药理实验基本操作

1、实验1药理实验的基本操作1 .药理学实验的注意事项安全值班。2 .制作试验报告实验报告要求结构完整、有序、术语规范、细节恰当。内容包括试验主题、试验目的、实验原理、试验材料、试验方法、实验结果、讨论、结论、注意事项。3 .药理学实验设计的三项原则重复，随机，核对。4 .药理学实验中常用动物的介绍4.1常用种类：小鼠、大鼠、大鼠、豚鼠、兔子、猫、狗、猴子和鸡、青蛙、蟾蜍、猴子和黑猩猩等实验动物。青蛙和蟾蜍饲养容易，一般用其心脏，观察药物对心脏的作用坐骨神经腓肠肌标本观察药物对周围神经、横纹肌或神经肌接头的作用，可用于局麻药和肌松药的研究小鼠最常用，容易大量繁殖，适用于需要大量动物的试验，如半数致

2、死量和药物的初步筛选试验大鼠可以用于血压试验等不方便小鼠进行的试验，大鼠对炎症很敏感，可以观察药物的抗炎作用。 大鼠没有胆囊，容易通过胆管收集胆汁的大鼠也是新药进行长期毒性试验的通常动物豚鼠也常用于筛选平喘药、抗组胺药、抗结核药的药物的积极过敏和被动过敏试验研究。新西兰兔、兔皮肤对刺激物的反应靠近人，适于观察药物对皮肤的局部作用的成人雌兔在避孕药研究中常用的作用于心脏、血压、呼吸的药物、解热剂和热源检查眼用药物的药效学和药动学研究。猫、血压试验和止咳药的药效和机制的研究等犬适用于慢性试验，适用于新药的临床前毒性试验，犬和猫对呕吐反应敏感，常用于观察药物的呕吐和镇痛作用。 狗也是新药进行长期毒性

3、试验的普通动物猴子和黑猩猩、高级动物、接近人类。 常用于观察药物对行动的影响。 新药临床前的安全性评价也需要猴子。4.2我国按照微生物控制对实验动物进行等级分类一级动物(普通动物，CV ) :是实验动物中微生物控制要求最低的动物。 外观健康，未见异常，在开放系统内饲养繁殖。 空气没有被净化，动物本身所具有的微生物的状况不明确，要求没有引起人畜共同感染症和动物激烈传染病的病原体。例如，在市场购买的家鸽、猫等动物。二次动物(清洁动物，CL ) :在半屏障系统和屏障系统内饲养繁殖。 没有小鼠肝炎病毒等动物传染病病原体。 海外没有这个级别的动物。例如，实验用新西兰兔子和豚鼠等。三级动物，即无特定病原体

4、的动物(SPF ) :在屏障系统或系统内饲养繁殖、检测的特殊病原菌、无传染病的健康实验动物。 SPF级动物来源于无菌动物和剖腹产动物，饲养在屏障系统中，体内和环境中不存在病原性的微生物和寄生虫，是健康无病的动物。目前，大鼠和小鼠常用动物需要SPF级。四级动物(无菌动物，GF ) :在隔离系统内饲养繁殖。 体内外没有微生物和寄生虫。 无菌动物来源于无菌剖腹产，将孩子转移到绝对屏障系统隔离器中，人工饲养或无菌动物代乳饲养。一般来说，研究肿瘤药要用这个级别的动物。另一种是为了了解生物而在隔离系统内饲养，将人为指定的微生物投入无菌动物体内而形成的。 等级在三级和四级之间。5 .基本操作5.1注射器的使

5、用方法器材：注射器1 ml、2 ml、5 ml； 针尖： 4号、5号、6号。 一般的小鼠皮下、腹腔、肌肉注射用5.0-6号针，静脉注射用4.5号针或5号针，口服给药用12号针大鼠和兔子使用16号针。药品：生理盐水试验方法：安装针：选择适当数量的针，安装在针管管口上，拧紧，要求针尖斜面与针管刻度面一致。吸取药液：将针尖浸入药液中，左手拿着针管，右手拿起针芯，慢慢地吸取药液至所需量。排出气泡：将吸入药液的注射器垂直向上，首先拔出针芯，将针芯内的药液放入针管中，将针管内的空气集中在药液上，轻轻按压针芯，从针芯中排出空气直至药液溢出。 如果小气泡很难排出，可以吸入一点空气，使其与吸入了微量气泡的空气合

6、流，一起排出(注意：不要把针指向自己或别人，液体不碰到人)。拿着注射器：用右手拇指和中指拿着注射器(观察注射器刻度朝上注入的药液量)。 食指将固定在针和针的接头上的针放入后，用食指夹住针管，用大拇指按针芯注射药。用右手拇指和中指拿着注射器(观察注射器刻度朝上注入的药液量)。 无名指固定在针和针接头上，食指在针芯上注射药。注意事项：选择合适的注射器和针按注射针的时候要旋转90度针的斜面与针管的刻度面一致排出气泡注射器的针需要用食指或无名指固定连接处注射器用后要清洗，防止药液污染5.2常用动物的捕获和给药方法5.2.1性别识别雌性小鼠：肛门和生殖器的距离近，有阴道雄性小鼠肛门和生殖器的距离很远，有

7、睾丸。大鼠和新西兰兔的性别识别相同的小鼠。5.2.2动物标志5.2.3鼠标第一、捕捉法：用右手提起鼠尾，放在粗糙的东西(像鼠笼一样)上，向后拉，鼠想要用力抓粗糙的面向前逃走时，用左手的大拇指和中指抓住其两耳和头部的皮肤，用食指抓住头部的皮肤，将鼠的身体或者大拇指和食指控制右前肢和头部，剩下的各手指抓住腹部固定。第二，灌胃给药法：固定小鼠后，嘴朝上，脖子笔直，口腔和食道呈一条直线，右手拿着小鼠的胃注射针，从嘴角插入口腔内，沿上颚后壁轻轻插入食道内，如无插入阻力，动物安静，没有呼吸异常，嘴唇为钳子放针的长度是放胃的针的二分之一到三分之一。装胃的体积： 0.1-0.2 ml/10 g，每头最大量不超

8、过1.0 ml。第三，皮下注射：通常选择背部皮下注射，操作时用左手大拇指和食指轻轻提起背部皮肤，右手拿注射针水平刺入皮下，说明针尖左右摆动，针尖确实扎入皮下，注射药液。 拔针时转动针，用手捏住扎针的部分，防止药液泄漏。注射体积： 0.1-0.3 ml/10 g。第四、腹腔注射：左手捕捉动物，腹部朝上，右手拿注射器，针扎法和腹部成45度角，一般从左右下腹部扎。 为了不刺穿内脏，降低小鼠的头部，让脏器移动到横膈膜，以免刺穿肝脏和膀胱。 针刺入腹腔有空虚感时给药。注射体积： 0.2 ml/10 g，每只最大1.0 ml以下。5.2.4大鼠第一，灌胃：灌大鼠胃是最常见的给药方法之一。 装胃针可以从市场

9、购买，操作方法与小鼠的装胃方法相似，但由于大鼠体积大，抓大鼠的方法和小鼠不同。大鼠胃灌注在清醒状态下进行，不需要麻醉。 大鼠胃注射针的长度约为68 cm，直径约为1.2 mm。大鼠进胃时，右手拿胃注射器，左手大拇指与食中两根手指相对，抓住大鼠脖子皮肤，使大鼠头部、脖子和躯干成一条直线，无需固定大鼠尾巴，就可以实施进胃操作。 除此之外的操作都和鼠标一样。因为大鼠一般的胃注入量是0.5-1.0 ml/100g体重，所以一般的大鼠可以注入2 ml。第二、腹腔注射腹腔注射是常见的给药方式，特别是在麻醉时。 常见的麻醉方法都是麻醉药物腹腔注射。大鼠腹腔注射的方法与小鼠基本相同。大鼠腹腔注射可使用5 ml

10、注射器，配合5.57号针。腹腔注射时用右手拿注射器，用左手小指和无名指抓住大鼠尾，用另外3根手指抓住大鼠脖子，使大鼠头部朝下。 这样腹腔内的内脏器官自然地倒在胸部，防止扎注射器时损伤大肠和小肠等内脏器官。 插入针的动作很柔软，防止刺穿腹部器官。特别是对于体重小的大鼠，在腹腔内注射时，针可以从腹部皮下通过很小的距离，从腹部一侧放入针，通过腹部线后，从腹部的相反一侧进入腹腔内，注射后，慢慢地拔针，使针稍微旋转以防止漏液是最理想的。大鼠腹腔注射的给药容积一般为0.510 ml/100 g。5.2.5新西兰兔第一，耳静脉注射：耳外缘血管为静脉，中央血管为动脉。拔掉毛发可以清楚地看到血管。左手中指和无名

11、指放在耳朵下面，兔耳朵接触，拇指按压耳朵边缘部分，右手拿着注射器，针通过皮下沿着皮下稍微前进，刺入血管回拔针管有回血，同时注射时无抵抗或不发生局部皮肤白斑隆起现象，表明针可以注射到血管内。注射结束后，按住针眼，拔掉针，为了防止出血持续压迫数分钟。注射量通常在2.0 ml/kg以下。第二，灌胃给药：两个人要合作助手把兔子的身体夹在两腿之间，用左手握住双耳固定头部，用右手抓住两脚固定前身。手术人员在兔子的上下颚之间横置开口器，固定在舌头上，然后将导管穿过开口器中的小孔，沿着上颚壁向食道插入15-18 cm导管的外口端放在清水上，气泡不溢出表示已插入食道时，用注射器注入药液后，用少量清水冲洗导管。注

12、入完胃后，请先捏住导管的外口，拔掉导管，再取出开口器。剂量通常为10 ml/kg。5.3动物死刑方法5.3.1颈椎脱位法大、鼠最常用的死刑方法。 用大拇指和食指用力按住老鼠的头，用另一只手抓住老鼠的尾巴，稍微向后拉，使颈椎脱日，把脊髓和脑髓切开，动物就会死亡。5.3.2空气栓塞的死刑主要用于大动物的死刑，用注射器快速向静脉注入空气，可以使动物死亡。 空气一进入血管，确实会引起气体栓塞，但取决于侵入气体的量。 空气量小时，分散到肺泡毛细血管中，与血红蛋白结合。 或者分散在肺泡中，随着呼吸排出体外，不会造成损害。 但是，如果空气流入量多，比较快的话，心脏的搏动会搅拌空气和心腔内的血液，形成大量的气

13、泡，收缩时要注意不要排出肺动脉或堵塞，导致突然死亡。 一般的兔子和猫能放1020 ml毫升的空气。 狗能装70150 ml毫升的空气。5.3.3急性大出血法用粗针一次采集大量心脏血液，就能使动物死亡。 豚鼠和猴子等可以采用这种方法。 小鼠可以通过动静脉大量出血而死亡。 狗和猴子等在麻醉状态下暴露动物的颈动脉，两端用止血钳夹住，插入套管，放松靠近心的钳子，轻轻压迫胸部，尽量大量出血死亡。 狗也可以用股动脉放血法判处死刑。 硫喷妥钠2030 mg/kg静脉注射，狗马上睡觉，暴露大腿三角区，用刀子在大腿三角区横切开约10 cm，切断大腿动静脉全部，立即喷出血液，用湿纱布擦去大腿动脉切开部的血液和凝固

14、块，同时用自来水持续流血，流利地流过大腿动脉切开部5.3.4吸入麻醉致死法用乙醚吸入麻醉的方法处死。 大、老鼠在2030 s时陷入人的麻醉状态，在35 min时死亡。 采用该方法处死豚鼠时，肺和脑会发生小出血点，因此病理解剖时要注意。5.3.5注射麻醉法使用戊巴比妥在麻醉*麻醉中死亡。 豚鼠可以以其麻醉*麻醉量的3倍以上的量进行腹腔注射。 猫可以用本药麻醉量的23倍的药量进行静脉注射和腹腔内注射。 兔子可以以本药80100 ml/kg的给药量迅速注入耳缘静脉内。 狗可以用100毫克/公斤的本药静脉注射。5.3.6其他方法大、小鼠也可以用打击法、断头法、二氧化碳吸入法死亡。 具体的操作是，用右手抓住老鼠的尾巴，抬起动物，用力打老鼠的头，用动物的痉挛死亡，用小树的锤子用力打老鼠的头死亡。 用剪刀把老鼠的头砍掉，切断脑脊髓的同时