第八章 血型与输血.ppt

1、血型与输血,兰德斯坦纳（K.Landsteiner),第八章血型与输血,第一节红细胞血型系统第二节其他血型系统相关知识第三节ABO血型鉴定第四节Rh血型鉴定第五节交叉配血试验第六节新生儿溶血性疾病实验室诊断第七节血库基本知识,血型的概念,血型是各种血液成份的遗传多态性标记，是产生抗原抗体的遗传性状。遗传多态性：是指一个系统中至少有两个等位基因，并且其中一个基因频率大于1%的遗传学现象。,第一节红细胞血型系统,一、ABO血型系统二、Rh血型,学习目标,1.说出血型的定义2.叙述红细胞血型系统3.说出ABO血型的分型原则4.列出ABO各型红细胞及血清中的抗原抗体5.明确血型物质的概念6.比较天然抗

2、体和免疫抗体的区别7.简述BO血型亚型的抗原抗体及其与抗血清的反应,第一节红细胞血型系统,到目前为止，共发现400多种抗原，被分为28个血型系统以及2个频率组。其中最具有临床意义的是ABO血型系统，其次是Rh血型系统。本章重点介绍ABO及Rh两个血型系统。,ABO血型系统,一、ABO血型系统,ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是应用最广、与临床输血最密切、最重要、研究和认识较深入的一个血型系统。,一、ABO血型系统,(一)ABO血型分型分型原则：ABO血型是根据红细胞表面是否含有A、B抗原来分型的。可以将血型分为A、B、AB、O四型。后来发现ABO血型系统中还存在H抗原,血清中存在抗A、抗

3、B、两种抗体。,一、ABO血型系统,ABO血型抗原抗体分布型别红细胞抗原血清抗体AA、H抗BBB、H抗AOH抗A抗BABA及B、H-,一、ABO血型系统,(二)ABO血型抗原和血型物质ABO血型系统的抗原有A、B、H三种，人红细胞表面含有什么样的血型抗原是由第9号染色体上携带的遗传基因决定的。,A、B、H抗原决定簇的前身物质（oh）是含4个3种不同糖基的寡糖链，依其连接的顺序分别为：N-乙酰氨基半乳糖、D-半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖、D-半乳糖。,ABO抗原的生物合成,首先由H基因控制形成H物质。然后在A基因控制下，在H物质的D基础上，形成A抗原。或在B基因控制在H物质的基础上形成B抗原。仅有

4、H活性，没有A、B活性，则为O型。,ABO抗原的生物合成,H、A、B血型抗原的形成示意图,半乳糖,基础前身物质,H抗原,A抗原,B抗原,ABO血型抗原,O基因是无效基因，不能引导转移酶的产生，因此，不能在H物质上连接糖基，其结果是O型RBC的H抗原浓度最高，而A、B型仍还有一定数量未转变的H抗原，其H抗原活力强度的顺序为:OA2A2BBA1A1B。,ABO血型抗原属完全抗原，是由多肽链和多糖组成的糖蛋白，多肽链决定着抗原的抗原性，多糖决定着抗原的特异性。ABO血型抗原结合在红细胞和其他组织细胞（神经细胞除外）表面，它与脂质和蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇。,ABO血型抗原,ABO血型抗

5、原,ABH抗原在56周胎儿RBC已可测出，出生时抗原性只达成人的25%50%，在生后18个月时才能充分表现出抗原性，20岁左右达到高峰，抗原性终身不变。,是每个个体所专有的血型抗原物质，以水溶性的形式存在于大多数体液和组织液中，如血清、精液、胃液、卵巢肿液、羊水、汗液、尿液、泪液、胆汁、乳汁和腹水中，但脑脊液中没有。这些可溶性抗原被称为“血型物质”，以唾液中含量最丰富。,血型物质,凡体液中血型物质者为分泌型，约占人群总数的80%，无血型物质者为非分泌型，占20%。,血型物质,血型物质的意义,测定唾液中血型物质辅助鉴定血型。血型物质可中和ABO血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体。,血

6、型物质的意义,检查羊水，预测胎儿ABO血型。制备混合血浆。利用RBC凝集抑制试验，可检查脏器和组织血型（主要用于法医学鉴定）,（三）ABO血型抗体,天然抗体免疫性抗体天然抗体与免疫抗体的鉴别单克隆抗体,天然抗体,机体没有经过可查觉的抗原刺激，就在体内存在的抗体称为天然抗体。,免疫抗体,是经A或B抗原特异性免疫刺激产生的抗A或抗B抗体。这种免疫来自母胎ABO血型不合的妊娠；输入了ABO血型不合的RBC；或注射了纯化的血型物质及含有血型活性物质的病毒或细菌产物等。,ABO血型抗体,天然抗体主要是IgM，免疫抗体主要是IgG，但这种区分的界限也不十分明确，事实上人的IgG、IgM血型抗体往往同时存在

7、。,ABO血型抗体,抗A、抗B:可以完全是IgM；也可以是IgM与IgG；甚至是IgM、G、A的混合物。总体而言，抗A、抗B主要是IgM，而O型血清中是以IgG为主。,特性天然抗体（IgM）免疫抗体（IgG)抗原刺激无可察觉有抗原刺激分子量分子量大分子量小反应最适温度42537血型物质作用易被中和不能或只能部分通过胎盘不能通过胎盘能通过胎盘反应介质盐水介质酶抗人球蛋白血清,天然抗体与免疫抗体的鉴别,单克隆抗体,用淋巴细胞杂交瘤技术生产的ABO型特异性单克隆抗体。,优点：不含其他血型抗体，冷凝集素，T多凝集抗体等，因而血型鉴定结果准确，不受干扰。不含HBV、HCV、HIV等病毒，避免使用者受感染

8、的可能。,单克隆抗体,单克隆抗体,能形成工业性大规模生产及能节约大量人血液原料，故该试剂明显优于人血清试剂。,是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异的引起的变化。,4.ABO血型系统亚型,由于其抗原性较弱，易造成定型错误；有不规则抗体（如抗A1）者常使同型间的配血困难；误输入不相合的亚型抗原，造成溶血的潜在威胁。,亚型的重要性,A抗原的两个主要的亚型是A1和A2。在AB型中应有A1B和A2B亚型。,A亚型,在我国汉族人中：A1型占99.23%，A2型0.77%，A1B型占99.13%A2B型0.87%。也就是说，我国人中A2和A2B型在A、AB型人中都不到1%。,A亚型,A

9、亚型,A1亚型红细胞上含有A1和A抗原，血清中含有抗B抗体；A2亚型的红细胞上只有A抗原，血清中除抗B抗体外，还含有抗A1抗体。B型人的血清中含抗A及抗A1两种抗体，可以与A1、A2亚型红细胞发生凝集反应。,所以A2型的人接受A1型人的血，也可发生输血反应，但只有在37时发生反应的抗A1抗体才有临床意义。,A亚型,B亚型,B亚型较A亚型少见，具有与抗B血清凝集弱的特点，有的显混合外观,有的甚至不凝集，所以将其称为弱B，当被鉴定为O型时可造成输血的错误。,ABO血型的遗传现在接受三复位等位基因学说，认为：在决定ABO血型遗传的基因位点上存在A、B、O、三个等位基因，现在已知ABO遗传位点在第九号

10、染色体上。,ABO血型的遗传,ABO三个基因组成六种基因型：AA、AO、BB、BO、AB、OO；A、B为显性基因，O为隐性基因，所以只有四种表现型：A、B、O、AB。,5.ABO血型的遗传,6.ABO血型异常,一般来说，人类ABO血型是符合一定的遗传规律，且终身不变的，在极少数遗传异常情况下，可见到一些特殊血型，如孟买血型。,孟买血型因首先在印度孟买一妇女中发现而得名。其表现型为oh，无H基因，h基因为无效基因。没有H、A、B抗原，定型时易被误定为O型。,孟买血型,孟买血型血清中含有抗H、抗A、抗B抗体，不管输血给O型人还是接受O型人的血，均会与含H抗原的O型红细胞发生溶血性输血反应。此类患者

11、如需要输血时，只能输oh同型血。,孟买血型,Rh血型系统,二、Rh血型系统,Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。,所以当时认为这些人的RBC上含有一种与恒河猴RBC相似的抗原，取Rhesus的英文字头，称为Rh血型。,恒河猴RBC（抗原）,家兔豚鼠,抗血清（抗体）,85%白种人RBC,凝集,Rh血型,几乎同时，有人发现：一产妇生下死胎后，发生产后大出血，输入爱人的ABO型的同型血，引起产妇溶血，然后把产妇的血取出与其他人的RBC交叉后，部分人RBC发生凝集，

12、提示产妇的血清存在一种ABO以外的抗体。,Rh血型,后经研究发现，这两种抗体确定的抗原并不完全相同，用动物血清鉴别的抗原几乎存在于所有人的红细胞上，仅反应强弱不同，为纪念发现者，命名为LW抗原，其抗体为一种自身抗体。,Rh血型,Rh血型,因为Rh这个术语已普遍采用，以及对原发现者的敬意，故仍定名为Rh血型。所以将利用来源于人体抗体鉴定的红细胞抗原，命名为Rh血型。,Rh血型,凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，称为Rh阳性。使已发现的红细胞A、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和Rh阴性两种。,根据有关资料介绍，Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约

13、99.7%，个别少数民族约为90%。在国外的一些民族中，Rh阳性血型的人约为85%，其中在欧美白种人钟，Rh阴性血型人约占15%。,Rh血型,1.Rh血型抗原,Rh血型的抗原已发现了40多种，与临床关系最为密切的有5种：D、C、E、c、e。5种抗原的抗原性强弱次序为：DECce,Rh血型抗原,五种抗原中，因D的抗原性最强，对临床更为重要，所以临床上习惯将含D抗原的红细胞称为Rh阳性，不含D抗原的红细胞称为Rh阴性。,Rh血型血清不含天然抗体当输血时供血者(Rh阳性)第一次输血无明显凝集反应受血者(Rh阴性)通过体液免疫产生抗Rh抗体当再次输血时出现明显凝集反应,2.Rh血型抗体,当Rh阴性妇女

14、第一次怀孕（胎儿为Rh阳性）分娩时胎儿RBC诱导孕妇产生抗D抗体第二次怀孕胎儿(Rh阳性)抗D抗体胎儿红细胞发生凝集和溶血(新生儿溶血),Rh血型抗体,Rh遗传基因定位于1号染色体上，其遗传方式及命名方法，目前主要用Fisher_Race命名法又称CDE命名法；这种学说认为Rh血型有三个相连的基因位点，顺序是CDE。,3.Rh血型遗传和命名,Fisher的Rh血型基因位点示意图,Rh血型遗传和命名,3个连锁基因可以有8种基因组合，即CDe、Cde、cDe、CDE、Cde、cdE、cde、CdE；子代就可能有由两条染色体上的8种基因型组合成的36种遗传型。用现有的5种抗血清，即抗D、抗C、抗E、

15、抗c、抗e可以检出18种不同的Rh血型。,Rh血型遗传和命名,Rh血型遗传和命名,Rh血型的命名法：被检红细胞与某种抗体凝集就用与抗体相同的符号标记；若不凝集则用其大小写相反的符号标记。,目前有两种说法：1.凡是红细胞上有D抗原的为Rh阳性，标记为Rh+；红细胞上没有D抗原为阴性，标记为Rh-。（这是口头上习惯这种说法）,Rh血型遗传和命名,Rh血型遗传和命名,2.真正的Rh+和Rh-是：CDE为Rh+cde为Rh-在学术上（或血清学）用这种说法,亲代表现型,亲代遗传型,子代遗传型,子代表现型,CDe/cde,cde/cde,CDe/cDE,cde/cDE,图Rh血型遗传举例,ccdee,生殖

16、细胞,Rh血型的发现、遗传和命名,Rh亚型，以弱D最有临床意义。弱D是D抗原的变异体，其免疫原性较弱。但弱D仍是Rh阳性的红细胞，如果将弱D血输给Rh阴性受血者时，仍有产生抗D抗体的可能性，因此不能将弱D输给Rh阴性的受血者。同时由于其免疫原性较弱，不能与所有的抗D血清发生反应，易被误定为Rh阴性，当弱D型人接受输血时应是Rh阴性血，否则可能产生抗D。,Rh血型的亚型,献血者,弱D血液,d阴性（人）,输给,抗D抗体,弱D（人）,接受,溶血性输血反应,可产生,受血者,D型血液,Rh亚型,第二节其他血型的相关知识,一、人类白细胞抗原与抗体二、血小板血型系统三、血清蛋白抗原,1人类白细胞抗原与抗体人

17、类白细胞上被发现有三类抗原：第一类为红细胞血型抗原，即ABO等系统中含有的各种抗原；第二类为白细胞上特有的抗原，如中性粒细胞上的NA、NB、ND等系统的抗原；,第二节其他血型的相关知识,1人类白细胞抗原与抗体第三类为与其他组织共有的，也是最强的同种抗原即人类白细胞抗原（humanleucocyteantigen，HLA）,因为它与其他组织所共有，所以又称为组织相容抗原、移植抗原等。,第二节其他血型的相关知识,HLA抗原HLA-类和HLA-类抗原均为糖蛋白。HLA-类抗原分布广泛，几乎存在于所有的细胞膜上，以淋巴细胞上密度最高。HLA-类抗原与排斥反应有关，还对淋巴细胞的杀伤功能有抑制作用，是组

18、织异斥反应的主要抗原。,第二节其他血型的相关知识,第二节其他血型的相关知识,HLA抗原HLA-类抗原分布的范围较窄，作为一种分化抗原在不同细胞上表达，大多数骨髓分化细胞具有HLA-类抗原。肿瘤细胞可表达HLA-类抗原但正常细胞却没有。,第二节其他血型的相关知识,HLA抗体由复杂的球蛋白构成，含有许多的抗原位点，大部分是IgG,少数是IgM。,2血小板血型系统人类血小板上的抗原主要可分为两大类：一类为非特异性抗原；另一类为特异性抗原，即血小板上所特有的，不存在于其它组织、细胞上的抗原，主要为HPA-1（旧称Zw系统）、HPA-2(旧称Ko系统)等系统中的抗原。,第二节其他血型的相关知识,3血清蛋

19、白抗原血清蛋白抗原按其性质，可分为免疫球蛋白、血清酶、血清蛋白及补体等几类，这些蛋白有型的差异，具有抗原性和刺激同种不同个体产生抗体的特性，通常与输血反应有关的血清蛋白抗原主要是免疫球蛋白。,第二节其他血型的相关知识,第三节ABO血型鉴定,一、标本的采集二、红细胞悬液的配制三、标准血清的要求四、标准红细胞悬液制备五、ABO血型鉴定方法,ABO血型鉴定,一、标本的采集静脉采血3ml,取下针头后，将其中的0.4ml注入已加有106mmol/L枸橼酸钠抗凝剂0.1ml的试管中（血液与抗凝剂的体积比为41），混匀，以备配制红细胞悬液用。剩余血液加入另一支试管，待其自然凝固后分离出血清，将血清置于第三支

20、试管中备用。,二、红细胞悬液的配制应先将被检者红细胞用生理盐水洗涤13次，再配成2%5%的红细胞悬液,ABO血型鉴定,三、ABO标准血清要求标准1.高度特异性2高效价抗A血清效价：1128抗B血清效价：164抗A+B血清效价：164,ABO血型鉴定,三、标准血清的要求：3亲和力在15秒钟内出现凝集，3分钟时凝集块不小于1mm。4不含冷凝集素或其效价在1:4以下。5.不含补体，无任何污染。,ABO血型鉴定,四、标准红细胞悬液的制备三种血型的红细胞，经生理盐水洗涤后得到比容红细胞，再配成不同浓度的红细胞悬液。,ABO血型鉴定,五、ABO血型鉴定方法用已知抗体（抗A、抗B）鉴定RBC抗原（A、B抗原

21、）称“正定型”试验。用已知RBC抗原鉴定血清中抗体称“反定型”试验。,ABO血型鉴定,A型标准血清（抗B）,B型标准血清（抗A）,血型,A,B,O,AB,模拟血型鉴定,ABO血型正定型结果判定,ABO血型鉴定,ABO血型反定型结果判定,ABO血型鉴定,请你来鉴定,B,AB,O,A,凝集,凝集,凝集,凝集,不凝集,不凝集,不凝集,不凝集,请你想一想,即无标准血清又无标准红细胞，如何鉴定血型？,问题答案,用已知某一个人的血型来鉴定其它所有人的血型。,用A型标准血清和B型标准血清对10人进行血型鉴定，其中6人与A型标准血清发生凝集反应，2人与两种标准血清都有凝集反应，1人与两种标准血清都不发生反应。

22、那么，血型为A型、B型、AB型和O型的人数分别是多少？,3、4、2、1,B、O,A、AB,AB、A、B、O,O,A、O,无,A、AB、B,B、AB,第四节Rh血型鉴定,Rh血型血清不含天然抗体Rh血型的抗体是通过免疫产生的免疫抗体，根据免疫抗体的特性，在鉴定Rh血型时，要用检测免疫抗体的方法进行测定，用酶法、聚凝胺法等，如有单克隆的IgM型的抗D，才可用盐水法。,第四节Rh血型鉴定,一、酶介质法二、盐水法三、聚凝胺法四、抗人球蛋白法五、Rh血型鉴定的注意事项六、Rh血型鉴定的临床意义,Rh血型鉴定,一、酶介质法Rh血型抗体因其分子量小，在结合了具有相应抗原的红细胞后，并不能将相邻的红细胞彼此连

23、接起来，使红细胞发生凝集。酶（木瓜酶、菠萝酶等）可破坏红细胞表面带负电荷的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，使红细胞之间排斥力减小，红细胞间距缩小，在不完全抗体的作用下发生凝集。,酶介质法原理,主要用于一些不完全抗体的检测,二、盐水法又称为人源盐水介质抗D试验，是采用二硫苏糖醇等物质作为免疫球蛋白化学变性剂，处理采自人源的IgG抗D血清，使小分子的IgG抗体“转变”成类似大分子的“IgM”抗体的作用。这种IgM型抗D血清可用于Rh血型系统D血型的快速检测。,Rh血型鉴定,Rh血型鉴定,三、聚凝胺法聚凝胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多阳离子，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞间距缩

24、小，发生可逆性的非特异性凝集；低离子强度溶液可降低红细胞的Zate电位，可进一步增强抗原抗体间的引力。,凝聚胺法原理,多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷减少红细胞排斥促进凝集,Rh血型鉴定,四、抗人球蛋白法不完全IgG类抗D抗体结合了含有相应抗原的红细胞后，因其分子量小，在盐水介质中只能与红细胞结合，使红细胞致敏，即在D红细胞包被一层IgG抗体，而不能使其连接起来发生凝集。加入经一定稀释的抗人球蛋白血清后，抗人球蛋白可与红细胞上结合的不完全抗体结合，将致敏红细胞连接，发生肉眼可见的凝集。,Rh血型鉴定,Rh血型鉴定,抗人球蛋白实验示意图,HAB抗原决定族,D抗原决定族,

25、完全抗体（抗A、抗B）,凝集,不完全抗体（抗D）,不凝集（致敏RBC）,致敏RBC,抗人球蛋白（完全抗体）,凝集,Rh血型鉴定,对弱D型应多用几个批次的抗D血清进行检测。本法是最早用于检查不完全抗体的方法，其直接法可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏；间接法可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。,Rh血型如果为D阴性，即Rh阴性时，还需进一步检查什么？,答案,如果为D阴性，即Rh阴性时，则应进一步检查排除弱D（用弱D的检查方法）。原因如下：,献血者,弱D血液,d阴性（人）,输给,抗D抗体,弱D（人）,接受,溶血性输血反应,可产生,受血者,D型血液,解释,解释,献血者受血者,弱D型血

26、液,Rh+,较为安全,Rh-,受血者,弱D型血液,因此应将：,Rh血型鉴定,Rh血型鉴定常识阳性对照可取3个Rh+O型人红细胞混合配制。阴性对照不易得到，一般设计方法是用正常AB型血清。,Rh血型鉴定,临床意义:（一）Rh血型与输血（二）Rh血型与新生儿溶血病,第五节交叉配血试验,交叉配血（crossmatching）试验是输血前必须做的红细胞系统的配合性试验，以确保受者或供者血液没有可测的不相配合的抗原和抗体成分。可分为主侧配血和次侧配血。,主侧：,受血者血浆,供血者血血浆,次侧：,供血者RBC,受血者RBC,第五节交叉配血试验,一、交叉配血试验的方法二、交叉配血试验方法评价与临床意义三、血

27、型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,交叉配血试验,盐水配血法凝聚胺技术抗人球蛋白配血法酶介质配血法,交叉配血试验,（一）盐水配血法天然抗体IgM因其分子链较长，分子量大，在盐水介质中，可以克服红细胞表面电荷的排斥力，与含有相应抗原的红细胞结合并出现肉眼可见的凝集。,盐水配血法原理,交叉配血试验,盐水法是目前最常用的配血方法，可以发现临床最重要的ABO血型不配合性。当受血者和供血者的细胞和血清经混合并离心后，如果有ABO血型不配合问题，就会很快显示出来，所以常称为“立即离心”（immediatespin）配血试验。,盐水配血法结果如发现任何一测或两测有凝集，示血型有误，即异型配血，应立即复查血型

28、，绝对不能随便发血。,交叉配血试验,报告方式格式：受血者（血型）供血者（血型）。血清+供血者红细胞：有/无凝集有/无溶血。血清+受血者红细胞：有/无凝集有/无溶血。,交叉配血试验,试验反应情况结果PS+DCPC+DSPS+PC阳性对照阴性对照盐水介质酶介质抗球蛋白介质签名：年月日,报告方式,交叉配血试验,（二）聚凝胺配血法原理与Rh血型鉴定聚凝胺法原理相同。,聚凝胺配血法的结果如果加入解聚液后观察到凝集散开，则为聚凝胺引起的非特异性凝集，为配血相容。如果加入解聚液后观察到凝集不散开，则为抗原抗体的特异性凝集，为配血不相容。,交叉配血试验,（三）抗人球蛋白配血法不完全IgG型抗体，因其分子量小，

29、在盐水介质中只能使红细胞致敏，即在D+红细胞包被一层IgG抗体，而不能使其连接起来发生凝集。当加入经过一定稀释的抗人球蛋白血清后，抗人球蛋白能与结合在红细胞上的不完全抗体结合，将致敏红细胞连接，发生肉眼可见的凝集。,交叉配血试验,抗人球蛋白配血法Coombs试验,抗人球蛋白配血法是检查不完全抗体最可靠的方法，缺点是操作步骤较繁琐，时间长。适用于特殊需要的情况。,交叉配血试验,（四）酶介质配血法酶（木瓜酶、菠萝酶等）可破坏红细胞表面带负电荷的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，使红细胞之间排斥力减小，红细胞间距缩小，在不完全抗体的作用下发生凝集。,交叉配血试验,酶介质法原理,交叉配血试验,酶介质法敏感

30、性较高，容易检出Rh血型抗体，操作较为简便，试剂也容易购买到，故一般实验室均应建立。,交叉配血试验,酶介质配血法的结果应该是阳性对照管出现凝集，阴性对照管不出现凝集。主、次侧管均不凝集及无溶血，表示无输血禁忌，可以输血。,交叉配血试验,交叉配血的注意事项1用于交叉配血的病人（受血者）血液标本应该是抽取的新鲜血，供血者的标本是刚从血袋剪下来的原已加热封闭两端小管的血液。2采用试管法作交叉配血试验，最好不用玻片法。,交叉配血试验,交叉配血的注意事项3用生理盐水洗涤红细胞去除血浆，预防纤维凝块的形成。4配血管中发生溶血现象，表明有抗原抗体反应同时还有补体参与，是配血不合的严重情况，应十分重视。,交叉

31、配血试验,交叉配血的注意事项5盐水配血试验阴性，但有反复输血史或妊娠史的受血者，应加酶法、抗人球蛋白法等配血。6为确保输血的安全，应输同型血。,三、微柱凝胶试验,原理凝胶具有分子筛效应和亲和效应，在微柱凝胶介质中红细胞抗原与相应的抗体结合，利用凝胶的空间位阻经低速离心，凝集的红细胞悬浮在凝胶的上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶的底部（管底尖部）。,微柱凝胶试验原理,凝胶微柱：试管上端、柱体过滤介质：颗粒直径26103nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过缓冲液：LISS（加或不加抗血清）,微柱凝胶试验原理,将红细胞和抗血清加在凝胶上部反应，离心后观察凝集的红细胞，被阻挡在小

32、柱中凝胶的上部或中央，证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性游离的红细胞，被挤过装有过滤介质的小柱，而到达小柱的底部，证明未发生凝集判断凝集反应阴性,凝胶卡式检测法,是微柱凝胶技术与上述所有技术相结合的产物1986年由法国人Dr.YvesLappierre发明。1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已经作为常规技术应用于临床,三、微柱凝胶试验,试验在透明塑料卡上的凝胶管中进行，微柱凝胶试验（又名微柱凝胶血型卡法）比传统的玻片和试管液体介质中凝集试验更准确、更敏感、更简单，结果可以长期保存。,微柱凝胶试验,微柱凝胶分中性胶、特异性胶和抗人球蛋白胶，分别用于不同的血型血清试验。在中性凝胶中不

33、含抗体，可用于ABO血型正反定型试验。,微柱凝胶试验,在特异性凝胶中含有特异性血型抗体，可用于血型抗原检测。在抗人球蛋白凝胶中含有球蛋白抗体，可用于检测IgG类不完全抗体和相应的红细胞抗原的反应，如交叉配血、不规则抗体检测和鉴定，以及用于人血清抗D血型筛查。,微柱凝胶试验结果判读模式,凝胶抗人球试验凝胶凝集试验与抗人球技术结合,事先在凝胶微柱中的LISS缓冲液中加入AHG,实验中,将红细胞与抗血清加入凝胶上部,离心后观察。如果抗体能结合在红细胞表面,那么通过凝胶内AHG桥联,红细胞发生凝集,判断凝集实验阳性如果抗体未能结合在红细胞表面,那么红细胞不能凝集,判断凝集实验阴性,在凝胶上层加入酶试剂

34、，利用木瓜酶或菠萝酶减小红细胞间阻力，促进红细胞凝集,凝胶抗人球试验凝胶凝集试验与抗人球技术结合,二、交叉配血试验方法评价,盐水配血法优点：反应迅速，如有不配合问题可立即显示出来，使用方便。缺点：只能检出完全抗体若要检测不完全抗体需采用其他配血法。,交叉配血试验方法评价,酶介质配血法优点易检出Rh血型抗体，操作简便，试剂易购得，敏感性尚高。缺点操作较盐水配血法繁杂。,交叉配血试验方法评价,抗球蛋白介质配血法优点：检查不完全抗体最可靠；缺点：试剂供应少，价格较贵，操作步骤较繁杂，仅适用于某些特殊需要。,交叉配血试验方法评价,聚凝胺配血法为最近提出的配血方法优点：除了Kell系统部分抗体如抗K、抗

35、Kpa、抗Kpb需用抗人球蛋白法才能检出外，其他IgM、IgG两种性质的抗体均可以检出，且无非特异性反应。,交叉配血试验方法评价,聚凝胺配血法还可检出能引起溶血性输血反应几乎所有的规则与不规则的抗体，尤其能提高Rh系统抗原反应的强度，使其提高灵敏度；故现已在逐渐推广。,交叉配血试验方法评价,微柱凝胶配血法优点：微柱凝胶卡式法操作简便，结果判定准确，易于掌握，具有很大的临床应用价值。微柱凝胶卡可做血型鉴定、交叉配血及特殊介质配血试验。,交叉配血试验方法评价,微柱凝胶配血法该法是目前国际卫生组织推荐的最先进的微柱凝胶免疫检测技术(简称MGI法)。全自动血型分析仪进行交叉配血也是利用凝胶配血。缺点：

36、其试剂价格昂贵。,交叉配血试验的临床意义,1进一步验证受血者和供血者血型鉴定是否正确，发现ABO系统的不规则抗体，以避免血型鉴定错误而导致的输血后的严重溶血反应。,交叉配血试验的临床意义,2发现其他的血型抗体受、供血者如果ABO血型相同，但其他血型不同时，在交叉配血时也可出现凝集，为避免异型血输入后的溶血反应，在目前许多实验室都不能进行稀有血型鉴定的情况下，全靠交叉配血发现这些血型的不同及免疫抗体的存在。,交叉配血试验的临床意义,3.当受血者一次输血超过16002000m1，或在48小时内输入5L或更多血时,称为大量输血,这时就需要多个供血者的血液,在配血时不但受血者和供血者之间要交叉配血,多

37、个供血者之间也应互相交叉配血,为保证受血者的安全，要求主侧、次侧及献血员之间交叉配血均不凝集时，方可输血。,交叉配血试验的临床意义,4.在急诊配血时,对急需情况可采用试管法配血，在15min内发血。对特急情况应立即发给O型浓缩红细胞或低凝集价的O型全血。然后尽快复查血型和配血，如表现有配血禁忌，应立即通知负责医师及时处理。,请你想一想,交叉配血试验为何分主次侧呢？,答案,1.配血试验主要检查受血者血清中有无破坏献血者RBC的抗体，如有即可引起溶血。2.如发生血型不合的输血时，由于输入RBC上的抗原可刺激机体产生相应的抗体，发生输血反应（溶血）。所以，Ps+Dc为主测。,答案,被稀释（少多）,抗

38、体被病人体内的血型物质中和,不易发生输血反应,3.如血型不合，献血员的血浆误输入病人体内时：,所以：Pc+Ds为次测,三、血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,（一）责任性错误血型鉴定和交叉配血的技术并不复杂，因配血错误而导致输入不合血液的事故中，大多数是因为不严格执行操作规程或操作过程中精神不集中所致，因此为杜绝责任性错误首先应该熟悉操作规程并严格执行。,血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,（二）假阴性1.标准血清不符合要求2.被检红细胞抗原性减弱3.红细胞悬液浓度配置不当4.将溶血反应误认为不凝集5.血型物质的中和作用,血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,（三）假阳性1.红细胞呈缗钱状

39、排列2.冷凝集3.全凝集与多凝集4.类B抗原5.自身免疫性温性抗体,血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,RBCT抗原（无活性）,RBCT抗原（有活性）,血清抗T抗体（任何人）,凝集,+,T凝集现象凝集特点：4室温37。,血型鉴定与交叉配血的异常及其克服办法,类B抗原,ORBCARBC,凝集,ORBC类B抗原ARBC类B抗原,抗B,故常把O型误定B型，A型误定为AB型，呈假阳性,第六节新生儿溶血性疾病实验室诊断,一、概述二、对患儿的检查三、对产妇的检查,一、概述,新生儿溶血性疾病(HDN)一般特指母婴血型不合而引起胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病。因其始于胎儿时期，并能造成胎儿死亡。故而得名。,

40、新生儿溶血性疾病实验室诊断,新生儿溶血病起源于胎儿从父亲方面继承了一些母亲没有的红细胞抗原，使得母婴血型不合，母体存在与胎儿RBC血型抗原相应的免疫性抗体（IgG类），此免疫性抗体可以通过胎盘进入胎儿体内，并包被在胎儿RBC上，在分娩前后加速胎儿RBC破坏发生溶血，造成胎儿发生以溶血为主要损害的一种被动免疫性疾病。,引起本病的血型抗体以抗A、抗B、抗D为多见。国内常见的血型不合引起的新生儿溶血为ABO及Rh血型不合，其中以ABO不合者居多，Rh不合者次之。,新生儿溶血性疾病实验室诊断,无论是哪种血型系统不合，必须具备以下两条才能引起新生儿溶血病（HDN）。1.母亲血浆中必须有与胎儿不相合的抗体

41、。2.此种抗体能通过胎盘进入胎儿体内。,新生儿溶血性疾病实验室诊断,ABO-HDN一般母亲均为O型，婴儿为A或B型（以A型较多），多发生在第一胎。,新生儿溶血性疾病实验室诊断,父,A型B型AB型,母,子,O型,植物，微生物等含有类似A、B型的血型物质.,HDN,A型B型AB型,ABOHDN发病机理示意图,Rh血型不合母亲多为Rh-、子代为Rh+，多发生于第二胎，发病较重。如妊妇曾有输血史或流产史，也可发生在第一胎。,新生儿溶血性疾病实验室诊断,父,Rh+D型,母,1子,Rh-型,Rh+D型,2子,HDN,Rh+D型,Rh血型不合HDN发病机理示意图,母亲（血型）,父亲（血型）,非O型/Rh+型

42、,Rh-,O型,O型/Rh-,非O型/Rh+型,可以不作进一步检查,母血清抗体检查,查父母血型估计患儿血型,母血清抗体检查,免疫性抗体（-）,免疫性抗体（+）,孕期7-8个月时复查,IgG抗A/抗B效价164,Rh抗体132164,均有可能发生HDN,必要时,可作羊水穿刺了解胎儿受累程度,查母血清中有无免疫性抗体,二、对患儿的检查,1.检查血型在产前，对孕（产）妇夫妇双方进行ABO和Rh血型鉴定，用以分析估计新生儿的血型，ABO血型鉴定应包括正、反定型，必要时检查其他血型。2.用患儿的脐带血作红细胞（经过洗涤后）直接抗人球蛋白试验（用一系列不同稀释度的抗人球蛋白血清），若在患儿红细胞上查到被吸

43、收的IgG抗体，则证明红细胞已经受害。,二、对患儿的检查,3用间接抗人球蛋白试验检查患儿血清中有无游离的未与红细胞结合的IgG抗体，证明患儿的红细胞已被免疫抗体致敏。4由于抗体与相应的抗原在适合的条件下才能发生凝集或致敏，这种结合是可逆的，当改变某些物理条件时，抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来。,三、对产妇的检查,除对产妇的妊娠史、分娩史、输血治疗史及健存子女血型和健康状况进行询问外，还要进行夫妻的血型鉴定估计胎儿的血型。最主要的是检查孕（产）妇血清中有无与胎儿红细胞抗原不相合的不完全抗体。,第七节血库基本知识,一、概述二、采血、贮血与供血三、输血及血液成分制品四、常见的输血反应五、输血传染

44、性疾病,一、概述,输血的变迁最早的输血试验是英国人罗维尔在1665年进行的。他把一条失血过多濒于死亡的狗的静脉与另一条健康狗的静脉用鹅毛管连接起来。失血的狗逐渐从濒死状态恢复过来。,一、概述,输血是治疗一种或多种血液组成成份缺乏的治疗方法。输血还可以恢复血容量，补充红细胞，提高红细胞携氧能力，改善供血；提高机体免疫能力等。,献血员的标准,1体格检查标准献血员的年龄为1855岁；体重男性50kg以上，女性45kg以上；血压90140/6090mmHg；脉压差：30mmHg。脉搏6090次/min；高度耐力的运动员50次/min。,献血员的标准,体温正常，符合国家颁布的健康检查标准，发育正常，皮肤

45、、五官、四肢、胸、腹部检查无残疾或严重疾患。在病史询问时注意有无手术史、血液病史、传染病史、免疫史等，女性献血者应避免是月经期、妊娠期和哺乳期等。不符合有关规定者均不宜或暂缓献血。,献血员的标准,2血液检查鉴定血型。血红蛋白测定：男性120g/L,女性115g/L。丙氨酸氨基转移酶（ALT）：正常。乙型肝炎表面抗原(HBsAg)：阴性。,献血员的标准,丙型肝炎抗体（HCV抗体）：阴性。艾滋病（AIDS）抗体(HIV抗体)：阴性。梅毒血清反应：阴性。以上指标均正常时可登记立档，或立即献血或20天内献血。,献血会不会影响自身的健康呢？,临床实践和科学研究得出如下结论：常献血更有益于健康。实践表明：长期坚持适量献血的人，体内新鲜的血细胞含量明显高于未献血者，其精力更充沛，身体更健康。,作为一个健康公民，应当积极参加无偿献血，为换救他人的生命奉献爱心。,献血的组织管理,每次献血员在献血前在当地的血站进行体格检查和血液检查，一般一次献血以200ml为宜，最多不能超过400ml。献血间隔时间不得少于4个月。,采血、贮血与供血,（一）采血