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文档简介
1、1,基 本 工 具,“分子手术刀” -限制性核酸内切酶,来源 作用 结果,“分子缝合针” -DNA连接酶,作用 分类,“分子运输车” -基因进入受体细胞的载体,常用的载体: -质粒 载体的条件 其他载体,1.1 基因工程的基本工具,1.2 基因工程的基本操作程序,目的基因的获取,从基因文库中获取,基因组文库 cDNA文库,人工合成,利用PCR技术扩增,原理 大致过程,基因表达载体的构建 (核心步骤),构建目的 构建零件及其作用,目的基因导入受体细胞,导入植物细胞方法,导入动物细胞方法:显微注射技术,导入微生物细胞方法,农杆菌转化法 其他方法,目的基因的检测与鉴定,分子水平的检验 个体生物学水平
2、的鉴定,1.3 基因工程的应用,一、植物基因工程 (一)抗虫转基因植物 1、抗虫转基因植物: 2、杀虫基因的种类: (二)抗病转基因植物 1、植物的病原微生物 2、抗病转基因植物 3、抗病基因 (三)抗逆转基因植物 1、抗逆基因 2、抗逆转基因植物: (四)利用转基因改良植物品质 1、优良基因: 2、改良作物:,二、动物基因工程的成果 1、提高动物生长速度 2、改善畜产品质量 3、生产药物 4、做器官移植供体 三、基因工程药物 四、基因治疗,预期蛋白质功能 设计 推测应有的 序列 找到对应的 序列。,根据人们对蛋白质 的特定需求,对蛋白质的 进行分子设计。,1.4 蛋白质工程的崛起,结构,预期
3、的蛋白质结构,氨基酸,脱氧核苷酸,功能,改造基因(基因 或基因 )。,原理,目的,途径,修饰,合成,离体的植物器官、组织或细胞,愈伤组织,根、芽,植物体,外植体,脱分化,植物激素: 细胞分裂素、生长素,再分化,2.1.1 植物组织培养过程,植物组织培养条件:,含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。,遮光,光照,原理:植物细胞的全能型,杂种植株,融合的原生质体AB,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,植物细胞的融合,植物组织培养,植物细胞A,原生质体B,原生质体A,杂种细胞AB,去 壁,去 壁,人 工 诱 导,方法?,促进融合的方法?,融合完成的 标志
4、,植物细胞B,2.1.1植物体细胞杂交技术,细胞融合的基础:,细胞膜的流动性,2.1.2 植物细胞工程的实际应用,繁殖植物的新途径 微型育种 作物脱毒 人工种子 育种新方法 单倍体育种 诱导突变体 细胞产物的工厂化生产,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,细胞悬浮液,10代细胞,传代培养,无限传代,单个细胞,加培养液,动物细胞培养过程,1.3 动物细胞培养条件,1、无菌、无毒的环境,对培养液和培养用具进行无菌处理; 在培养液中添加一定量的抗生素; 定期更换培养液;,2、营养,葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等,动物血清、血浆,3、温度和pH,温度36.50.5度,pH7.27.4,4、
5、气体环境,O2和CO2(95%空气和5% CO2 ),O2是细胞代谢所必需的。,CO2维持培养液的pH。,供体细胞(供核),细胞培养,体细胞,卵巢卵母细胞(M中期:供质),去核,无核卵母细胞,注入,细胞融合,重组细胞,构建重组胚胎,胚胎移植,代孕母体,生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛,归纳: 1.共分成两大阶段:核移植和胚胎移植 2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状 3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状,2.2.1 动物细胞核移植技术,动物细胞A,动物细胞B,动物细胞_,_ 法诱导,培养,物理 化学 生物,杂交细胞 (单核),有丝分裂
6、,膜融合 质融合,2.2.2 动物细胞融合,单克隆抗体,杂交细胞,杂交瘤细胞,骨髓瘤 细胞,分泌特异抗体 的杂交瘤细胞,杂交瘤细胞群,提取,已免疫的 B淋巴细胞,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,单克隆抗体的制备,既能大量繁殖 又能产生专一抗体,特异性强 灵敏度高 可大量制备,注射 抗原,精子和卵子的发生,精子的发生 卵子的发生,受精,受精前准备,准备阶段1:精子获能 准备阶段2:卵子的准备,受精阶段,胚胎发育,3.1 体内受精和早期胚胎发育,精子细胞变形的主要变化P62,细胞核 高尔基体 中心体 线粒体 细胞内其他物质,精子头的主要部分,头部的顶体,精子的尾,线粒体鞘,原生质滴,一、精子的
7、发生 P61,1、场所:,2、时期:,3、过程:分三个阶段,睾丸,初情期生殖机能衰退,初级精母细胞精细胞,精原细胞初级精母细胞,精细胞精子,卵原细胞,卵原细胞,初级卵母细胞,有丝分裂,染色体复制,次级卵母细胞 和第一极体,在_完成,排卵前后,合子和两个极体,在_ 完成 场所:_,受精过程中,输卵管,胎儿期(卵巢),初情期后,受精标志,3、形成过程, :,2、两次分裂的时间:,在雌性动物排卵前后完成。, :,在精子与卵子结合的过程完成。,3、卵子受精的标志:,当卵细胞膜和透明带的间隙观察到两个极体时,1、卵泡形成的时间:,胎儿时期,卵子发生的有关问题,三、受精 P63,受精前的准备阶段,准备阶段
8、1:精子获能 准备阶段2:卵子的准备,受精阶段,精子穿越放射冠和透明带,进入卵细胞膜,原核形成,融合,小结:受精阶段 P65,穿越放射冠:顶体反应,穿越透明带:透明带反应 (屏障1),进入卵细胞膜:卵细胞膜反应 (屏障2),雌雄原核形成,雌雄原核融合,受精卵,四、胚胎发育 P66,受精卵,卵裂期,桑椹胚,囊胚(含囊胚腔),原肠胚(含原肠腔),胎儿形成,促性腺激素,电刺激法,假阴道法,手握法,方法,动物细胞培养技术,获能溶液或专用的受精溶液,获能液,肝素或钙离子载体A23187溶液,培养法,化学诱导法,方法,动物体外受精技术,无菌、无毒;温度、pH;营养条件;气体环境等,动物胚胎移植技术,供体母牛,受体母牛,同期发情处理,超数排卵,供体公牛,配种,冲卵,质量检查、培养,胚胎移植,妊娠检查,分娩(胚胎移植的犊牛),胚胎移植的基本程序,外源激素剌激卵巢,促性腺激素,体内受精,胚胎,胚胎移植,P74,胚胎分割 (1)需要的主要仪器设备:实体显微镜和显微操作仪。 (2)对囊胚进行分割时要注意将 进行均等分割,否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育
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