HIV检测技术课件

艾滋病检测技术

1检测的重要性任何错误的诊断，包括假阳性或假阴性，都会对被检者甚至对家庭和社会都产生十分重要的影响艾滋病诊断的一项重要指标，也是控制HIV传播和控制艾滋病流行的重要手段2检测的目的

诊断为确定个体HIV感染状况，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。监测为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，检测的人群包括各类高危人群和一般人群血液筛查为防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。临床治疗和预后的判断疗效观察和耐药性监测3HIV感染的实验室检测常用HIV病原学检测方法:

病毒分离抗原检测核酸检测（HIV核酸定性检测、HIV-RNA定量测定）常用HIV抗体检测方法（均未能检测N型）

筛查实验方法

ELISA，胶体金（硒），PA法，斑点EIA

，唾液、尿液检测卡，化学发光免疫分析

确认实验方法免疫印迹法，条带免疫法，放免法,间接免疫荧光试验其他CD4+/CD8+Tcell计数等4病毒感染后病毒RNA和血清标记水平1020304050607080900病毒RNA,

抗原或抗体水平HIV-1RNAAbtoHIV-1p24Ag5HIV抗体检测方法

酶联免疫吸附法（ELISA）最早出现、发展最快、至今仍普遍使用

很高的灵敏度和特异性

适合对大量样品的检测

可以进行很方便的质控工作，因此是目前临床最常用的筛查检测方法6酶联免疫吸附试验（ELISA）目前主要使用第三代抗HIV抗体1/2试剂（即双抗原夹心法）第四代ELISA试剂可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比，检出时间提前了4~9d。7HIVELISA试剂的发展过程8第四代ELISA试剂

优点：缩短了窗口期缺点：同时把抗原和抗体包被在反应板上，存在互相干扰的可能，检测的敏感性和特异性可能都会受到影响。第四代试剂检测p24抗原的敏感度(20～>100pg/m1)，单独检测p24抗原试剂的敏感度(3.5～10pg/m1)。9HIV感染窗口期<infectivity

=>1st-2nd

代3rd

代=>Detectionlimit<=窗口期HIV抗原IgM

抗体IgG

抗体4rd代10包被了HIV抗原的检测板患者的抗体酶显色剂+-酶联免疫吸附试验原理（第三代双抗原夹心法）11solidphasehumansampleconjugateYY第一代第二代HIVELISA试剂比较Y第三代YYYYYYY第四代YYYYYY12酶联免疫吸附试验（ELISA）

BED-ELISA法新近感染检测,应用于流行病学中HIV-1新发感染率监测感染早期特异性HIV-IgG

所占比例较低，随时间其比例逐渐增大通过测验HIV-IgG的比例的多少从而确定是否新近感染13明胶颗粒凝集试验（PA）

PA是一种简便的HIV血清抗体免疫学检测方法。先将样品稀释，然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒，混匀后保温（一般为室温）。由于操作简便，无需特殊仪器设备，很适合对少量标本的检测。当血清中有HIV抗体存在时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。14PA法检测原理将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。

1516SFDHIV1/2PA的结果判读17SFDHIV1/2PA的结果判读对照粒子的反应图象为纽扣状凝集，致敏粒子的反应图象为环状凝集，则判为阳性。无论对照粒子呈何种图象，只要致敏粒子的反应图象显示为纽扣状凝集时即判为阴性。若对照因子反应图象为纽扣状凝集，致敏因子反应难以确定则判定为可疑。

18SFDHIV1/2PA的结果判读对于对照粒子和致敏粒子均显示可疑或阳性以上的样品，要在完成吸收实验的基础上进行在实验，或用其他试剂检测；结果为阳性或不确定样本，应用该试剂和其他试剂重复检测，如果仍为阳性需用蛋白印迹法确诊试验。

但由于其灵敏度和特异度不及ELISA，故不宜用于献血员和大规模常规检测。19免疫胶体金（或胶体硒）

快速试验

试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便，适用于应急检测、门诊急诊个体检测。一般可在10

30min内判读结果。最大缺点是价格高，敏感度和特异度低于ELISA。20免疫胶体金（或胶体硒）快速试验

基本原理（层吸法）其基本原理是在硝酸纤维素膜上预置胶体金（或胶体硒）标记的基因重组HIV-1/2抗原，同时分别在其下方的检测区包被基因重组HIV-1/2抗原，对照区包被兔抗HIV单抗。样品加在样品垫，先与胶体金（或胶体硒）标记的HIV-1/2抗原结合形成复合物。由于层析作用复合物沿硝酸纤维素膜移动，到达检测区时则与包被于其上的HIV-1/2抗原形成双抗原夹心免疫复合物，显色出现肉眼可见的红色条带；未与HIV抗体结合的游离胶体金（或胶体硒）标记的HIV-1/2抗原则继续移动，在对照区与兔的抗HIV单抗结合，出现另一条红色条带作为质控。出现两条阳性带则表示样品中有抗HIV抗体存在，判为阳性；若为阴性样品，则检测区不出现红色条带，仅在对照区形成一条红线2122免疫胶体金（或胶体硒）快速试验

结果判断反应区和质控区均出现红色条带为阳性，

质控区有条带反应区无条带为阴性，

反应区和质控区均无条带则实验无效。

23金标法（胶体硒法）结果判定24斑点EIA或称斑点ELISA（dot-EIA）以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，若待测血清中存在HIV抗体即可与固相抗原结合，然后该复合物可与酶标记的抗人免疫球蛋白结合，再加入底物时在膜上就可以出现肉眼可见的着色斑点。通常在膜下有一塑料衬底，还有一个吸收垫以吸收样品和试剂。此种试验一般需要加入洗液、底物等液体，完成操作需要数个步骤，反应时间在10min以内，价格也高于免疫层析试剂。25唾液、尿液检测卡HIV感染者的尿液、唾液、精液及泪液中均含有HIV抗体，其HIV抗体主要成分为IgG。26唾液检测卡原理艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜基质上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体。该方法主要检测唾液中的HIVIgA与IgG抗体，敏感性及特异性与ELISA相近，避免静脉穿刺。但标本预处理时间长且售价昂贵。27尿液检测卡原理尿液中一般不存在HIV病毒、采集时不会引起皮肤损伤，所以尿液HIV-1抗体检查是一种相对安全而便捷的检测方法。尿液检测已成为艾滋病（AIDS）检测的一种全新手段，并得到世界艾滋病预防中心的大力推荐。目前以尿液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法（WB）试剂已经面世，并已经批准使用。国内戴建平等人检测203名吸毒人员，结果血液HIV-1抗体阳性127人，尿液HIV-1抗体阳性125人，尿液检测阳性敏感度为98.4%，特异度为100%，一致性为99.0%，说明尿液HIV抗体检测结果与血液检测结果有较好的一致性。28化学发光免疫分析（CLIA）化学发光免疫分析是一种敏感、特异、可定量、无污染的检测技术，是对传统酶免疫和放射免疫检测技术的提升。通过酶试剂进行的对照实验表明，艾滋病化学发光诊断试剂盒具有更高的灵敏度，可以大大缩短窗口期，能够最大可能地避免漏检。国内已研制成功艾滋病化学发光诊断试剂盒。29HIV抗体筛查检测流程初筛试验的各种方法，目前应用最广的是ELISA方法。对初筛呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认（见下图）。30HIV抗体筛查检测流程

样本初筛检测一阴一阳均阳性反应报告阴性送确认重复检测报告阴性均阴性反应阳性反应原有试剂＋另一种筛查试剂筛查试剂阴性反应31HIV抗体确认试验免疫印迹试验（Westernblot，WB）

（国内常用）条带免疫印迹法（StripImmunoblotAssay,SIA或LinearImmunoblotAssay,LIA）放射免疫沉淀试验（radioimmunoprecipitationassay，RIPA）间接免疫荧光试验（IndirectImmunofluorescentAntibodyAssay，IFA）

32筛查试验阳性反应样品HIV-1阳性反应报告HIV-1阳性阴性反应阴性报告出现HIV-2型提示带免疫印迹法（WB，HIV-2）不确定反应阳性反应阴性反应报告阳性报告阴性每3个月随访1次，共2次，仍属可疑，则报告阴性；如随访期间HIV抗体出现阳性反应则报告阳性。随访期间可根据需要，检测病毒核酸和或P24抗原，作为辅助诊断。

HIV抗体确认检测流程

免疫印迹法（WB，HIV-1/2混合型）不确定反应33免疫印迹法（WB）检测原理

HIV病毒蛋白用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）,把分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品与硝酸纤维素膜一起孵育，恒温震荡，使其充分接触反应，血清中若含有抗-HIV抗体，就会与膜条上的带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，即可使有反应的抗原-抗体结合带呈现紫褐色，根据出现条带情况判定结果。34免疫印迹法（WB）结果判断

我国使用WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则

HIV-1抗体阳性（+）（1）至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现或至少1条env带和p24带同时出现。（2）符合试剂盒提供的阳性判定标准。35免疫印迹法（WB）结果判断HIV-2抗体血清学阳性（+）同时符合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性：（1）符合WHO阳性判定标准，即出现至少2条env带（gp36和gp140/gp105）。（2）符合试剂盒提供的阳性判定标准。36免疫印迹法（WB）结果判断HIV抗体阴性（-）无HIV抗体特异带出现。HIV抗体不确定（±）出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。37免疫印迹法（WB）38WB不确定结果WB的敏感性和特异性均较高。其假阳性率低于1/2万，假阴性率约为1/25万。其较高的特异性主要基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化。由于能够同时检测多种抗体以及对阳性判定的要求必须有两条以上的条带出现，因而能够用WB方法鉴别初筛试验的假阳性结果。不过该方法比较昂贵，技术要求高，影响因素多，操作不当和误判带型的假阳性率>2%。另外，文献报道大约4%～20%的样品经过HIV初筛复检阳性后，WB结果为“不确定”。WB不确定结果的出现确实给临床诊断带来困难，需要更多的时间和实验进一步确认，也会对受试者造成额外的心理负担。从另一方面而言，WB不确定结果确是受试者真实的血清学反应。39HIV抗体不确定对于符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明“3个月后复检”，同时进行以下处理：(1)随访复检：每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月，则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测，仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性，如果在随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。(2)必要时可做HIV-1P24抗原或HIV核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。40HIV抗体不确定当出现任何HIV病毒特异条带，但不足以被判断为阳性则判定为不确定结果。不仅初筛阳性的标本可以出现不确定的结果，初筛阴性的标本经WB检测也有大约15%出现针对一个或几个抗原的不确定结果。WB不确定结果中p24条带最常出现（60%~91.6%），gp120/gp160出现的频率其次。WB不确定结果出现原因比较复杂，与检测对象、检测试剂和实验操作有关，详见下表。41WB不确定出现的原因

HIV及相关感染：早期血清学转换、AIDS晚期、早产感染、HIV缺失株感染、免疫静止型AIDS、HIV-2感染、散发HIV/SIV(猴免疫缺陷病毒)。其它逆转录病毒感染：山羊关节炎-脑炎病毒其它临床状态：自身免疫疾病（系统性红斑狼疮，原发性干燥综合征）、麻风病、恶性肿瘤、高胆红素、高核蛋白、高类风湿因子无感染：HIV阳性母亲所生的正常婴儿、未筛查血液制品的接受者、疫苗试验志愿者、保持WB结果不变的供者42WB不确定出现的原因检测试剂：宿主细胞蛋白残留、判断准则、试剂盒的条件优化/稳定性实验操作：交叉污染、试验程序、仪器设备、样本处理及溶血43其它确认试验线性免疫试验：将HIV的重组和合成多肽抗原包被在硝酸纤维素膜条上，用于检测样本中的HIV-1和（或）HIV-2抗体。该法可降低来自细胞培养的杂质蛋白污染而引起非特异反应，在欧洲应用广泛，大量研究报道称它的准确性与免疫印迹法相当。44其它确认试验放射免疫沉淀试验：用同位素标记的HIV蛋白与待检血清反应，若血清中含有HIV抗体即可与HIV蛋白抗原结合，再加入葡萄球菌蛋白A，经低速离心，然后将沉淀复合物分离后电泳，放射自显影观察同位素标记蛋白带即可判定。本法灵敏度和特异度均好，但因试剂制备复杂，成本高，且同位素操作需要严格防护而限制其应用。45其它确认试验间接免疫荧光试验：将HIV感染的细胞作为抗原固定在玻片上，再在其上滴加待检血清，若含有HIV抗体，则与细胞膜上的病毒抗原结合，清洗后加荧光标记的抗人IgG，洗去未结合的荧光抗体，在荧光显微镜下观察结果，胞浆内出现特异性荧光，而对照孔没有特异性荧光，就可诊断为HIV抗体阳性。此法操作简便，敏感性及特异性均较ELISA法高，但存在对某些血清非特异性荧光难以去除，结果判断需要荧光显微镜，需要受过良好训练的技术人员，对结果的观察和解释易受主观因素的影响，结果也不宜长期保存。46HIV抗原的检测

窗口期：HIV感染人体后有一段窗口期，在这段时期病毒抗体不能被检出，但可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。HIV-1感染机体后,感染者血液中最早出现的是病毒gag基因表达产物p24抗原,然后才出现相应的特异性抗HIV抗体,以后随抗体滴度的升高p24抗原含量呈逐渐下降的趋势以至检测不出。在病情发展到AIDS期，病毒大量复制，机体免疫力下降，所产生的抗体不足以中和病毒抗原时，p24抗原在血中又可检测出。47HIV抗原的检测阳性母亲所生育婴儿检测：HIV阳性母亲所生育的婴儿30%可能已受到感染，但由于婴儿体内母源性抗HIV抗体可持续18个月之久，常规检测抗HIV抗体须要在婴儿18个月以后才能确定婴儿体内的HIV抗体是来自母体，还是自身产生，而HIV抗原的检测则可弥补这一不足。48HIV抗原的检测HIV-1抗体不确定第四代HIV-1抗原/抗体ELISA试剂检测呈阳性反应，但HIV-1抗体确认阴性者的辅助诊断。监测病程进展和抗病毒治疗效果针对HIV抗体产生前的血液产品进行筛查对HIV病毒暴露但血清学阴性的个人进行早期感染的检测49HIV抗原的检测联免疫分析（ELISA）放射免疫分析（RIA）免疫荧光技术（IFA）免疫吸附电镜法（ImmunosorbentElectronMicroscopicalmethod，ISEM）50ELISA检测P24抗原技术检测HIV感染敏感的常规方法双夹心抗体法（原理同双夹心抗原法）假阳性高需用中和试验加以鉴别

51ELISA检测P24抗原改进技术超敏感酶免疫测定法(Ultrasensitiveenzymeimmunoassay，UEI)又称双位点免疫复合物转移酶免疫测定，基本技术路线是利用高亲和力抗体浓缩富集血清中的P24抗原，然后进检测。该法可将下限延伸至0.2pg／ml线性免疫酶测定(1inealimmunoenzymatic

assy，LIA)和CobasCoreHIVCombiEIA是新近发展起来的第四代HIV检测技术。目前最敏感的抗原试剂盒的检测阀值为0.01pg／ml。

52HIV抗原检测局限性

p24蛋白只是个临时标志，急性感染期之后就很快降低到无法检测的水平，只有在病人的AIDS阶段才重新出现

HIV-1P24抗原的阳性结果必须经过中和试验确认，该结果仅作为HIV感染的辅助诊断依据，不能据此确诊

HIV-1P24抗原检测阴性只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染53HIV核酸测定HIV核酸定性检测：是否存在病毒核酸HIV核酸定量检测：血液中病毒复制水平54HIV核酸定性检测

血浆、血清或全血中HIV-1RNA&DNAPCR&RT-PCR方法55HIVPCR检测的主要用途婴儿HIV感染的诊断检测HIV前病毒DNA是婴儿HIV感染诊断首选的方法，与病毒培养和随访的符合率达到95-100%。HIV感染的早期诊断感染以后1-2周就可用PCR方法检测出HIV基因，比抗体出现的时间提前，使窗口期大大缩短，有利于早期诊断。HIV抗体检测不确定结果的诊断有助于及时阐明HIV抗体的不确定结果是早期HIV感染还是非特异性反应，在迫切需要诊断结果的时候很有用处。

56HIVDNAPCR实验是婴儿HIV感染诊断首选的方法●

HIVDNAPCR方法是在新生儿期诊断HIV感染的一种敏感的方法●

38％感染的孩子在出生后48小时HIVDNAPCR就可呈现阳性●

在出生后第二周，检测的敏感性大幅度上升，14天时阳性率达到93％●

28天时阳性率是96％，并且具有很高的特异性（大约99％）●

一次检测呈阳性提示可能存在HIV感染，应采集第二份标本重复病毒学实验以便进行确认。两次不同时间采集的标本HIV病毒学实验均为阳性即可得出HIV阳性的诊断

57对HIV阳性母亲所生新生儿的检测程序是：●

出生后48小时进行第一次检测，大约38％感染的婴儿可以在这个时期得出诊断●

出生时检测为阴性的婴儿应在14天进行一次重复检测，因为病毒学实验检测的敏感性在2周时大幅度增加了●

仍然阴性的婴儿应该在1－2个月时进行重复检测●

出生时和1－2个月时病毒学检测为阴性的孩子应该在3－6个月时再次进行检测

58HIV核酸定量测定辅助诊断:在一般情况下，HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断，但在特殊情况下，单纯抗体检测不足以完成明确的判定，如出现某些非典型的抗体反应形式，特别是不确定反应时，RNA的测定可提供非常有用的证据。虽然单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否，但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时（>3，000c/ml），感染发生的可能性非常大。每一种RNA定量系统都有其最低检测限，即可以测出的最低拷贝数，通常在50

100c/ml以上，RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA。另外，许多AIDS病人/HIV感染者在接受抗病毒治疗后其病毒载量可降至非常低的水平，还有少数HIV感染者在感染后长期处于病毒水平非常低的状态，进行RNA测定时往往测不出来。因此，使用此指标应综合其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。59HIV核酸定量测定早期诊断在HIV感染的窗口期无法使用抗体检测进行诊断。而在感染早期，在抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰，此高峰通常高于发病时的血浆病毒水平，并且有证据表明这个时期的病毒具有很高的感染能力。这个高峰在免疫系统产生反应后，尤其是在细胞免疫出现后开始下降。因此早期病毒RNA测定具有特殊的意义。该方法也可用于HIV感染孕妇所生婴儿的早期辅助诊断。目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的RNA检测以减少窗口期危险（降低“残余危险度”）。60HIV核酸定量测定病程监控根据HIV感染发生后病毒载量具有一定的变化规律，并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因此定期进行病毒载量的检测有助于确定疾病发展的阶段，以确定相应的治疗方案。通常在HIV感染后无症状期内发生的感染或其它临床症状很难与AIDS发病时的症状区别，为确定一个刚发生的症状是否与HIV的感染有关，医生往往需要观察病人的实验室指标，病毒载量就是一个非常重要的指标。61HIV核酸定量测定指导治疗方案及疗效判定临床实践证明，并非在任何情况下HIV感染者都应该进行抗病毒治疗。这不单是经济上的原因，更重要的是由于抗病毒药物的副作用和疗效原因。通常在病毒载量达到一定水平后（如>35，000

50，000c/ml）抗病毒治疗才具有良好的效果。在进行治疗后，通过病毒水平的检测才能确定治疗是否有效，通常在治疗前后病毒水平降低0.5log以上才被认为临床有效。62HIV核酸定量测定预测疾病进程HIV感染后疾病进程与病毒载量的关系十分密切，观察HIV感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。病毒载量与6年发病率的关系为：<500c/ml时5.4%;501

3，000c/ml时16.6%;3，001

10，000c/ml时31.7%;10，001

30，000c/ml时55.2%;>30，000c/ml时则为80%。当HIV感染者CD4+T细胞计数＜200/μl时，病毒载量与3

6个月发展至AIDS的危险为：＜10，000c/ml为4.9%;10，000

29，999c/ml为12.7%;30，000

99，990c/ml为17.7%;＞100，000c/ml为22.4%。在CD4+细胞数相同的情况下，年纪大的比年轻患者发展至AIDS的危险更大（AIDS2004；18：51-58.）。63HIV核酸定量测定常用的HIVRNA定量测定方法

核酸序列扩增试验（NASBA）

逆转录PCR试验（RT-PCR）

分支DNA杂交试验（bDNA）

荧光定量PCR试验64核酸测定注意事项标本类型血浆和血清标本都可用来测定病毒载量，用三种测定方法进行比较都发现血清和血浆测定的结果有高度相关性。但是血清的检测结果大约是血浆的50%（30-80%），可能是因为血液凝固的过程中HIV颗粒被包裹在纤维蛋白网络中，导致血清中病毒的浓度下降。因此，测定病毒载量应该首选血浆标本，血浆也是临床使用的唯一标本。血清标本对于研究也是可以接受的，重要的是每位病人使用的标本类型应始终保持一致。65核酸测定注意事项抗凝剂抗凝剂能够显著影响测定的结果。肝素钠处理的血浆不适合做AmplicorHIV-1Monitor试验，因为肝素是PCR反应的一个潜在的抑制剂。如果必须用RT-PCR方法测量肝素处理的血浆，可以向标本中加入肝素酶以分解肝素。另外，肝素处理的血浆中病毒颗粒降解的速率显著高于EDTA钠盐和枸橼酸钠处理的血浆，一般情况下不同抗凝剂处理的血液6小时之内HIVRNA的降解速率分别是1.8%/小时（EDTA）、3.3%/小时（枸橼酸钠）和5.0%/小时（肝素）。在血液处理方法相同的条件下，用EDTA钠盐抗凝的血浆结果显著优于枸橼酸钠和肝素，因此EDTA钠盐是首选的抗凝剂。66核酸测定注意事项标本处理时间和温度

HIV-1在体内进行快速转换，平均半衰期是大约6个小时。HIV-1在体外未处理的全血中也快速降解，全血中HIVRNA的降解速率在6小时之内平均是9%（0.04log）,最大的降解速率是在采血以后6-8小时，采血以后30小时内可能减少0.5log。因此为了减少病毒颗粒降解对检测的影响，应该在采血以后6小时之内分离血球和血浆，如果做不到就应该使用血浆分离管，立即离心4℃存放，需要保存30小时以上就应该放在-70℃。温度对HIVRNA的影响不显著。-70℃～室温反复冻融3次，HIVRNA变化的幅度小于0.2log。-70℃保存5个月，HIVRNA减少0.3-0.5log，-70℃保存12个月，HIVRNA减少一般不超过0.4log。血浆在室温或4℃保存3天，HIVRNA减少不超过0.5log。67CD4细胞检测CD4+T淋巴细胞计数测定的主要意义用于HIV感染者的疾病分期：CD4+T淋巴细胞＜３５0/mm3艾滋病期判断HIV感染者的临床合并症各种机会性感染与CD4+T淋巴细胞的相关性。帮助确定抗HIV药物治疗及机会性感染预防性治疗的适应症抗HIV药物疗效的重要判断指标。（８周后上升５０％）68与艾滋病相关的免疫细胞检测艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症，主要表现为患者免疫功能低下。对HIV感染者与艾滋病患者进行免疫学功能检测感染者免疫状况，有助于预测判断疾病进程、评价抗病毒药物治疗效果和估测预后。与艾滋病相关的免疫细胞检测指标主要CD4+T淋巴细胞数目、CD8+T淋巴细胞数目以及CD4+/CD8+的比例，更为精细的指标还包括NK细胞、B淋巴细胞、HIV特异性T细胞等。其中最重要的指标为CD4+T淋巴细胞数目。AIDS是由HIV引起的一组综合征，HIV主要侵犯人CD4+T淋巴细胞，导致其数量上的减少和功能缺陷，使机体免疫平衡被打破造成免疫功能低下，最终导致各种机会感染和肿瘤。因而，对HIV感染者和AIDS病人定期进行CD4+、CD8+T淋巴细胞检测具有十分重要的意义。69CD4+、CD8+T淋巴细胞检测意义了解机体的免疫状态以进行疾病分期，以如美国CDC就是以此为基础制订了HIV感染者/AIDS病人的诊断和分类标准（见表1），目前国内外仍被采纳应用。我国《国家免费艾滋病抗病毒药物治疗手册》中将CD4+T淋巴细胞CD4<350/

l作为开始抗病毒治疗的标准。70CD4+、CD8+T淋巴细胞检测意义长期监测CD4+T淋巴细胞绝对数的变化，有助于了解患者的病情发展，决定正确的治疗方案，并观察对治疗的反应。如判断HIV感染者的临床合并症（如当CD4+T淋巴细胞细胞＜200/

l时，很容易发生卡氏肺孢子虫肺炎）。71CD4+、CD8+T淋巴细胞检测意义帮助确定抗HIV药物治疗及预防机会性感染治疗的适应症，如当CD4+T淋巴细胞＜200/

l时，应给予抗卡氏肺孢子虫肺炎的预防性治疗。72CD4+、CD8+T淋巴细胞检测意义是用来评价一些新的、针对HIV的治疗方法和治疗药物疗效的重要指标。（８周后上升５０％）73CD4检测注意事项抗凝管：K3EDTA采血时间：某个相同的时段。如