T淋巴细胞亚群CD4、CD8、CD3 细胞检测临床应用技术讲座

1、-学术部,t淋巴细胞亚群cd4、cd8、cd3细胞检测,2013年3月,临床应用技术讲座,免疫功能量化指标,众所周知，体育锻炼能提高免疫功能，冬虫夏草能提高免疫功能，免疫球蛋白能提高免疫功能，蜂胶、螺旋藻亦能提高免疫功能然而免疫功能是什么？免疫功能是否有效提高？提高到多少？缺少科学客观的量化指标！,科学关注,”食管癌患者存在着细胞免疫功能抑制，了解t淋巴细胞的免疫活性状态,对研究肿瘤的生物学行为具有重要意义。“癌症2005年第24卷07期,“冬虫夏草制剂加化疗组化疗后，可以改善化疗所致的免疫功能低下。”齐齐哈尔医学院学报2006年12月第27卷17期,”急性运动、有氧运动和长期适量运动与人体运

2、动免疫调节产生非常重要联系，对t淋巴细胞及其亚群的免疫功能有重要影响“中国临床康复2003年第7卷18期,免疫功能，我们究竟了解多少？,以癌症为例：正常人每天都会产生100200个原癌细胞，体内免疫系统能及时发现并消灭它们。若人体免疫机能下降，便无法有效清除癌细胞，细胞大量增殖最终形成肿瘤。,免疫功能人体抵御外来病原体侵袭、进行自我保护的一种能力。,免疫功能，人体免疫防护伞,如肿瘤，80%以上肿瘤的发生，是因为人体免疫功能长期低下。肿瘤在免疫功能低下的情况下，易发生转移、复发,目前通常针对天平一端，如癌细胞进行各种检测，如：癌胚抗原、甲胎蛋白等肿瘤标志物、或早期癌细胞pet-ct检测；对天平另

3、一端：免疫功能，多以白细胞检测为主，缺少cd3/4/8细胞计数此类精细化检测项目。,人体大部分的疾病与免疫功能低下有关！,免疫功能，精细化检测,免疫系统简介,免疫系统,免疫器官（胸腺、骨髓、淋巴结等）,t淋巴细胞b淋巴细胞nk细胞巨噬细胞、粒细胞等,cd3cd4cd8,t淋巴细胞（电镜图）,免疫系统，是人体抵御病原体入侵最重要的保卫防护系统，由免疫器官、免疫细胞，以及免疫分子组成。,免疫分子（抗体、细胞因子等）,免疫细胞,t淋巴细胞细胞免疫通过效应t细胞分泌穿孔素等，摧毁侵入到寄主细胞内的病毒、胞内寄生菌或外来的组织团块、癌变的细胞等。,b淋巴细胞体液免疫通过效应b细胞分泌抗体，与抗原发生特异

4、性结合，清除的是游离在寄主细胞外的抗原及其产生的有毒物质。,免疫细胞,细胞免疫主力军t淋巴细胞,cd4细胞，诱导/辅助性t细胞，人体免疫系统最重要枢纽细胞，又被称作“人体免疫系统的司令官”。,cd3细胞，成熟t淋巴细胞，表示人体总t细胞水平，反映免疫功能状况。,cd4/cd8比值，临床诊断敏感指标，cd4与cd8相互制约共同作用，比值异常，可迅速判断人体免疫功能发生紊乱。,cd8细胞，抑制/细胞毒性t淋巴细胞，能直接识别并杀伤致病细胞，与cd4协作抵御外侵。,目前已发现cd系列细胞有近百种，在人体细胞免疫中起重要作用（并具有临床意义）的主要是cd3、cd4、cd8等细胞。,正常参考值：cd3：

5、770-2860/ulcd4：414-1440/ulcd8：238-1250/ulcd4/cd8：0.7-2.87,汤钊猷中国工程院院士，全国重点学科肿瘤学学科带头人，著名肝癌专家，复旦大学肝癌研究所所长,“对待癌症，除针对性治疗外，一定要努力改造自己，让自己提升免疫功能，才能在抗癌战争中占有利地位和优势。”,2011年诺贝尔生理学或医学奖授予美、法、加三位科学家在免疫系统方面的研究。,“免疫学是距离临床最近的学科，它涉及整个人体、每个细胞，在人类破解生命与疾病之谜道路上，发挥不可估量的作用。”,免疫，不可或缺的诊断,免疫，不可或缺的诊断,曹雪涛中国工程院院士、中国医学科学院副院长兼医学免疫学

6、国家重点实验室主任,免疫学的研究成果已经渗透到临床的几乎每一个角落，应用免疫学技术和方法研究疾病发病机制以寻找可以应用于诊断、治疗和预防疾病的新方法、新试剂、新药物越来越得到重视。,技术背景&项目起源,比尔梅琳达盖茨基金会成立cd4专项基金，全球征募具有简单、廉价、快速、有效特性的cd4细胞检测新方法。,仪器投资大配套试剂贵工作条件苛刻操作人员要求高,制约,瓶颈和焦点：cd4细胞检测,传统cd检测方法：流式细胞法，被美国垄断。,技术背景,9月相关论文发表于americanbiotechnologylaboratory期刊,梦起圣地亚哥,2002年8月回国，开始该项目的研发,180多日的失败、实

7、验条件的限制、实验理论饱受质疑、资金短缺重重问题让研发举步维艰!,艾滋成为坚持的动力不仅仅是为一个期待的眼神，更是为一个生命的延续。,艾滋成为动力,特异性抗体事先包被在芯片基板上，样本中表达有该特异性抗原细胞与芯片接触反应后，特异性细胞便被分离固定，再通过自动计数仪对固定细胞分析。,cd3/4/8细胞检测玻片,技术原理,室温操作保存无需冷藏,长期保存，可随时随地复查,操作时间短易掌握,低成本,静脉、末梢血均可,仪器自动读数可视化分析,优势特点,2006年，“measuringcellularmetabolismofimmobilizedcells”正式获得美国专利局批准（patentno.us

8、7141369）soloinventor:caobo,以下三个美国专利，对该平台技术构成了一个完整知识产权保护体系。专利一：“measuringcellularmetabolismofimmobilizedcells”专利二：“measurementofthecellactivityandcellquantity”专利三：“methodsandkitsfordetectingatargetcell”,2010年，“methodsandkitsfordetectingatargetcell”正式获得美国专利局批准（patentno.us7855068）soloinventor:caobo,美国专

9、利,北京协和医院、北京佑安医院、武汉大学附属人民医院,1300余例临床验证结论：semibio细胞免疫芯片与流式细胞仪相关性为0.95以上。,上海中山医院、上海市公共卫生中心、上海市第六人民医院,临床验证机构,临床验证,医疗器械生产企业许可证,医疗器械注册证,qms考核报告,新药证书,上海医学科技奖,美国专利,2010中国国际工业博览会创新奖,资质认证,政府支持,2004年上海市科委生物技术基础课题研究项目2005年上海市科委重大专项科技攻关项目2006年国家科技部创新基金2007年中小企业科技部创新资金2008年获上海医学科技奖2009年上海生物医药产业转化项目2009年上海高新技术成果转化

10、项目2010年上海市科委“科技创新行动计划”生物医药领域重大专项2010年获中国国际工业博览会”创新奖“2011年通过who世界卫生组织-南非国家实验室（nhls）泛非认证2012年第19届美国华盛顿“世界艾滋病大会”参展并发表大会论文,该技术被作为新技术收录于who2007版laboratoryguidelinesforenumeratingcd4tlymphocytesinthecontextofhiv/aids中，成为对艾滋病提供有效的诊断和治疗手段的技术参考。,对美国cdc实验室、南非卫生厅等相关技术人员进行该检测方法的培训。,2011年4月，顺利完成南非国家实验室（nhls）泛非认证

11、,国际应用,abiochipforspecificcellseparations.americanbiotechnologylaboratory,september2002,28abiochipforcd4cellcount.the2ndinternationalaidssocietyconference,july2003,parishivtestingtechnologiesaftertwodecadesofevolution.indianjmedres121,april2005laboratoryguildelinesforenumeratingcd4tlymphocytesintheco

12、ntextofhiv/aids.whojun,2007一种cd4细胞计数方法.第二届亚洲检验技师学术大会,2005细胞芯片法测定健康体检人群全血中cd4细胞的临床应用价值.实用医学杂志,2007,23(20)加味玉屏风汤对提高慢性病患者cd4指标临床观察.上海中医药杂志,2007,41（10）玉屏活血汤提高老年气虚证患者cd4+t细胞临床研究.江西中医药,2011,8(41)老年冠心病患者免疫反应的研究.检验医学,2011,26（12）,发表论文,cd3/4/8玻片检测与流式比较,semibioassay细胞免疫芯片,fcm流式细胞法,目前，细胞免疫相关检测在临床科室少有开展，滞后于日趋上升的

13、临床需求。,革命性突破,临床应用,临床应用,通过cd3、cd4、cd8t细胞检测,掌握疾病发病机制中，免疫参与程度，制定“免疫治疗”方案,在肿瘤、感染性疾病、心肺疾病、自身免疫性疾病、各种原因导致的免疫功能低下等疾病中广泛应用。,掌握疾病治疗过程中，免疫动态变化，评估治疗风险、用药药效、及机体恢复程度,掌握亚健康人群，免疫水平及变化，筛查肿瘤等重大疾病隐患,临床应用,临床应用,肿瘤科,应用：肿瘤科,恶性肿瘤的发生、发展、转移与人体免疫功能下降密切相关。人体的抗肿瘤免疫以细胞免疫为主，体内发挥抗肿瘤免疫作用主要由cd4和cd8细胞完成。,cd4细胞能促进效应细胞抗肿瘤作用；cd8细胞则主要起相反

14、免疫抑制作用；机体处于肿瘤状态，体内组织胺水平升高，激活cd8（抑制性t淋巴细胞）分泌抑制因子，抑制cd4（辅助性t细胞）和b细胞增殖与分化，从而抑制机体免疫功能。,1、肿瘤患者处免疫抑制状态，t淋巴细胞降低。,2、肿瘤患者t淋巴细胞与病程相关，随病程逐渐降低。,cd3、cd4、cd4/cd8细胞数下降程度：期期期期,应用：肿瘤科,摘自：肿瘤学杂志2004年第10卷第3期,【临床案例】42例肺癌患者，转移患者cd3、cd4及cd4/cd8比值均显著低于未转移患者及正常组。,3、肿瘤患者t淋巴细胞持续低下，转移率高、易复发。,在化疗或放疗或手术前，及时给予免疫增强同步治疗，有助于提高疗效。,组合

15、治疗：化疗中，同步给予免疫增强剂（如干扰素、左旋咪唑等）后，cd8下降，cd4、cd4/cd8升高，机体自身抗肿瘤免疫效得到有力发挥，患者恢复良好。,4、肿瘤患者的化疗、放疗、手术治疗会导致免疫抑制。杀伤或切除肿瘤细胞同时具有非选择性杀伤作用，会损害机体细胞免疫功能。,应用：肿瘤科,应用：肿瘤科,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,1、入院基础检测（了解患者免疫功能初始状态）2、放疗、化疗、手术前检测（评估治疗前免疫状态，预测疗效及风险）3、放疗、化疗、手术后检测（评估治疗后免疫改善状况）4、出院前检测（预后判断）5、易转移、复发，每月跟踪检测（判断是否发生转移、复发）,全国现有三级医院

16、约1300家，二级医院约6500家，其中80%以上无流式细胞仪。同时由于流式成本昂贵、操作繁琐，cd3/4/8数量及比值检测，虽然对于肿瘤治疗意义重要，但临床基本未开展。,世界新发肿瘤病人20%在中国,卫生部统计资料表明：中国年均肿瘤新发病例超220万，死亡病例超160万。其中2008年，中国肿瘤新发病例为280万，死亡病例为196万。同时，中国肿瘤治疗市场年增长率超30%。,应用：肿瘤科,临床应用,感染科（感染性疾病）,应用：感染科（感染性疾病）,感染和抗感染免疫贯穿于整个感染发生、发展及其不同转归全过程。人体抗感染作用主要由细胞免疫介导，免疫功能紊乱，易引发感染性疾病；感染，同时可直接抑制

17、、干扰和损伤免疫系统。,应用：感染科（感染性疾病）,如乙型病毒性肝炎，当患者免疫功能低下便无法清除hbv病毒，以致其在体内持续存在，通过检测t淋巴细胞数值变化，可判断患者有无慢性化倾向，并为临床准确使用干扰素等免疫调节剂治疗提供依据。,与hbv病毒载量检测同步或与之相对应：如hbvdna病毒复制期、hbv持续感染期、hbv清除过程中、肝功能谷丙转氨酶(alt)异常期、hbeag抗体呈阳性后监测等。,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,乙型病毒性肝炎,应用：感染科（感染性疾病）,患者机体的全身免疫功能紊乱和尿路局部免疫功能低下，是造成尿路感染反复发作的重要原因。免疫功能低下发生尿路感染者，

18、单纯使用广谱抗菌素，会导致霉菌感染和耐药菌株产生及菌群失调。,反复尿路感染,结合免疫调节治疗，合理调节抗生素使用，缩短治疗及住院时间，改善患者治疗效果。,临床应用,老年病科,随着年龄增长，免疫力的逐年减低更易引发感染、肿瘤、自身免疫疾病等反复发作，且病情较重治疗困难，而免疫功能的减退主要与t细胞有关。,由于衰老，免疫力下降，导致抵抗力下降，老年人感染发病率明显增高。（1）由外源性感染向内源性感染转变（2）感染多重性、易反复（3）病原微生物耐药、变异，治疗困难,老年感染性疾病,应用：老年病科,肿瘤可以发生任何年龄段，但65岁以上老人明显增多，消化系统尤为突出。资料显示，老人肿瘤生长速度与转移的情

19、况较年轻患者缓慢。老年人肿瘤的增多与免疫力下降，特别是细胞免疫功能的减弱密切相关。,老年肿瘤,生理衰老,衰老既是生理过程也是病理过程，提高免疫力可以抗衰老或减缓衰老。补锌可改善老年人的免疫功能，锌能够使胸腺维持正常功能与增强胸腺激素分泌作用。增强cd细胞杀伤功能。口服硫酸锌300mg/d,一个月（疗程），免疫功能明显提高。中药抗衰老，人参、黄芪、灵芝、银耳、刺五加、党参、枸杞、鹿茸等。,应用：老年病科,临床应用,呼吸科,应用：呼吸科,呼吸道是病毒感染主要靶器官，病毒感染可降低呼吸道防御功能，从而引起反复感染。,免疫功能低下患者，细菌性肺炎发病率增高，其死亡率10倍于正常人，特别是金黄色葡萄球菌

20、感染，由免疫力低下引起的肺炎约占肺炎的5%。,应用：呼吸科,其反复发作、难愈重要原因是反复呼吸道感染，此类患者均存在免疫细胞失衡和免疫紊乱。同时哮喘患者由于长期不规范应用抗生素和全身激素，更加使免疫功能紊乱，感染与免疫紊乱互为因果，形成恶性循环。,急性发作期，与血气和肺功能fev%检测同步参考。用药期间，每2-4周随诊检测1次，3个月后每2个月左右随诊检测1次，共观察12个月，定时监测控制。,气道炎症是支气管哮喘的病理基础，肥大细胞释放炎性介质，引起支气管哮喘早期速发反应，而激活肥大细胞和启动炎症反应者主要是t淋巴细胞。,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,支气管哮喘,应用：呼吸科,co

21、pd反复发作和加重与呼吸道感染有关，免疫功能低下是引起老年copd患者易受病毒、细菌感染的重要原因。,老年copd急性加重期患者因存在长期营养不良，感染等因素导致呼吸功能下降，机体氧供不足，易引起器官缺氧，从而影响机体免疫细胞的发育、成熟，导致机体免疫功能下降，从而引起全身及肺部免疫功能衰竭。,慢性阻塞性肺疾病（copd）,临床应用,心内科,应用：心内科,其主要致病原是柯萨奇病毒，通过对心肌的直接损伤或诱发自身免疫反应导致心肌炎的发生。而感染病毒2周后，免疫所致心肌损伤是病毒性心肌炎的主要发病机制。,大多数心血管疾病的发生有免疫学机制参与，免疫反应可导致心肌损伤及心肌能量代谢障碍。,病毒性心肌

22、炎,应用：心内科,患者发病入院后次日清晨、ami患者发病1220小时内、冠脉造影狭窄以心外膜下主要血管50等，作为心电图检查和血清酶检查的有力补充。,其主要病因是冠状动脉粥样硬化，t细胞免疫参与动脉硬化的发展。免疫细胞失去平衡，造成斑块内平滑肌细胞破坏，从而导致斑块破溃、出血、形成血栓使血管闭塞等冠脉事件的发生发展。,冠心病,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,临床应用,风湿免疫科,应用：风湿免疫科,自免疾病的发生是t细胞攻击自身细胞和组织，抗原免疫诱导自身免疫反应产生，导致组织器官损伤和生理功能障碍。,ra患者活动期、缓解期，可通过t细胞变化，配合免疫抑制药物控制t细胞活化，从而抑制急

23、性炎症反应。,应用：风湿免疫科,ra是一种病因复杂的自身免疫性疾病,t细胞介导自身免疫反应失衡，是造成病人组织病理损伤重要原因，通过t细胞分析可评估ra缓解、复发可能性，指导选择停药时机。,类风湿关节炎（ra）,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,临床应用,中医科,中医治未病、辨证论治的整体观念，是建立在人体免疫力平衡基础上，疾病的发生，主要由六淫七情之内外因所致，通过t细胞检测为中医辨证论治提供虚实阴阳判别在免疫学上依据。,应用：中医科,如出现脾胃气滞、腑脏阴阳气血失调、湿浊内生等病机时，可依据细胞免疫变化加以判别；方剂用药判断疗效。,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,女，28

24、岁，主诉疲倦乏力、睡眠不佳，易感冒，无其他器质性疾病。舌淡，苔薄白，表面粗糙，脉浮虚。属正气不足，元气虚弱。辅以t淋巴细胞亚群检测，cd4偏低、cd4/cd8在正常范围下限。用玉屏风散，生黄芪120克，炒白术180克，防风60克，制成散剂，每日9克，代茶饮。,一疗程后，患者cd4、cd4/cd8显著升高，主诉症状明显改善，感冒次数减少，说明患者正气提升，免疫功能得到有效提高。,论文发表：加味玉屏风汤对提高慢性病患者cd4指标临床观察.上海中医药杂志,2007年第41期第10卷,应用：中医科,临床应用,儿科,应用：儿科,多种小儿疾病原发或继发地存在t细胞异常，观察t细胞变化，对小儿疾病病因、发病

25、机制以及协助临床诊断与治疗等具有重要价值。,小儿发热症状,血常规crp（c反应蛋白）,血常规crp（c反应蛋白）cd3/4/8检测（免疫力）,结合退热、消咳、肺罗音消失时间观察t细胞变化，特别针对儿科患者可合理调节抗生素使用，改善预后，避免药物损伤。,应用：儿科,易感儿（支气管炎、支气管哮喘、肺炎）病情迁延不愈或反复，重要病因是原发或继发性免疫功能低下。,小儿支气管炎,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,临床应用,外科,应用：外科,手术、麻醉、围手术期输血均可产生免疫抑制，手术创伤是产生免疫抑制的重要原因；不同麻醉可造成不同程度的免疫抑制；同型异体输血，血液中免疫活性成分引起免疫调节作用

26、。,通过了解患者细胞免疫功能状况，及时掌握手术后恢复进程，减少患者手术并发症、术后感染发生率及死亡率。,通过了解患者细胞免疫功能状况，可预测患者手术预后情况，特别是老年患者（提高老年患者免疫水平，可增加手术安全性）。,手术前,手术后,临床应用,妇科,应用：妇科,不孕妇女体内激素水平等生理及心理压力等因素影响，免疫细胞（如cd4）要不断调整适应变化，产生免疫耐受、表达抑制、功能降低，分泌细胞因子减少等情况。,免疫性不孕,不孕妇女外周血成熟淋巴细胞凋亡过度，细胞数量减少，整体淋巴细胞免疫功能降低，造成不孕妇女免疫力低下或存在不平衡状态。,临床治疗，应从免疫方面入手对不孕妇女进行保健和治疗，提高免疫

27、功能。,应用：妇科,正常妊娠的维持,有赖于胎儿与母体之间免疫平衡的建立和稳定,这种免疫平衡一旦失调,即可导致一系列血管内皮细胞病变,从而发生妊高征。,妊娠高血压综合征,平均动脉压，妊高征患者cd4/cd8比值与其平均动脉压呈正相关，即妊高征患者细胞免疫功能失衡程度与妊高征严重程度相关。,临床应用,皮肤、性病科,应用：皮肤、性病科,是由hpv感染引起，ca的发生、消退、复发及癌变与机体的免疫功能密切相关。,t细胞在炎症性皮肤病发病机制中具有重要作用，常规治疗与免疫调节治疗组合使用，患者预后效果更好。,尖锐湿疣（ca）,根据不同的病程时间，在发病初期、治疗期、去疣体后康复期（3-6个月复查期内）定期对t细胞变化进行跟踪，可有效根治及预防复发甚至癌变。,t细胞cd4、cd8、cd3检测介入时间,临床应用,体检科,应用：体检科,人体80%以上疾病的发生与免疫系统有关，疾病在免疫力低下的情况下易发生、反复、恶化，关注致病因子同时，需关注免疫功能。,重大疾病初筛，如肿瘤发生潜伏期、疑似感染性疾病潜伏期、免疫类疾病潜伏期、血液病潜伏期等人群。亚健康普查，如出现食欲不振、头痛、失眠、心绪不宁、精神萎靡、注意力不集中、疲劳、健忘及性功能障碍