本B.取材台、切片机每日工作结束后采用1000mg/L有效氯的含氯消毒剂擦拭消毒C.若发生标本泄漏，需立即用吸水纸覆盖污染区域，喷洒1000mg/L含氯消毒剂作用30分钟后再清理D.废弃的新鲜标本组织、一次性取材耗材需经121℃高压灭菌30分钟后再按感染性医疗废物处置E.实验操作时可以佩戴手套接听电话、触碰实验室公共区域物品7.特殊染色操作中，以下染色结果判定正确的有（）A.Masson三色染色：胶原纤维呈蓝色，肌纤维呈红色，细胞核呈蓝黑色B.过碘酸-雪夫（PAS）染色：糖原、真菌细胞壁呈紫红色，细胞核呈浅蓝色C.弹力纤维染色（Verhoeff法）：弹力纤维呈蓝黑色，胶原纤维呈红色D.含铁血黄素染色（普鲁士蓝法）：含铁血黄素颗粒呈蓝色，细胞核呈核固红染色的红色E.脂肪染色（油红O法）：脂肪呈蓝色，细胞核呈红色8.全自动免疫组化染色机使用过程中，需定期开展的质控措施有（）A.每日开机后检查试剂余量、管路通畅情况，排查漏液风险B.每周运行管路冲洗程序，避免试剂残留堵塞加样管路C.每批次染色同步放置阳性对照和阴性对照片，验证染色可靠性D.每季度校准加样针加样精度，避免试剂加样量偏差导致染色失败E.只要仪器正常运行，无需额外开展质控9.石蜡切片裱片操作中，符合质控要求的操作有（）A.展片水浴锅温度设置为45～48℃，每日更换纯水，保持水面清洁无残留组织碎屑B.将连续切片带平整铺展于水面，待皱褶完全展开、无褶皱后再捞片C.捞片时将组织位置调整至载玻片磨砂端下方1/3处，避免组织偏位、贴边D.裱片完成后将切片垂直放置沥干表面水分，再放入60℃烤片箱烤片30分钟E.水浴锅的水可每周更换一次，无需每日更换10.病理科质量管理体系要求中，需留存备查的技术操作记录有（）A.标本接收、固定、取材、脱水、包埋、切片、染色全流程的质控记录B.试剂、耗材的出入库记录、开封使用时间、失效时间记录C.仪器设备的日常维护、校准、故障维修记录D.室间质评、室内质控的结果及整改记录E.化学性、感染性废弃物的处置交接记录三、判断题（共10题，每题1分，总计10分，正确填“√”，错误填“×”）1.石蜡组织脱水时，高浓度酒精停留时间越长，脱水越充分，切片质量越好。（）2.免疫组化染色时，一抗4℃孵育过夜的染色效果一定优于37℃孵育1小时。（）3.冷冻切片完成后，冷冻机内的组织碎屑可直接用毛刷刷除，无需消毒处理。（）4.骨组织脱钙时，可采用浓盐酸快速脱钙以缩短标本处理时间，且不影响后续免疫组化、分子检测结果。（）5.细胞学涂片固定时，需在涂片未完全干燥时立即放入95%乙醇固定，避免细胞退变、核结构破坏。（）6.组织包埋操作时，必须将组织块的目标切面朝下，平整放置于包埋模具底部，保证切片时能切到最大病变组织面。（）7.FISH检测操作中，杂交后的切片可以在自然光下放置，无需避光。（）8.病理科使用的10%中性缓冲福尔马林固定液pH值需保持在7.2～7.4，需每周检测pH值，避免pH异常影响固定效果。（）9.封片时中性树胶的量越多越好，可以完全避免切片出现气泡。（）10.开展高致病性病原微生物相关的尸检标本操作时，需在BSL-3级实验室内进行，操作人员采取三级生物安全防护。（）四、案例操作分析题（共2题，每题20分，总计40分）1.某技术员在进行乳腺癌标本的ER、PR、HER2免疫组化染色时，连续3批次染色均出现整张切片背景弥漫黄染、细胞核染色浅、阳性对照片染色弱的问题，请分析该操作过程中可能存在的问题，并给出对应的整改措施。2.某医院病理科开展石蜡组织EGFR基因突变ARMS-PCR检测时，连续5例样本均出现内参基因CT值过高（>35）、无有效扩增曲线的情况，已知检测试剂盒在有效期内、PCR扩增仪运行正常、试剂配制过程无加样错误，请分析样本前处理及核酸提取操作过程中可能的诱因，并写出石蜡组织核酸提取环节的标准操作质控要点。参考答案及解析一、单项选择题答案及解析1.答案：B。解析：2024版PQCC《常规石蜡组织处理全流程质控规范》明确，手术切除标本离体后30min内必须完成初始固定，10%中性缓冲福尔马林（pH7.2-7.4）固定液用量不低于标本体积的10倍，实性标本需做书页状切开，切开后组织块厚度不超过1.0cm，空腔脏器需剪开、展平后固定于平板上，避免组织卷曲导致固定不透。2.答案：C。解析：术中冷冻切片的温度需根据组织类型调整，含脂肪较少的实性组织（甲状腺、乳腺、肾皮质等）冷台温度设置为-25～-30℃，切片厚度5～8μm为合格；含大量脂肪的组织需将温度降至-35～-40℃，避免切片碎裂；脑组织需设置为-18～-22℃，减少冰晶形成。3.答案：D。解析：HE染色分化步骤无固定时长，需结合苏木素氧化成熟程度、染液使用次数、室温高低调整操作时长，通常为数秒至数十秒；分化后需经流水冲洗、温水或弱碱性溶液返蓝，镜下观察见细胞核呈清晰蓝色、核膜及染色质结构清楚、胞浆无苏木素共染为合格。4.答案：B。解析：高压热抗原修复需确保缓冲液完全浸没所有切片上的组织位点，避免干片导致的非特异染色；使用pH6.0柠檬酸缓冲液时，加热至安全阀稳定喷气后计时2～3分钟，停止加热后需自然冷却或缓慢流水冲洗锅盖降温，冷却时长不低于20分钟，待缓冲液温度降至60℃以下再取出切片，避免骤冷导致组织脱片、抗原位点破坏。5.答案：B。解析：FISH检测对切片厚度要求严格，4～5μm厚度可避免<3μm导致的细胞核截断、信号计数偏差，也可避免>6μm导致的核重叠、信号遮挡；56℃烤片12～16小时（过夜）可在保证组织牢固粘附的同时减少核酸降解，若采用60℃烤片需控制时长在1～2小时，温度过高、时长过长会导致DNA断裂、探针结合效率下降。6.答案：A。解析：结核分枝杆菌属于二类病原微生物，疑似感染的标本从接收、固定、取材到切片处理全流程需在BSL-2级实验区域的Ⅱ级A2型生物安全柜中进行，操作人员需佩戴N95及以上级别防护口罩、双层乳胶手套、护目镜、防渗隔离衣；操作产生的废弃物需经121℃高压灭菌30分钟后再按医疗废物流程处置。7.答案：B。解析：Gomori网状纤维染色标准流程为切片脱蜡至水→高锰酸钾氧化→草酸漂白→铁明矾媒染→银氨液浸染→甲醛还原→氯化金调色→硫代硫酸钠固定去除残留银离子→核固红复染→脱水透明封片；省略氯化金调色、硫代硫酸钠步骤会导致银颗粒沉淀、背景发黑，切片长期保存易褪色。8.答案：C。解析：冷冻切片贴片后需立即固定，避免组织自溶、细胞肿胀影响诊断，采用10%中性缓冲福尔马林固定30～60秒可良好保存细胞核及胞浆结构；高浓度乙醇固定易导致组织收缩、核染色质浓集，40%甲醛原液浓度过高会导致组织表面固定过硬，生理盐水无固定作用。9.答案：A。解析：2024版PQCC常规石蜡切片质评标准明确，合格切片需满足厚度3～5μm、均匀一致，组织面无横贯性刀痕，皱褶面积不超过组织总面积的5%，裱片位置居中、平整无气泡，封片树胶无溢出、无气泡，核浆染色对比清晰。10.答案：A。解析：采用ARMS-PCR法进行EGFR基因突变检测时，需先在HE染色切片上标记肿瘤细胞区域，手工显微切割富集肿瘤细胞，要求核酸提取样本中肿瘤细胞占比不低于10%；常规NGS平台要求肿瘤细胞占比不低于20%，占比不足会因野生型DNA干扰导致假阴性。11.答案：B。解析：脱水试剂需定期监测浓度，最后一级无水乙醇作为脱水终末环节，浓度需保持在95%以上，浓度低于95%会导致组织脱水不充分，后续透明、浸蜡不良，切片出现发白、皱褶、核浆染色模糊等问题。12.答案：A。解析：2024版宫颈癌筛查病理质控规范要求，TCT合格制片需满足保存完好的鳞状上皮细胞量不少于5000个，薄层区域直径13mm左右，细胞均匀分布、无重叠、无大量血液/黏液遮挡，细胞量不足5000个需判定为不满意标本，建议重新取材。13.答案：B。解析：每批次免疫组化染色必须同步设置阳性对照和阴性对照，阳性对照需选择与待检测靶标表达定位一致、表达强度中等的同类型组织；阴性对照采用PBS代替一抗孵育，用于排除非特异染色；若对照结果异常，该批次结果不可靠，需重新实验。14.答案：B。解析：抗酸杆菌细胞壁含大量分枝菌酸，可与石炭酸复红牢固结合，经盐酸酒精分化不脱色，碱性美蓝复染后抗酸杆菌呈红色，背景组织及非抗酸菌呈蓝色。15.答案：C。解析：用于常规临床诊断的全视野数字切片需采用40倍物镜扫描，空间分辨率不低于0.25μm/pixel，才能满足细胞核形态、染色质细节的观察需求；20倍物镜扫描仅可用于切片质控、教学及数据统计，不能用于常规诊断。16.答案：B。解析：二甲苯、中性树胶、DAB等属于有毒有害化学性废弃物，需分类收集于带盖防渗专用废液桶，明确标识废弃物类别、产生日期、责任人，定期交由具备危化品处置资质的专业机构统一处理，严禁直接倒入下水道或随意丢弃。17.答案：C。解析：2022版《病理科建设与管理指南》明确，石蜡标本、组织切片属于重要医疗档案，住院患者的蜡块、切片需自报告发出之日起保存30年，门诊患者标本保存15年，细胞学涂片保存15年。18.答案：B。解析：DAB显色液需现用现配，配制后避光放置，30分钟内使用完毕，不可反复使用；显色时需在光镜下实时观察，待阳性对照出现清晰棕黄色染色、背景无明显着色时立即终止显色，显色时间通常为1～5分钟。19.答案：B。解析：骨组织脱钙需在室温下操作，高温会破坏组织抗原和核酸；脱钙终点需通过针刺法或X线摄片判定，避免脱钙不足或过度；脱钙完成后需流水冲洗30分钟以上，去除残留脱钙液再进入脱水流程。20.答案：B。解析：取材时使用高频电刀会产生大量含组织碎屑、病原微生物的气溶胶，需在配备局部负压排风装置的取材台上操作，操作人员需佩戴N95口罩、护目镜，避免气溶胶吸入。二、多项选择题答案及解析1.答案：ABCD。解析：取材后剩余标本需在10%中性福尔马林固定状态下保存至少4周，待病理报告出具且临床无异议后才可按医疗废物处置，疑难病例、科研相关标本需延长保存期限，E选项错误。2.答案：ABCD。解析：伊红染色时间过长会导致胞浆染色过深，不会引起核染色过浅，E选项错误；其余选项均为核染色过浅的常见诱因。3.答案：ABCDE。解析：抗体浓度过高、孵育温度过高、组织干片、内源性酶阻断不足、封闭不充分、洗涤不彻底均会导致非特异性背景染色。4.答案：ABCD。解析：冰晶是组织冷冻过程中形成的，与切片厚度设置无关，缓慢冷冻、组织含水过多、反复冻融均会导致大冰晶形成，破坏细胞结构，E选项错误。5.答案：ABCD。解析：分子PCR实验室必须设置独立的试剂准备、标本制备、扩增、产物分析四个区域，各区域物品专用、单向物流，避免扩增产物交叉污染，办公区不属于实验核心区域，E选项错误。6.答案：ABCD。解析：佩戴实验手套时严禁触碰公共区域物品、接听电话，避免污染公共区域造成交叉暴露，E选项错误。7.答案：ABCD。解析：油红O染色中脂肪呈橙红色，细胞核呈蓝色，E选项错误。8.答案：ABCD。解析：自动化染色设备必须定期开展性能验证和日常质控，避免设备故障导致批量染色失败，E选项错误。9.答案：ABCD。解析：展片水浴锅的纯水需每日更换，避免水中滋生细菌、残留组织碎屑导致切片污染，E选项错误。10.答案：ABCDE。解析：病理科全流程操作记录、试剂耗材记录、设备维护记录、质控记录、废弃物处置记录均需按质量管理体系要求留存，保存期限不少于15年。三、判断题答案及解析1.答案：×。解析：高浓度酒精停留时间过长会导致组织过度收缩、变脆，切片时容易碎裂，需根据组织类型严格控制各试剂环节处理时间。2.答案：×。解析：抗体孵育时间和温度需根据抗体效价、靶标表达情况通过预实验确定，并非孵育时间越长越好，孵育时间过长会导致非特异背景染色升高。3.答案：×。解析：冷冻机内的组织碎屑可能含有病原微生物，清理时需待机器温度回升后，采用含氯消毒剂擦拭消毒，定期紫外线消毒，避免交叉污染。4.答案：×。解析：浓盐酸脱钙速度快，但会导致组织蛋白变性、抗原和核酸严重破坏，仅适用于不需要做免疫组化和分子检测的紧急标本，常规标本采用10%EDTA或甲酸脱钙液减少组织损伤。5.答案：√。解析：细胞学涂片若完全干燥后再固定，会导致细胞肿胀、核染色质结构模糊，需在玻片表面尚有少量残留moisture时立即固定，保证细胞形态清晰。6.答案：√。解析：包埋方向直接影响切片质量，若组织切面放置不当，会导致切片无法显示病变层次、漏诊微小病灶。7.答案：×。解析：FISH的荧光探针遇光会发生淬灭，杂交后及封片后的切片需全程避光操作，4℃避光保存，避免信号衰减。8.答案：√。解析：中性福尔马林pH值异常会导致核染色不佳、抗原位点破坏，需每周检测pH值，及时更换新配制的固定液。9.答案：×。解析：封片时树胶量需适中，量过多会导致树胶溢出载玻片，污染切片和显微镜镜头，量过少则容易出现气泡，树胶量以盖玻片覆盖后刚好铺满组织区域、无外溢为宜。10.答案：√。解析：按照病原微生物生物安全管理要求，高致病性病原微生物的标本操作需符合相应级别的防护要求，避免实验室获得性感染。四、案例操作分析题评分要点及解析1.（20分）可能存在的操作问题共10分，每点2分：（1）抗原修复环节：