研究生开题报告PPT课件

1、动物体内观察miR-363对口腔鳞癌侵袭与转移的影响及可能的调控机制,导师：学生：,1,实验背景及意义,2,实验内容、方法及研究机制,3,技术路线以及实验难点,4,实验进度安排,参考文献,1.microRNA是一大类非编码小RNA，本身并不编码蛋白质,但是可以通过靶向、特异性作用mRNA或基因启动子，导致靶mRNA降解或者抑制其翻译，降低相关靶基因蛋白质的表达，从而发挥重要的调控作用1。目前研究已经证实，microRNA的异常表达与疾病尤其是癌症有着密切的关系2。近年来其作用及调控机制已成为国内外研究的热点，发现microRNA在不同类型肿瘤及肿瘤的不同发展阶段有着不同的表达3，参与肿瘤细胞的

2、增殖、凋亡、侵袭、转移及血管形成等过程4。,一、研究背景及意义,（一）研究背景,.,4,2.Podoplanin(PDPN)是一种唾液粘蛋白样糖蛋白，对其发挥凝集血小板的功能起关键性作用，研究推测其功能可能有利于肿瘤细胞的血循转移（5）。深入研究发现它在恶性肿瘤组织中有特征性的表达，并有着重要的临床意义（6）。El-Naggar等（7）研究发现90%口腔鳞癌中都有PDPN不同程度的异常表达。研究发现，PDPN在头颈鳞癌发生中也起着重要的作用，Mao等3在对口腔癌前病变-白斑的研究结果中发现，白斑中PDPN表达程度与其组织异常严重程度呈正相关。,3.目前有研究已经通过双荧光素酶报告分析系统、Tr

3、answell及wound-healing等实验，证实了体外头颈鳞癌细胞系中，miR-363可以通过调控PDPN的表达从而对肿瘤细胞侵袭、转移能力产生影响。并对临床病例中转移（0.990.14）与未转移（1.930.21）头颈鳞癌组织中miR-363的表达水平有显著性差异(P=0.001)(9),.,6,肿瘤的侵袭与转移是导致患者死亡的主要原因，针对头颈鳞癌侵袭转移机制的阐明，将有利于帮助我们阐明肿瘤侵袭、转移的机制，对发展肿瘤的新治疗策略提供理论和实验支持；从而发展肿瘤转移诊断治疗的新技术，将对改善晚期转移患者无有效治疗方法的困难局面提供帮助。,（二）研究意义,BACK,.,7,二、实验内容

4、、方法及研究机制,实验内容,1、建立肺及淋巴结转移模型,2、荧光分子探针示踪，观察肿瘤转移情况,（一）、实验内容,.,9,1、建立肺及淋巴结转移模型,构建miR-363慢病毒载体，感染Rca-T细胞株，将0.2ml含有106感染此病毒的细胞悬液分别注射到25只4周龄的雌性裸鼠尾静脉及左后肢足蹼黏膜下后；并将0.2ml含有106感染非miR-363载体病毒的细胞悬液以同样的方式注射另外25只4周龄裸鼠，来作为对照。,（二）、实验方法,分别在14d、21d、28d、35d和42d使用IVIS-100CCDcamera(Xenogen)观察肺部肿瘤转移灶的数量和大小，并通过Xenogen自带软件分别

5、测量处理组以及对照组裸鼠肿瘤灶及转移淋巴结的体积。,2、荧光分子探针示踪，观察肿瘤转移情况,肺转移及淋巴转移的样本将冻存到液氮或者用10%福尔马林固定；这些组织将进一步用免疫组织化学技术检测各种分子，包括miR-363及PDPN的表达变化。,3、分析评价miR-363-PDPN通路对肿瘤转移的调控作用,.,12,研究证实，PDPN3-UTR区存在有一个保守位点及两个非保守位点，而miR-363能够直接结合并作用于此靶向调控位点，反向调节PDPN的表达，并且呈剂量相关性，从而抑制了肿瘤细胞的转移及侵袭能力。本实验利用荧光分子探针示踪方法，观察比较裸鼠肺内及腘窝淋巴结肿瘤转移情况，用免疫组织化学技

6、术检测各种分子，包括miR-363及PDPN的表达变化，用体内实验的方法来证明miR-363-PDPN通路对肿瘤转移的调控作用。,（三）、研究机制,BACK,.,13,（一）技术路线,三、技术路线及实验难点,.,14,（二）技术难点,BACK,2014.22014.5设计miR-363的包埋病毒，建立肺及淋巴结转移模型；2014.62014.7荧光分子探针示踪，观察并记录原发瘤和肿瘤转移情况；2014.8免疫组织化学技术检测各种分子，包括miR-363及PDPN的表达变化，分析评价miR-363-PDPN通路对肿瘤转移的调控作用；2014.9撰写论文,四.实验进度,BACK,.,16,五、参考

7、文献,1PetersenCP,BordeleauME,PelletierJetal.ShortRNAsrepresstranslationafterinitiationinmammaliancells.MolCell2006,21,533-542.2KrichevskyAM,GabrielyG.miR-21:asmallmulti-facetedRNAJ.JCellMolMed，2009,13(1):39-53.3YuanP,TemamS,El-NaggarA,etal.OverexpressionofPDPNinoralcanceranditsassociationwithpoorclini

8、caloutcomeJ.Cancer,2006,107:563-569.4KawaguchiH,El-NaggarAK,PapadimitrakopoulouV,etal.PDPN:ANovelMarkerforOralCancerRiskinPatientswithOralPremalignancyJ.JClinOncol,2008,26(3):354-60.5KatoY,FujitaN,KunitaA,etalMolecularidentificationofAggrus/T1alphaasaplateletaggregation-inducingfactorexpressedincolo

9、rectaltumorsJ.JBiolChem,2003,278:5159951605.6BhallaR,SiddiquiMT,MandichD,etal.DiagnosticUtilityofD2-40andPodoplanininEffusionCellBlocks.DiagnCytopatholJ.2007,35(6):342-7.7YuanP,TemamS,El-NaggarA,etal.OverexpressionofpodoplanininoralcanceranditsassociationwithpoorclinicaloutcomeJ.Cancer,2006,107:563-569.8AtsumiN,IshiiG,KojimaM,etal:Podoplanin,anovelmarkeroftumor-initiatingcellsinhumansquamouscellcarcinomaA431.BiochemBiophysResCommunJ.2008,373(1):36-41.9QiangSun，JianjunZhanga,WeiCao,etal:DysregulatedmiR