实验一 培养基配制.ppt

1、植物组织培养实验,实验一 培养基的配制及其灭菌 实验二 外植体灭菌及其初代培养物的建立,实验一 培养基配制及其灭菌,一、实验目的 了解培养基制备方法及灭菌技术。 二、实验原理 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似生物 体内生存的营养环境。一般常用MS培养基，无机盐浓度较高，能满足组织快速生长的需 求。为减少称量的工作量和误差，一般先配制培养基的各种母液，然后按需要量加入。 三、实验材料 1、实验药品 2、实验用具 四、实验步骤 1、MS培养基母液的配制 （1）大量元素母液（母液1）N、P、 K、Ca、S、Mg （2）微量元素母液（母液2）Mn、B、Zn、C

2、u、Mo、Cl、Ni （3）鉄盐母液（母液3） Fe （4）有机物质母液（母液4） NAA 、6-BA 、GA3,MS培养基配制表,2、植物生长调节物质的配制,配制方法： NAA：称2 NAA，加少量95%酒精溶解，再加水定容至1000 ml。6-BA：称2的6-BA，加少量1mol/L的NaOH溶解，再加水定容至 100 ml 。 GA3：称5 ，加水定容至500ml。,3、MS固体培养基的配制、分装和灭菌 （1）取一只1L烧杯，放入约500mL蒸馏水，依次加入母液1（100mL）、母液2（10mL）、母液3 （10mL）和母液4（5mL），并不断搅拌。（本实验2L，先配1L，再配1L） （

3、2）加入植物生长调节物质（NAA:100ml,6-BA:10ml,GA3:75ml）和30g蔗糖，待蔗糖溶解后加蒸馏水定容至1L。 （3）加入琼脂（0.6g/L），加热溶解。 （5）调整pH6.5。 （6）将培养基分装到锥形瓶中，每瓶约300mL. （7）灭菌。放入高压蒸汽灭菌锅中，121、0.105Pa灭菌15min。 （8）倒平板。所倒培养基约占培养皿的1/3。,五、思考题 1、培养基的各种成分在植物体内的生理作用有哪些？ 2、使用高压灭菌锅在培养基灭菌时应注意哪些问题？,实验二 外植体灭菌及其初代培养物的建立,一、实验目的 通过外植体灭菌及接种等无菌操作训练，掌握植物组织培养 材料灭菌的

4、基本方法和无菌操作技术，建立初代无菌培养体 系。 二、实验原理 选取的外植体都不同程度地带有各种微生物，根据实验材料 的特点要进行相应的灭菌处理。然后接种到培养基上放入培 养室中培养，是之生长，就可以建立起初代培养物的无菌体 系。 三、实验材料和用具 材料：5种草的绿色叶片。,四、实验步骤 1、用75%的酒精擦拭干净，将剪刀和镊子浸入75%的酒精中。 2、将外植体（绿色草叶）置烧杯中，用水冲洗干净。放入75%的酒精中灭菌30S（不断搅拌），倒掉酒精，用无菌水冲洗3次后，再放入2%的次氯酸钠溶液中灭菌15min。 3、将次氯酸钠溶液倒掉，用无菌水冲洗材料3-5次。用镊子取出无菌滤纸，取出叶片放入无菌滤纸上，用镊子和剪刀对叶片进行分割，切成0.5x 0.5左右。 4、打开培养皿盖子，开口靠近酒精灯2 左右，将切碎的叶片接种到培养基中（每个培养基接种10片），盖上盖子。标记植物材料名称、接种日期和接种人。 5、接种后的植物材料放入具有控制温度、光照和湿度