基因工程的基本操作程序教学PPT课件

1、.1，基因工程的基本操作步骤，2，抗虫棉的培养过程：3，基因工程的基本操作步骤，(1)目的基因的获取(2)，(3)将目的基因导入受体细胞(4)目的基因的检测和鉴定，基因表达载体的构建，4，1，目的基因的获取(1)从基因库中获取目标基因(2)利用PCR技术放大目标基因(3)用DNA合成器直接化学合成，主要是指编码蛋白质的结构基因，5，互补：原核细胞的基因结构，编码区下游，非编码区，编码区，和启动子，终止子，补充：真核细胞的基因结构，内含子，外显子，RNA聚合酶的初期结合部位，RNA聚合酶的最终结合部位，6，结构基因，外显子，内含子，转录，加工修饰，mRNA，蛋白质不能编码蛋白质的序列称为内含子，

2、从内含子：7，(1)基因库获取目标基因(序列未知)，1 .基因库，基因库中不直接保管该基因，而保存受体菌，菌中包含基因。 将含有某种生物不同基因的多个DNA片段导入受体菌群中进行贮藏，各个受体菌含有该生物的不同基因，称为基因库。8、基因组文库的构建模式图、9、部分基因文库的构建模式图、基因组文库和部分基因文库的比较、小、大、无、有、有、有、有、某些生物的部分基因、可、部分基因可、11、 外消旋酶催化，1 )外消旋，模板，2 )相补子链，以母链为模板进行碱基对(在DNA聚合酶催化下通过游离的脱氧核苷酸)，母链(旧链)子链(新链)，子代DNA:同时(边旋转边复制)，和补充： DNA复制过程：作用：

3、将单一脱氧核苷酸连接到链上(形成磷酸二酯键)、12、2 .利用PCR技术扩增目的基因，PCR技术操作过程，a、DNA改性(90-95) :双链DNA模板被热切断，_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 退火(可恢复性55-65) :系统温度降低，引物与DNA模板结合，局部_、c、拉伸

4、(70- 75) :通过Taq酶的作用，合成与模板互补的_。 氢键、单链DNA、双链、DNA链、d .反复a.b.c顺序：每次反复，目的基因都以_ _ _ _ _倍、一、14、PCR技术的操作过程、15、PCR技术的操作过程、PCR反应体系将目的基因放大为指数(2n )形式，16、PCR技术放大和dn 碱基互补原则四种脱氧核苷酸，模板，酶，ATP，四种脱氧核苷酸，模板，酶，引物，DNA在高温下变性解开，解开酶催化解开，半保留复制，解开的同时复制，半保留复制，全保留复制，体外复制，主要是核形成整个DNA分子，形成热稳定的DNA聚合酶、细胞内的DNA聚合酶、解开酶等，17、工艺：改性、退火、拉伸三

5、步曲、改性： 9095退火： 5560拉伸： 7075、18、 用DNA合成器人工合成的前提：基因小，核苷酸序列已知，蛋白质氨基酸序列，mRNA的核苷酸序列，基因的核苷酸序列，目的基因，化学合成，19，级总结，1，从基因库获得，2，PC 基因组文库：包含一种生物的所有基因，部分基因库：一种生物的部分基因，如： cDNA文库，总结：检索目标基因的方法，20，想法：为什么构建基因表达载体？ (1)使目的基因稳定存在于受体细胞中，并使其遗传给下一代；(2)使目的基因表达并发挥作用。二、构建表达载体，21、作为基因工程的表达载体，不能认为只要包含目的基因就能完成任务。 目的基因在表达载体中表达和发挥作

6、用，需要启动子、终止子、标记基因等其他控制因素。22，2 .基因表达载体的组成：它们具有什么作用？ 可以用a、目的基因、b、启动子、c、终止子、d、标记基因、23、启动子：标记基因：基因开头的特殊DNA片段，在RNA聚合酶识别和结合的部位转录基因基因末端的特殊DNA片段可以阻止mRNA的转录。 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，筛选出有目的基因的细胞。24，相同点：不同点：想法：载体和表达载体的不同点在于标记基因和复制原点。 表达载体在载体中增加了目的基因、启动子、终止子3种结构。 25、基因表达载体的构建过程、质粒、DNA分子、限制酶切、两个切口获得目标基因，用DNA连接酶连接，重组DNA分子

7、暴露相同的粘性末端，用DNA连接酶连接，26三，将目标基因导入受体细胞，(一)转化：目标基因进入_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _过程，保持受体细胞，稳定、表达，(二)方法，将目标基因导入植物细胞， 目的基因导入动物细胞，目的基因导入微生物细胞，农杆菌转化法，基因枪法，花粉管通道法显微注射法，感受细胞，27，1 .目的基因导入植物细胞，农杆菌转化法基因枪花粉管路法，28，(1)细胞容易感染双胞胎叶植物和裸子植物，很多单叶植物没有感染能力。29，转化过程：Ti质粒的目的基因，构建，表达载体，植物细胞，植物细胞染色DNA，新性状，农杆菌，30，基因枪法又称微弹撞击法，利

8、用压缩气体的动力，使金属粒子表面包围的表达载体dn (2)基因枪法适用于单子叶植物，(3)花粉通路法，植物花粉在柱头发芽后，花粉管必须通过花柱贯通胚胎。 花粉管路法是在植物授粉后，在花粉形成的花粉管不愈合前切断柱头，滴下DNA (包含目的基因)，使目的基因通过花粉管路进入受体细胞。 适用于被子植物，32，2 .将目的基因导入动物细胞，(1)方法：显微注射法(纯化基因表达载体，用显微镜注射到受精卵中)，为什么受精卵不是用体细胞，试着思考.33，(2)操作步骤：纯化包含目的基因的表达载体显微注射，移植到输卵管或子宫，受精卵发育，新性状动物，34，常用方法：常用菌：微生物作为受体细胞处理的原因：过程

9、：Ca2处理大肠菌，受体细胞和表达载体混合，受体细胞吸收DNA.目的基因导入微生物细胞，用Ca2处理大肠菌，繁殖大多数是单细胞，遗传物质比较少，35、受精卵体细胞、受精卵、细胞/个体、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管路法、显微注射技术、Ca2处理后制成受体细胞，总结：将目标基因导入受体细胞，36、四、目标基因的检测和鉴定、导入过程1、真正能摄取重组DNA分子的受体细胞很少。2、目的基因进入受体细胞后，能稳定地维持和表达吗？ 不一定需要检查。 、37、4、目的基因的检测和鉴定、检测目的基因是否插入的翻译鉴定：分子水平的个体生物学水平鉴定、38、转基因生物的DNA、探针、15N、14N、14N、(1

10、)检测目的基因是否插入的基因探针：放射性同位素等标记DNA分子、方法、DNA分子杂交技术(DNA和DNA )、改性、改性、1，分子方法，DNA和mRNA杂交技术，(2)目的基因是否转录了mRNA、探针、15N、15N，转基因生物的mrna 14n，1分子水平的检测，40，1分子水平的检测， (3)检测目的基因是否被翻译成蛋白质的方法抗原抗体杂交，Bt毒素蛋白，Bt毒素蛋白注射到小鼠体内，从小鼠血管中提取血液抵抗Bt毒素的抗体，抗体，蛋白质， PCR化学法从基因文库中总结出出现杂交带的脱分化、组织培养、41、(2)鉴定(个体生物学水平)、抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等、42、目的基因的表达和检测

11、、43，基因工程的基本操作步骤人工合成启动子、终结子、标记基因，对目的基因进行受体细胞受体细胞法(微生物)、农杆菌转化法(植物)、显微注射法(动物)的目的基因的检测和鉴定检测：插入、转录、有无翻译个体、44、教室练习、1、基因工程DNA连接酶连接粘性末端碱基对的b，限制酶用于目的基因的获得c，目的基因从载体导入受体细胞d，不使用人工合成目的基因的限制酶，a，45，教室练习2，获得下一个目的基因的方法是() 通过mRNA的逆转录从基因组文库中提取从受体细胞中提取PCR技术通过DNA转录人工地提取a .b .c .d .、d，2卡卡卡卡卡卡卡6 3，基因工程描述正确的是() a，限制酶是目的遗传通过重组质粒的形成，可以在细胞内完成c、质粒，可以作为载体d、蛋白质的结构向合成目的基因提供资料，d、47、授课练习、4、基因工程是在DNA分子水平上设计施工的。 在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补对的步骤包括： () a、目的基因b、目的基因与载体的结合c、目的基因导入受体细胞d、目的基因的检测和表达、c、【展开深化】目的基因导入受体细胞不需要碱基互补