Maldi-tof技术与质谱仪的使用

1、.,MALDI-TOF技术与质谱仪的使用,南开大学元素所 张森,.,MALDI技术,离子化技术：MALDI Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization MALDI技术的原理 样品与基质，在样品靶表面形成的共结晶薄膜 激光照射，基质吸收能量 基质把能量传递给样品分子，将电荷转移给样品，样品电离。,.,MALDI技术中基质的作用,基质的作用 把样品分子彼此分开(基质：样品=10，000：1)，削弱样品分子之间的相互作用。 基质吸收激光的能量，并将部分能量传递给样品。 帮助样品离子化。,.,常用基质及选择,.,Laser,Sample Target,De

2、tector,Clock,Time-of-Flight,Molecular Mass,TOF的基本原理,.,Enabling Life Science Tools Based on Mass SpectrometryTM,Ek = zqU Ek = 1/2mV2,V2 = 2qU z/m = 2qU / (m/z),.,MALDI TOF MS的构成,检测器1：线性模式,检测器2：反射模式,.,反射模式下TOF的分辨率高于线性模式,.,线性模式和反射模式,.,样品和标准品点靶,标准品的作用： 对仪器参数进行校准，使样品测试的质量准确度更高。 注意：样品和标准品，必须点靶方式一致，所选基质一样。

3、,.,内标法和外标法,内标法: 样品与标准品点在同一靶点。 优点：样品和标准点条件一致，质量准确度更高，质荷比可准确到0.02。 缺点：标准品干扰样品出峰。 外标法: 样品与标准品点在不同靶点。 优点：无标准品干扰 缺点：质量准确度低，质荷比准确到0.1。,.,MALDI常用点靶方法,干滴法（Dried Droplet） 样品和基质充分混合，点样样品靶上。 注意：以HCCA和DHB为基质的样品，一般用干滴法点靶 薄层法 先将基质点于靶上，带基质结晶后，再把样品溶液点于基质的层上。 注意：以HPA为基质的样品，都要采用薄层法。,.,点样方法： Dried Droplet,matrix,analy

4、te,sample solution,sample deposition,Analyte dispersed throughout matrix crystals,Enabling Life Science Tools Based on Mass SpectrometryTM,.,MALDI-TOF质谱仪的使用,标准品点靶；样品点靶； 进样品靶； 质谱测试和图谱保存：flexcontrol软件； 图谱读取和分析：flexanalysis软件,.,点靶注意事项,移液枪的使用 取不同试剂，需要更换一次性枪头。 点靶注意事项 防止基质污染，防止标准品污染，防止样品靶污染，防止试剂污染 防止样品靶跌落

5、 点靶时，枪头请勿接触样品靶（悬点） 点完靶，请在靶表相应位置标明样品名,.,进靶和退靶,点击仪器右侧面的绿色按钮（load and eject按钮）。 在flexControl软件里，点击carrier后面按钮,进退靶按钮,.,质谱测试和图谱保存,质谱测试的软件是：flexcontrol 打开软件 选择方法 校准仪器的参数（与ESI-MS（LCQ）差别） 扫描样品 保存数据 上传数据至大型仪器管理平台文件系统,.,打开桌面Flexcontrol软件,双击打开,flexcontrol,.,选择方法,选择方法,.,方法的选择,根据分子量大小选择相应的方法 方法路径：D:methodsflexco

6、ntrolmethodsusual method 一般样品正离子都能出峰；对于正离子模式不出峰的样品，改换为负离子模式的方法扫描。 更换方法时，对以前的方法不要保存。,.,选择方法,L: 线性模式 R: 反射模式 P: 正离子模式 N: 负离子模式 PepMix: 多肽混合物，适合范围700-4000 Da ProtMix: 蛋白混合物，适合范围5000 20000 Da ClinProt: 多肽/蛋白化合物，适合范围1000 20000Da 66kDa: 大分子蛋白，适合范围20000-100000 Da Proteomics_HPC: 高精度校正，适合范围700-4000 Da RP_lo

7、wmolecular_HPC高精度校准，适合范围100-1000Da,.,2. 反射模式；正离子；高精度；700-4000Da； 与RP_PepMix.par差别不大,1. 反射模式；正离子；700-4000Da,3. 线性模式；正离子；700-4000Da,4. 反射模式；负离子；700-4000Da,5. 线性模式；正离子；5000-20000Da,6. 线性模式；负离子；700-4000Da,7. 反射模式；正离子；100-1000,.,Flexcontrol的按钮,检测范围，可微调,扫描区,放大,表峰,显示单次扫描,显示叠加图,.,保存数据的按钮,.,校准仪器的参数,.,扫描标准品时，

8、出峰太弱，多叠加几次。 点击Calibrate，选中叠加图，点击自动校准（automatic assign），点击apply，即完成自动校正。 如果自动校准通过不了，进行手动校准。 注意：必须有三个以上的点匹配上，匹配点越多越好,.,手动校准,.,扫描样品和保存数据,找到样品点的位置 扫描样品，叠加并保存数据 注意：数据要保存到课题文件夹内，例如： 刘育课题组数据保存到D:dataLiuyu201106,.,在flexAnalysis打开,保存的路径,样品的名字,保存的是叠加图,FlexAnalysis方法，可不选择,.,数据的上传,找到所保存的数据文件 右键点击发送到压缩文件夹（zipped） 打开大型仪器管理系统网站（）文件系统，上传压缩后的数据文件夹。,.,.,MALDI质谱图解析,常见离子峰： 正电荷模式：加质子峰；加合碱金属峰（加Na+峰；加K+峰）;减e-峰 负电荷模式：加e-峰，加Cl- 多出现单电荷分子离子峰，双电荷和多电荷峰弱或几乎不出现。,.,MALDI-TOF对样品的要求,MALDI优点：耐受高浓度的盐、缓冲剂和其他非挥发性的成分。 两种杂质严重影响MALDI测试：