临床病原菌标本采集规范中国专家共识（2026版）

临床病原菌标本采集规范中国专家共识（2026版）临床微生物标本的规范采集是病原学诊断的基石，直接关系到检验结果的准确性与临床抗感染治疗的成效。分析前阶段的质量误差占整个检验流程误差的60%以上，而不合格的标本不仅无法提供有价值的临床信息，甚至可能误导临床用药，导致抗菌药物滥用与耐药菌传播。本共识基于最新临床微生物学进展、分子诊断技术及感染病学临床实践，系统规范了各类临床病原菌标本的采集原则、操作细节、运输保存及质量控制要求，旨在为各级医疗机构提供可落地的标准化操作指南。第一章总则与基本原则1.1采集时机与抗菌药物使用原则病原菌标本的采集必须严格把握时机。对于大多数疑似急性感染的病例，标本采集应在经验性抗菌药物使用前或停药后至少48至72小时内进行。若患者因病情危重无法推迟抗菌药物治疗，应密切结合药物代谢动力学，在血药浓度谷底或下一次给药前即刻采集标本，并在检验申请单上明确标注已使用的抗菌药物名称及剂量，以便实验室在分离培养时采取相应的药物灭活或中和措施（如使用含树脂或活性炭的血培养瓶）。对于慢性感染或高度怀疑耐药菌感染的患者，需在抗生素洗脱期重复多次采集。1.2无菌观念与防污染机制标本采集全过程必须贯彻严格的无菌观念。采集无菌部位标本（如血液、脑脊液、胸腹水）时，需执行最大范围的无菌屏障操作，包括戴口罩、帽子、无菌手套及使用无菌铺巾。防止皮肤定植菌或环境杂菌污染是保证标本质量的核心。对于深部标本，推荐采用封闭式穿刺采集系统，避免标本暴露于空气。若使用拭子采集，应优先选择液体Amies转运培养基的尼龙植绒拭子，因其具有更好的洗脱能力和无毒性，应尽量避免使用可能抑制病原菌生长的棉拭子或木杆拭子。1.3标识与信息传递所有标本采集后必须立即在床边进行唯一性标识，标识内容至少包括患者姓名、住院号、标本类型、采集部位、采集日期与精确到分钟的时间、采集者姓名。申请单需提供详尽的临床信息，包括疑似感染诊断、症状发作时间、发热规律、近期旅行史、动物接触史以及当前抗菌药物使用情况。缺乏临床信息的标本将极大限制实验室的病原学判断能力。第二章血培养标本采集规范血培养是诊断血流感染（BSI）及感染性心内膜炎（IE）的金标准。标本采集的规范程度直接决定阳性检出率与污染率。2.1皮肤消毒与穿刺部位准备严格执行规范化的皮肤消毒流程是降低血培养污染率的关键。推荐使用0.5%以上的氯己定醇溶液或碘伏进行消毒。消毒范围应以穿刺点为中心，直径不小于10厘米，作用时间不少于30秒，且必须等待消毒剂彻底自然干燥后方可进行穿刺，严禁触摸已消毒的穿刺部位。对于疑似感染性心内膜炎患者，推荐在多部位（如双侧肘静脉）同时采集，以提高罕见病原菌的捕捉率。2.2采集套数与血量标准成人患者每次血流感染评估应至少采集2套血培养（需氧瓶与厌氧瓶配对），每套采血量为20至30毫升，即每瓶8至10毫升。血量是影响血培养阳性率最重要的因素，每增加1毫升血液，成人血培养阳性率约增加3%。对于婴幼儿及儿童，采血量应按体重比例计算，通常为总血量的1%至4%，一般每瓶1至5毫升即可，且儿童通常无需常规采集厌氧瓶，除非疑有厌氧菌感染。不推荐在24小时内采集超过4套血培养，以免增加不必要的医疗负担及污染风险。2.3培养瓶接种顺序与特殊要求若使用注射器采集血液后注入培养瓶，应先接种厌氧瓶，再接种需氧瓶，且更换针头不可作为常规防污染手段，除非针头有明显污染。若采用蝶形针翼直接采血，则应先接种需氧瓶，后接种厌氧瓶，以避免空气进入厌氧瓶影响厌氧菌生长。对于已使用抗菌药物的患者，强烈推荐使用含抗菌药物吸附剂（如树脂或活性炭）的培养瓶，以消除抗菌药物对病原菌的抑制效应。第三章呼吸道标本采集规范下呼吸道感染病原学诊断的难点在于上呼吸道定植菌的污染。合格的标本采集必须尽可能绕过上呼吸道正常菌群。3.1合格痰标本的采集与评估对于自然咳痰，患者应在采集前用无菌生理盐水漱口去除口腔表面附着菌，在医护人员直视下用力咳出深部痰液。痰标本的质量直接影响检验结果的临床价值。实验室应对接收的痰标本进行涂片革兰染色初筛，评估其鳞状上皮细胞和白细胞数量。标本质量评估指标合格标本标准（直接涂片低倍镜下）不合格标本标准处理原则鳞状上皮细胞(LEC)≤10个/低倍视野>10个/低倍视野拒收并要求重新采集白细胞(WBC)>25个/低倍视野<10个/低倍视野拒收并要求重新采集特殊情况对于免疫功能严重低下或中性粒细胞缺乏者，WBC标准可放宽出现大量唾液成分或食物残渣拒收3.2诱导痰与经人工气道吸引标本对于无法自然咳痰或痰液极度黏稠的患者，可采用3%至5%的高渗盐水进行超声雾化诱导排痰。此法尤其适用于疑似肺结核分枝杆菌或肺孢子菌感染的患者。对于已建立人工气道（气管插管或气管切开）的患者，应使用密闭式吸痰管吸取下呼吸道分泌物。开放式吸痰易受气切套管表面定植菌污染，不建议作为常规病原学送检标本。吸痰时应注意避免负压过大导致气道黏膜损伤出血，血液会严重抑制后续的病原菌培养。3.3防污染毛刷与肺泡灌洗液（BALF）采集对于重症肺炎或经验性治疗无效的患者，应采用侵入性防污染采集技术。经支气管镜防污染毛刷（PSB）采集的标本具有极高的诊断特异性，标本需置于1毫升无菌生理盐水中充分震荡洗脱后立即送检。支气管肺泡灌洗液（BALF）能较大范围反映肺泡及终末细支气管的感染状况。灌洗液应注入至病变所在肺段，通常注入100至150毫升无菌生理盐水，回收量需达到注入量的30%以上，通常第一管回收液因含支气管成分可能较多，可弃去或单独用于细胞学分析，后续回收液混合用于微生物学检验。BALF标本在室温下极易受环境杂菌污染或病原菌死亡，必须在采集后30分钟内送达实验室。第四章尿液标本采集规范由于尿液在正常情况下是无菌的，尿液培养的关键在于克服尿道口及会阴部定植菌的污染。标本采集方法比培养技术本身更为重要。4.1清洁中段尿采集标准清洁中段尿是临床最常用的尿液标本。采集前，患者应使用肥皂水彻底清洗外阴及尿道口，女性需分开大阴唇，男性需翻开包皮。在排尿过程中，收集中段尿液10至20毫升于无菌容器中。需强调的是，尿液标本中严禁加入防腐剂或消毒剂，且24小时尿或导尿管尿袋中的尿液绝对不能用于培养，因为长时间滞留不仅导致细菌过度生长污染，还会破坏原尿中的病原菌浓度与活性比例。4.2导尿与穿刺采集指征对于无法自主排尿、无脑损伤且极度不配合的成人，或疑有尿道畸形者，可采用直接经尿道导尿术采集标本。操作时需严格消毒尿道口，弃去最初流出的15毫升尿液以防尿道口菌群污染，收集后续尿液。对于留置导尿管的患者，绝不能从集尿袋下端留取标本，必须夹闭导尿管，消毒穿刺采样口，使用无菌注射器穿刺采集5至10毫升尿液。耻骨上膀胱穿刺尿采集是诊断尿路感染最准确的方法，因其完全避开了尿道下段定植菌，尤适用于婴幼儿、厌氧菌感染及复杂尿路感染疑难病例的确诊。4.3培养结果解读与菌落计数标准尿路感染诊断高度依赖定量培养。标本采集后若不能在2小时内送达实验室，必须冷藏于2至8℃冰箱内（不超过24小时），否则在室温下快速繁殖的污染菌将导致假阳性。实验室报告中，菌落计数是关键指标。对于清洁中段尿，单一菌落计数>10^5CFU/mL通常具有高度临床意义，提示感染；10^4至10^5CFU/mL需结合临床症状及尿常规白细胞结果综合判断；<10^4CFU/mL通常视为污染。但对于经导尿管采集或耻骨上穿刺采集的尿液，由于污染极低，只要有细菌生长（特别是单一菌株>10^2CFU/mL），即有诊断价值。第五章无菌体液标本采集规范脑脊液、胸水、腹水、关节腔积液等无菌体液的病原学检查对化脓性脑膜炎、脓胸、化脓性关节炎等重症感染的诊断具有决定性意义。5.1脑脊液（CSF）标本采集与处理脑脊液采集需通过严格无菌的腰椎穿刺术获得。通常收集3管标本，每管1至2毫升。第一管用于化学和免疫学检测，第二管用于微生物学检测，第三管用于细胞计数。此种分管模式可有效减少因穿刺损伤带入的皮肤定植菌对微生物培养的干扰。脑脊液标本量对于提高检出率至关重要，一般建议不少于2毫升，若疑为隐球菌或结核分枝杆菌感染，建议至少采集5毫升以提高离心富集的检出率。由于脑脊液取出后易凝固且某些病原菌（如脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌）在体外极易死亡，标本严禁冷藏，必须在室温条件下立即送往实验室，常规培养时间应延长至5至7天。5.2胸腹水与心包积液浆膜腔积液标本采集量需充足，常规培养建议采集量不少于10毫升。由于这些体液中可能含有补体、吞噬细胞及抗菌药物，会抑制病原菌生长，建议将标本直接注入血培养瓶（需氧与厌氧各一瓶），剩余标本注入无菌管用于常规生化和细胞学检查。注入血培养瓶可显著提高细菌阳性率。若怀疑厌氧菌感染（如厌氧菌性胸膜炎、腹腔脓肿），标本必须使用厌氧专用转运管，排出空气后密封，并在室温下尽快送检。对于检出真菌或结核分枝杆菌，需要大量标本进行浓缩集菌，建议采集量可达50毫升以上。5.3特殊无菌体液处理细节关节腔滑膜液由于黏稠度高，病原菌分布不均，采集时可使用无菌注射器抽取关节液后，直接注入含抗凝剂（如枸橼酸钠或肝素，但不可使用EDTA，因其对某些细菌有抑制作用）的无菌管中。心包积液标本若怀疑为感染性心内膜炎或心肌炎并发心包炎，需同时送检血培养。由于心包积液量少且珍贵，标本送检前必须明确所有检测项目排序，优先保证微生物学培养。第六章粪便与胃肠道标本采集规范肠道病原菌检测面临的主要挑战是肠道内庞大且复杂的正常菌群。标本采集目标在于精准捕捉特定致病灶。6.1常规粪便标本采集要点对于急性腹泻患者，应在发病早期（最好在应用抗菌药物前）采集含有黏液、脓血或水样部分的粪便，量约为拇指大小（5至10克）或取液体粪便5至10毫升。粪便标本必须采集于专用无菌容器中，严禁使用蜡纸盒或卫生纸包裹，以防吸收水分导致病原菌死亡。标本采集后若不能在1至2小时内送检，应置于Cary-Blair专用转运培养基中，以维持脆弱病原菌（如志贺菌、空肠弯曲菌）的存活。对于怀疑艰难梭菌感染（CDI）的患者，必须留取液态或半固态粪便，且由于艰难梭菌芽孢对外界环境抵抗力强，标本即使冷藏也不能超过24小时，且不得进行反复冻融。6.2直肠拭子及特殊病原体采集对于无法自然排便的患者（如重症昏迷、严重便秘或婴幼儿），可使用直肠拭子采集。拭子需蘸取无菌生理盐水，插入肛门超过括约肌2至4厘米，轻轻旋转并擦拭直肠黏膜获取粪便。直肠拭子不推荐用于艰难梭菌的检测，因其假阴性率极高。对于疑似沙门菌或霍乱弧菌引起的大规模腹泻暴发，建议将拭子直接接种于专门增菌培养基（如亚硒酸盐胱氨酸增菌液或碱性蛋白胨水）以提升检出率。此外，明确要求实验室开展哪种病原体筛选（如沙门/志贺、弯曲菌、大肠杆菌O157等）至关重要，因为不同病原菌需要不同的分离培养条件。6.3标本拒收标准与质量控制实验室需建立严格的粪便标本拒收标准。如果标本呈干涸状态、不含粪便成分（如纯尿液、卫生纸）、运送时间超过规定且未使用保护剂（通常超过2小时）、或疑似被尿液、污水污染，应坚决拒收。此外，常规腹泻病程超过7天以上者，病原菌分离率显著下降，一般不推荐多次重复送检，除非疑有特殊感染（如寄生虫或肠结核）。第七章创伤、脓液与组织标本采集规范表浅伤口及脓肿标本极易受到皮肤及黏膜定植菌污染，培养结果常与实际致病菌不符。深入采集深层组织或坏死基底部的标本是规范要求。7.1浅表与深部伤口标本采集差异浅表伤口或溃疡不推荐常规使用拭子采集，因为大量临床研究表明，拭子培养出的多为定植菌，极易误导临床治疗。若必须采集拭子，应先用无菌生理盐水彻底清洗伤口表面，去除坏死组织及表面渗出物，然后将拭子在伤口深部基底部或感染进展边缘的新生组织处用力旋转采集。对于深部伤口、窦道或脓肿，强烈推荐采用注射器穿刺抽取脓液或采集深部活体组织标本。注射器抽取的脓液不仅能避免定植菌污染，还能提供足够的样本量用于厌氧菌培养。对于窦道感染，最好联合外科清创获取最深部组织送检。7.2厌氧菌培养的标本特殊处理怀疑厌氧菌感染时，标本采集必须绝对避免接触空气。最佳标本类型是注射器抽取的脓液或无菌外科切取的组织块。使用注射器采集后，必须排尽内部空气，并将针头用无菌橡胶塞堵住，迅速送往实验室。若使用拭子，必须置于专用的厌氧转运管中（如含有还原剂指示剂的液体培养基）。严禁将标本置于冰块上冷藏，因为低温会损害厌氧菌活性，所有怀疑厌氧菌感染的标本必须在室温下迅速送检，且实验室必须具备相应的厌氧培养环境。7.3烧伤创面与手术切口感染烧伤患者由于创面大面积暴露，极易被环境杂菌和多重耐药菌定植。烧伤创面的常规拭子培养往往无法区分定植与感染。对于烧伤脓毒症的诊断，最可靠的方法是多部位多点定量培养，或采用活组织切片定量培养（当每克组织中细菌计数>10^5时具有确诊意义）。对于手术部位感染（SSI），应在拆除缝线或引流前，用无菌棉签在切口深处及最具炎症反应的部位采集，同时应描述分泌物的性状（如脓性、血清性、血性），以协助临床评估感染严重程度。7.4组织标本处理与定量培养外科手术中获取的活检组织标本是诊断深部感染（如骨髓炎、感染性心内膜炎瓣膜组织、深部脓肿壁）的最优选择。组织标本不仅含菌量低，且组织质地坚韧。实验室接收后，需使用无菌组织研磨器在少量无菌生理盐水中将其匀浆化处理。匀浆后的液体不仅可用于常规涂片染色，还能进行多点接种以覆盖更多需氧及厌氧培养条件。对于慢性骨髓炎或怀疑隐匿性深部感染的组织，应延长培养时间至少14天，并结合分子生物学方法（如16SrRNA基因测序）以提高苛养菌或不可培养细菌的检出率。第八章生殖道标本采集规范女性生殖道及男性尿道解剖结构复杂，且存在大量正常菌群，因此病原学诊断需精准靶向致病病原体，避免被正常菌群干扰。8.1女性生殖道标本采集阴道分泌物培养的临床意义有限，因为阴道内存在如乳酸杆菌等大量正常菌群，常规培养极易导致假阳性且增加抗生素滥用风险。因此，对于疑似阴道炎患者，应优先采用干化学酶学快速检测或核酸检测（如阴道加德纳菌、念珠菌、滴虫核酸联合检测）。对于宫颈炎或盆腔炎患者，需采集宫颈管内拭子。采集前应先用无菌生理盐水拭子擦去宫颈外口的黏液和阴道分泌物，然后将拭子插入宫颈管内1至2厘米，旋转并停留20秒以充分吸附病原体。对于怀疑奈瑟菌淋病或沙眼衣原体感染的女性，必须采集宫颈管拭子，阴道分泌物检出率极低。对于怀疑子宫内膜感染或输卵管卵巢脓肿的患者，应通过宫腔镜或超声引导下穿刺采集标本，并同步进行厌氧菌培养。8.2男性尿道及前列腺标本采集男性尿道炎患者应在排尿前至少1小时以上未排尿时采集标本。使用细小的无菌尿道拭子（如铂金环拭子）轻轻插入尿道2至4厘米，旋转并停留数秒后取出。急性尿道炎可见大量脓性分泌物，可直接涂片革兰染色。对于慢性前列腺炎的病原学诊断，需采用标准的“四杯法”或“两杯法”尿液分段收集与前列腺按摩液（EPS）联合培养。前列腺按摩液应由有经验的医生操作，按摩前列腺后收集挤出液体进行培养。若按摩后未能获取前列腺液，可要求患者立即排尿，收取最初10毫升尿液（VB3）作为替代标本送检。对于附睾炎或睾丸炎患者，不建议进行穿刺活检，因其有蔓延感染风险，通常采用中段尿培养结合血培养来推测病原体。8.3妊娠相关特殊标本采集对于胎膜早破或疑似绒毛膜羊膜炎的孕妇，需通过羊膜腔穿刺术在超声引导下无菌抽取羊水。羊水标本不仅可用于常规细菌培养，还可用于白细胞计数、葡萄糖测定及乳酸脱氢酶等炎症指标评估。羊水标本必须直接注入厌氧和需氧血培养瓶，以提高厌氧菌及胎儿弯曲菌等苛养菌的检出率。产后子宫内膜炎患者，由于宫颈管存在大量正常菌群，单纯宫颈分泌物培养意义不大，需在严格无菌条件下进行宫腔内采集标本，并结合血培养结果综合判断。第九章特殊病原体与新诊断技术标本要求随着现代分子生物学诊断技术（如PCR、mNGS、tNGS）在临床的广泛应用，标本采集规范需同步更新，以适应高通量与高灵敏度的检测需求。9.1结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌（NTM）标本结核病诊断的标本采集量与次数至关重要。对于肺结核患者，建议连续留取3天的晨痰，若患者无痰，可使用高渗盐水超声雾化诱导排痰或采用胃液抽吸法（主要针对婴幼儿及无力咳痰者）。胃液抽吸标本需在清晨空腹时进行，且必须立即用无菌容器收集并在1小时内用碳酸氢钠中和胃酸，防止酸性环境杀死结核分枝杆菌。对于肺外结核（如结核性脑膜炎、骨结核），除常规培养外，强烈建议进行分子检测（如XpertMTB/RIF），因其敏感性远高于传统涂片。对于NTM感染，需注意区分环境中广泛存在的NTM污染与真实感染，对于痰标本培养出NTM的患者，需结合临床表现及连续多次培养结果（通常要求至少两次同种NTM阳性）方可确诊。9.2真菌与厌氧菌标本的特殊处理真菌细胞壁厚实且生长缓慢，标本要求与普通细菌有显著不同。对于深部真菌感染（如侵袭性肺曲霉菌、隐球菌脑膜炎），需采集大体积标本并进行离心浓缩。肺泡灌洗液是诊断侵袭性肺真菌病的高价值标本，可用于真菌直接镜检（如钙荧光白染色）、培养以及半乳甘露聚糖（GM试验）和1,3-β-D葡聚糖（G试验）检测。需特别注意的是，若患者已使用棘白菌素类或两性霉素B脂质体抗真菌治疗，培养阳性率将大幅下降，此时应高度依赖血清学及分子检测。厌氧菌标本的采集原则如前所述，严禁冷藏和长时间暴露于空气。对于疑似放线菌或诺卡菌感染的脓液，由于这些病原菌呈颗粒状，实验室在处理时应仔细寻找“硫磺样颗粒”并进行压片直接镜检。9.3宏基因组下一代测序的标本选择mNGS技术突破了传统培养的局限，对无菌部位标本的检测具有极高价值。进行mNGS检测的标本采集必须实行最高级别的无菌操作，防止引入环境核酸污染导致假阳性解读。脑脊液、血液、肺泡灌洗液是最常见的送检标本。mNGS不仅可用于检测未知病毒、细菌及真菌，还可发现罕见或苛养病原体。然而，对于呼吸道分泌物、粪便等高背景菌群标本，mNGS结果的解读需谨慎，必须结合临床背景区分定植、污染与致病。此外，mNGS标本在运输过程中需严格冷链（干冰或冰盒）保存，避免核酸降解。由于mNGS对标本中宿主DNA背景极度敏感，对于痰液或脓液标本，实验室需在前期进行宿主DNA去除处理，以提高病原微生物reads的检出比例。9.4分子POCT与多重核酸联检多重PCR及基因芯片技术在呼吸道病原体多联检和血流感染快速诊断中应用广泛。此类检测对标本要求较传统培养稍宽泛，但仍需保证标本质量。如鼻咽拭子用于呼吸道病毒及非典型病原体检测时，应使用特制植绒拭子深入鼻咽部停留足够时间。若患者在采集前使用了含抗生素的漱口水，可能影响PCR反应体系，导致假阴性。此外，含有大量血液成分的标本可能抑制PCR扩增，需在采集和处理时尽量避免溶血及组织过度损伤。第十章标本转运、储存与拒收标准标本自离体至送达实验室的时间及所处环境是决定病原菌存活率的最关键环节。任何延误或储存不当都可能导致病原学结果失真。10.1转运温度与时间窗要求绝大多数临床标本应在采集后室温条件下2小时内送达实验室。若预计无法在2小时内送检，标本应置于4℃冰箱保存（脑脊液、脑膜炎奈瑟菌及淋球菌标本除外，这些病原菌对低温极其敏感，严禁冷藏）。尿液标本若延迟送检超过2小时，必须冷藏，且冷藏时间不得超过24