基因工程的基本操作程序公开课PPT课件

1、1.2遗传工程的基本操作程序，1，获取目的基因，2，获取基因表达载体的构建，3，将目的基因引入受体细胞，4，检测和鉴定目的基因，1，获取目的基因，1。目的基因，根据人类需要编码蛋白质的基因，2。基因库P9，引入了很多包含某种生物的多种基因的DNA片段作为受体细菌，每种受体细菌都包含了这种生物的不同基因，这被称为基因库。物种，基因组库：一种生物的全部基因，部分基因库：一种生物的部分基因，如cDNA库，某种生物的全部DNA，限制酶，DNA片段，DNA片段和载体连接，重组DNA，基因组库，导入受体细菌，8，基因组DNA库和cDNA库比较，3。目的基因的获取方法，(1)从基因库中获取，(2)使用PCR

2、技术放大，(3)合成，根据有关目的基因的信息。例如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因，染色体上位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白等的特性，(1)从基因库中获取目的基因，(2)利用PCR技术扩增目的基因，(概念原则：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ Taq酶，PCR的基本原理，PCR反应条件PCR工艺PCR的特征，第一端，第二端，PCR的基本原理，PCR反应条件PCR工艺PCR的特征，18，过程：a，变性(90 95):双股DNA受热后_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

3、 _ _ 引物和单股DNA结合在一起，形成局部_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ ，氢键，单链DNA，双链，DNA链，方法：_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 热稳定DNA聚合酶，细胞内DNA聚合酶，(3)人工合成法：基因小，核苷酸序列已知的情况下，利用DNA合成器合成，化学合成法，反转录法，蛋白质，mRNA，DNA，DNA，根据已知的氨基酸序列，DNA合成法： b .同时让目的基因表达和操作。2.基因表达载体的组成：a

4、，目的基因，b，启动子，c，终止子，d，标记基因，质粒，目的基因，限制性酶，3。基因表达载体的构建过程，(1)为了显示切割，_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)使用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _切割头部基因，(3)在质粒的_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _中插入目的基因，以重组DNA分子，限制性酶，粘性末端，同种限制酶，27，3， 将目的基因引入受体细胞-_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

5、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 坚持_ _ _ _，表达，受体细胞，1，目的基因导入植物细胞，(1)亚基帕转基因，特征：a .双子叶植物和钋感染子项，不感染子叶植物，将b.Ti质粒的t-DNA转移到受体细胞，整合到染色体中。29，Ti质粒目的基因，构建，表达载体，植物细胞，植物细胞染色体DNA，新特性，农杆菌，(2)基因枪法-子叶植物，(3)花粉通道法，我国转基因抗虫棉就是这样的(2)将微生物用作受体细胞的原因：快速繁殖，多单细胞，遗传物质相对较少，(3)过程：Ca2进行大肠杆菌处理，易感细胞，表达载体和易

6、感细胞混合，易感细胞吸收DNA，4，目的基因的检测和鉴定，(分子水平，方法：DNA分子杂交，b过程：用放射性同位素等标记包含目标基因的DNA片段进行探针；如果显示探针和转基因生物的基因组杂交、杂交带，则表明目的基因插入到染色体DNA中。1.检测，基因探针通过结合分子杂交和目的基因，产生杂交区域，可以从下限基因组中揭示目的基因。(2)检测对象基因是否转录了mRNA方法：分子杂交法，过程：表明，利用胃探针和转基因生物的mRNA杂交，如果出现杂交带，对象基因转录了mRNA。38，(3)检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法：抗原抗体混合，提取，方法抗原抗体混合，Bt毒素蛋白质，Bt毒蛋白注入小鼠体内，从小鼠血管中对Bt毒素、40、2。鉴定(个体生物学水平)、确认昆虫抗性、确认疾病抵抗、确认活性等。41，目的基因表达和检测，确认昆虫抗性和确认抗病活性等，抗原抗体杂交法，DNA-RNA分子杂交法，DNA分子杂交法。42，非编码区，非编码区，编码区，编码区，埃克森，内含子，基因的结构，启动子，原核，真核，43，比较和思考原核细胞和真核细胞的基因结构，编码相同数量氨基酸的蛋白质，是原核细