动物细胞融合与单体克隆抗体4-9.ppt

1、2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体,一、动物细胞融合技术,1.概念：,动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。,2、原理,细胞膜的流动性,3、诱导方式,物理法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激、振动、离心,聚乙二醇（PEG）,如：仙台病毒,为什么要用灭活的病毒？,仙台病毒,丧失感染活性,保留融合活性,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞融合，形成杂种细胞,4.融合过程：,5.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。,6、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,获

2、得杂种植株,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）,物理、化学方法（同左）,制备单克隆抗体,灭活的病毒,为什么“甲流”康复者或接种疫苗1月以上者的血浆会成为救治重症“甲流”患者的妙药？,血浆中的抗体会与“甲流”病毒反应，从而将病毒消灭。,获得抗体的传统方法,把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。,缺点：,人们发现，B淋巴细胞尽管可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。,怎样才能获得大量的单一性抗体呢？,产量低,纯度低,特异性差,怎样才能获得单一

3、性抗体？,大量克隆单一的B淋巴细胞,其寿命仅有几天，无法长期体外培养,动物细胞培养技术,骨髓瘤细胞,无限增殖,杂交瘤细胞,产生抗体无限增殖,细胞融合,G.Kohler,C.Milstein,英国科学家米尔斯坦和科勒于1975年设计和实践了这个想法，并获得成功。摘得1984年诺贝尔生理及医学奖。,二、单克隆抗体的制备,用抗原免疫小鼠,骨髓瘤细胞的培养,B淋巴细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种细胞,由于培养基中缺乏相应的营养物，骨髓瘤细胞死亡,B淋巴细胞培养几天后死亡,杂交瘤细胞,置于选择培养基上培养,多孔细胞培养板,阳性克隆的筛选和克隆化培养,用培养液稀释,注射到小鼠体内,体外培养,由单个杂交瘤细胞通

4、过克隆，所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。,单克隆抗体,第一次筛选:筛选出杂交瘤细胞第二次筛选:筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,使用的技术:动物细胞融合技术动物细胞培养技术,三、单克隆抗体的特点和应用,“生物导弹”单克隆抗体药物,诊断试剂,用于治疗疾病,1、特点：,特异性强，灵敏度高，产量高。,2、应用：,用于运载药物,优点：准确，高效，快速,练习,1、动物细胞融合技术最重要的用途是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞,B,2、单克隆抗体是由下列哪种细胞产生的（）A.B淋巴细胞B.T淋巴细胞C.骨髓瘤细胞D.杂交瘤细胞,D,3、单克隆抗体制备过程中

5、，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A.B.C.D.,C,4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。,(1).该实验方案的目的是：_,(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？,(3).A是从小鼠的脾脏中取得_该细胞能够产生_。,(4).图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,(5).C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段。,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活的病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,BBBB瘤瘤瘤瘤,细胞融合后培养液中有几种细胞？,已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条D