中药制剂的检查

1、第三章 中药制剂的检查,楼一层,制剂通则检查 一般杂质检查 特殊杂质检查 微生物限度检查,通则检查之一,物理常数测定 相对密度 比重瓶和韦氏比重秤 检查样品的纯杂程度 熔点 凝点,】,比重瓶法,毛细管法测定熔点,显微熔点测定仪,第一节 中药制剂杂质检查,杂质：指能危害人体健康或影响药物质量的物质。 杂质的分类 一般杂质（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐） 特殊杂质 杂质来源 中药材原料中带入 生产制备过程中引入 贮存过程中引起的中药制剂自身理化性质的改变,第一节 中药制剂杂质检查,杂质的限量检查 杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量，通常用%或 ppm来表示。 杂质限量检查

2、及计算方法 取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶 液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应 结果，从而确定杂质限量是否超过规定,注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查 取本品0.4g，加2%硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用 小火炽灼使炭化，再在500600炽灼使完全灰化，放冷，加 盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查（中国药典2000版附录 F）。 如果标准砷溶液（1gAs/ml）取用量为2ml，杂质限量的计算如下：,第一节 中药制剂杂质检查,杂质的限量检查 不用标准溶液，直接在供试品溶液中加入试剂进行检查。,肉桂油中重金属检查 取肉桂油10ml，加水10

3、ml与盐酸1滴，振摇后，通硫化氢气使 饱和，水层与油层均不得变色。,第二节 一般杂质检查方法,重金属检查法 重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。 重金属检查法基本原理 CH3CSNH2+H2O CH3CONH2+H2S Pb2+H2SPbS+2H+,pH3.5,第二节 一般杂质检查方法 重金属检查法 检查方法,第一法 硫代乙酰胺法,第二法 炽灼残渣法,第三法 硫化钠法,第四法 微孔滤膜过滤法,第二节 一般杂质检查方法,重金属检查法 检查方法,第二节 一般杂质检查方法,重金属检查法 检查方法,第二节 一般杂质检查方法,重金属检查法 注意事项 方法灵敏度 适用于含铅量在1

4、0g-30g之间。标准铅液的用量以20g（相当于标准铅溶液2ml）为宜。 反应条件 硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2分钟。 有色供试液的处理 供试品在加硫代乙酰胺试液以前如带色，可用稀焦糖液或加常用的指示剂调整标准溶液，使两者颜色一致。 其他离子的干扰 Fe3+- 加抗坏血酸。 当使用盐酸超过1.0ml、氨试液超过2 ml，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。 铁盐供试品，可利用Fe3+在比重为1.103-1.105的盐酸（盐酸9ml与蒸馏水6ml的混合液）中成为

5、HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再将酸性溶液加氨试液使呈碱性后，用氰化钾作为微量铁盐的掩蔽剂，再加硫化钠试液测定。,第二节 一般杂质检查方法,重金属检查法 注意事项 前处理 需将药品灼烧破坏，使有机物分子中的重金属游离。灼烧时炽灼温度必须控制在500600。 其他 标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制 硫化钠试液应采用分析纯的硫化钠配制，贮存在棕色瓶中可保存12个月。 含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需过滤，可加入对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过，或者选用玻砂漏斗过滤。 如供试品本身能生成不溶性硫化物时，影响重金属的检查，可加入适当的掩蔽剂

6、。,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查：药品中微量砷（以As计算）的限量检查 古蔡氏法 二乙基二硫代氨基甲酸银法,过去,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 古蔡氏法 基本原理 AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黄色) （溴化汞试纸） AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3 (棕色) As(V)反应慢，须将As(V)还原成As(III),初生态的氢,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 古蔡氏法 AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+

7、H2O I2+Sn2+2I-+ Sn4+ 4I-+Zn2+ZnI42- Sn2+Zn Sn+Zn2+,促进反应向右进行,形成锌锡齐，有利于反应平稳的进行,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 古蔡氏法,古蔡氏法检查砷装置 A: 100ml标准磨口锥形瓶 B: 中空的标准磨口塞 C: 导气管(外径8.0mm，内径 6.0mm)，全长约180mm D/E :具孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞,HgBr2试纸,醋酸铅棉60mg (装管高度6-8cm),第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 古蔡氏法,标准砷斑的制备 A瓶：标准砷溶液(1g/ml )2ml +盐酸5ml+水21ml+KI试液5ml+酸

8、性SnCl2试液5滴，室温10min A瓶锌粒2g，接导气管C 25 -40水浴45min 检查法,2 一般杂质检查方法,砷盐检查 古蔡氏法 注意事项 方法灵敏度 约为0.75g(以As计)。2ml标准砷溶液（相当于2 gAs）所形成的砷斑色度适中，清晰，便于辨认。 酸度及各种试液用量 反应液的酸度相当于2mol/L的盐酸液。含KI浓度为2.5%，SnC12浓度为0.3%，加入锌粒以2g为宜。 反应温度和时间: 2540，时间为45分钟。 锌粒选用2 mm左右粒径(能通过一号筛)的为宜。 汞试纸的选择 选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化汞试纸一般宜新鲜制备。 采用醋酸铅棉花吸收除去H2

9、S。2000版药典规定称取60mg醋酸铅棉花，装管高度约80mm。,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 古蔡氏法 注意事项 中药制剂的前处理：常用酸破坏法、碱破坏法及直接炭化法等使有机砷游离出来，以氢氧化钙破坏法较为常用。 干扰物质：如硝酸、磷、锑化合物或硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、碘、氯、汞、银、镍、钴、铜、铁、铋等的干扰。 其他 A 所用仪器、试液等的影响 B 同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。 C 标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。 D 砷斑不稳定，反应应保持干燥及避光，并立即比较。 E 配制成的酸性氯化亚锡试液3个月

10、后不宜使用。,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 基本原理 既可做限量检查，又可做含量测定。,红色胶态银,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 检查方法,Ag-DDC 5ml,目视检测 分光光度计, =510,第二节 一般杂质检查方法,砷盐检查： 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 注意事项 有机碱液的选择 吡啶(DL=0.5 gAs/30ml) 三乙胺(0.75-7.5 g范围内, AC) 温度和时间：2540水浴，45min,第二节 一般杂质检查方法,铁盐检查法 硫氰酸盐法(CP) 原理 Fe

11、3+6SCN- Fe(SCN)63- 检查方法 供试品 标准铁溶液 方法灵敏度 20-50 g Fe3+ /50ml,H+,+H20至25ml, +稀HCl4ml, +(NH4)2S2O850mg, +H20至35ml, +30%NH4SCN3ml, +H20至50ml,第二节 一般杂质检查方法,铁盐检查法 巯基醋酸法（EP） 2Fe3+2HSCH2COOH 2Fe2+HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+ Fe2+2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 +2H+ Fe(SCH2COOH)2 +2OH- Fe(SCH2COO)22-+2H2O,第二节 一般杂质检查方法,硫酸盐

12、检查法 SO42- + Ba2+ BaSO4 (白色混悬液) （pH 1，25-30，+25%BaCl2) 适宜的浓度范围：100-500 g SO42- /50ml 氯化物检查法 Cl-+Ag+ AgCl (白色混悬液) （5ml HNO3/50ml，30-40，置暗处反应) 适宜的浓度范围：50-80 g Cl- /50ml,第二节 一般杂质检查方法,干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失 的重量，包括水分及其他挥发性成分。 检查方法 常压恒温干燥（烘干法）-受热较稳定的中药制剂 恒重：连续2次干燥后的重量差异不超过0.3mg 干燥剂干燥 受热易分解或挥发的供试品 硅胶，五氧化二磷，

13、硫酸等干燥剂 减压干燥熔点低、受热不稳定及较难赶除水分的供试品,第二节 一般杂质检查方法,水分测定法 烘干法不含或含少量挥发性成分的供试品 甲苯法-含挥发性成分的供试品 减压干燥-含挥发性成分的贵重药品 干燥剂：P2O5 气相色谱法-散剂、颗粒剂、丸剂、 片剂等各类型中药制剂中微量水分的测定 快速水分测定仪,甲苯法装置,第二节 一般杂质检查方法,炽灼残渣检查法 (硫酸灰分,EP) 700800 +硫酸 取样量由炽灼残渣限量决定,一般12 g 缓慢灼烧 将残渣留作重金属检查时, 500600 灰分测定 总灰分 500600 灰烬 +盐酸溶解 过滤 滤渣 灼烧 (+10% NH4NO3) 酸不溶性

14、灰分,有机物炭化，分解 非挥发性无机杂质硫酸盐,第三节 特殊杂质检查方法,特殊杂质：指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。,1.西洋参中掺有人参（西洋参中人参皂苷Rb1含量高；后者人参皂苷Rg1高） 2.乌头酯型生物碱的检查(毒性较大) （制川乌、制草乌、制附子药材含有乌头碱不得高于0.15% ；附子理中丸） 3.大黄流浸膏中土大黄苷的检查 （取本品适量，加甲醇2 ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10l，点于滤纸上，以45%乙醇 展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫色荧光。）,大黄素,土大黄苷,第四节 农药残

15、留量的检查,常用农药 有机氯类：艾氏剂、六六六、氯丹、DDT、狄氏剂等 有机磷类：三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷、内吸磷、敌敌畏、乐果等 苯氧羧酸类除草剂：2，4-D；2，4，5-T 氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威） 二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、代森锰、代森钠、福美双等 无机农药：磷化铝、砷酸钙、砷酸铅 植物性农药：烟叶和尼古丁；除虫菊花提取物和除虫菊酯（合成除虫菊酯）；毒鱼藤根和鱼藤根 其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、环氧乙烷、溴甲烷。,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 供试品的制备 残留农药的提取 提取溶剂：乙腈、丙酮 提取方法：索氏提取法和振荡提取法 样品纯化液-液分配+柱层析分离 检测

16、方法色谱分离法,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 检测方法 薄层色谱法 气相色谱法和液相色谱法,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 有机氯农药残留量检查 色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱SE-54(或DB-1701) 、电子捕获检测器，进样口温度：230，检测器温度：300，不分流进样，程序升温 对照品储备液 六六六（BHC）-，-，-，-BHC，滴滴涕（DDT）PP-DDE，-DDD，-DDT，OP-DDT及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90）分别制成每1ml约含4-5g的溶液 混合对照品储备液的制备对照品储备液0.5ml 10ml 混合对照品溶液的制备取混

17、合对照品储备液制成每1L含0g、1g、5g、10g、50g、100g、500g浓度系列。,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 有机氯农药残留量检查 供试品溶液制备供试品研细，称取适量（相当于药材2g），置100ml具塞锥形瓶中，+水20ml浸泡过夜，+丙酮40ml，称定，超声处理30min，放冷，用丙酮补足减失的重量，+氯化钠约6g及二氯甲烷30ml，称定，超声处理15min，用二氯甲烷补足减失的重量，静置使分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml，于40水浴减压浓缩至近干，加少量石油醚（6090）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，

18、用石油醚（60-90）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（6090）至5ml。+硫酸1ml，振摇1分钟，离心（3000转/分）10分钟。精密量取上清液2ml置具刻度的浓缩瓶（见图3-5）中，连接旋转蒸发器， 40下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml ，即得。 测定,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 有机磷农药残留量检查 色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱DB-17MS(或HP-5)、氮磷检测器，进样口温度：230，检测器温度：300，不分流进样，程序升温 对照品储备液 对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、

19、敌敌畏、乙酰甲胺磷，+用乙酸乙酯，制成每1ml约含100g的溶液 混合对照品储备液的制备对照品储备液1ml 20ml 混合对照品溶液的制备取混合对照品储备液制成每1ml含0.1g、0.5g、1g、2g、5g浓度系列。,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 有机磷农药残留量检查 供试品溶液制备供试品研细，称取适量（相当于药材5g），+无水硫酸钠5g，+乙酸乙酯50-100ml，冰浴超声处理3min，放置，取上层液滤过，药渣加乙酸乙酯30-50ml，冰浴超声处理3min，放置，滤过，合并滤液， 40减压浓缩至干，+乙酸乙酯5ml，使溶解。精密量取1ml，加到活性炭小柱（120-400目，0.

20、25g），置多功能真空样品处理器上，用正己烷-乙酸乙酯（1:1）5ml洗脱。洗脱液置氮吹仪上浓缩至近干。+乙酸乙酯1ml，溶解。 测定,第四节 农药残留量的检查,农药残留量的测定 有机磷农药残留量检查,1-敌敌畏 2-速灭磷 3-久效磷 4-甲拌磷 5-巴胺磷 6-二嗪农 7-乙嘧硫磷 8-甲基嘧啶硫磷 9-甲基对硫磷 10-稻瘟净 11-水胺硫磷 12-氧化喹硫磷 13-稻丰散 14-甲喹硫磷 15-克线磷 16-乙硫磷,十六种有机磷农药的气相色谱图,第五节 黄曲霉毒素的检查,黄曲霉毒素（aflatoxin） 极强的毒性和致癌性 在紫外线照射下，能发出荧光 耐热，在280时发生裂解 低浓度时

21、易受紫外线破坏，被氧化或遇碱被破坏 在水中溶解度低，易溶于油及氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂 测定方法 微柱色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、荧光分析法、免疫化学分析法等,第五节 黄曲霉毒素的检查,测定方法 微柱色谱法 （测定黄曲霉毒素的总量） 原理及分析方法 杂质 氧化铝吸附 aflatoxin 硅镁型吸附剂吸附 对照品溶液：每1ml含0.005g、0.01g、0.025g、0.05g、 黄曲霉毒素B1氯仿溶液 供试品溶液：氯仿提取 微柱色谱：上样1ml，+1ml 丙酮-氯仿（10:90）展开，365nm 波长紫外光下观察荧光 本法测定的是黄曲霉毒素的总量，灵敏度为10g/kg。 使用的试剂和

22、棉花中不得含有荧光物质。 无水硫酸钠、中性氧化铝、硅镁型吸附剂应为60-120目，使用前应灼烧脱水或活化。 实验完毕后，应及时消毒（安替福民溶液或5%次氯酸钠溶液）,中性氧化铝,硅镁型吸附剂,第五节 黄曲霉毒素的检查,测定方法 薄层色谱法 原理：黄曲霉毒素B1在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光 分析方法 黄曲霉毒素标准液的制备 每1ml含0.04g、0.2 g、0.5 g 、1g，溶剂为苯-乙腈(98:2) 样品处理 薄层层析（两次展开） 首先：无水乙醚, 展开12 cm 然后：氯仿-丙酮(92:8)，展开10 cm 本法最低检出量为0.0004g，灵敏度为5g/kg。 如样品中杂质干扰严

23、重，可采用双向展开。 层析硅胶可加入热盐酸(1:4)处理，使得斑点集中，且黄曲霉毒素B1荧光不易消失。,第五节 黄曲霉毒素的检查,测定方法 高效液相色谱法 原理：黄曲霉毒素经衍生后得到能产生强荧光的物质，可用 荧光检测器进行检测。 衍生的方法：柱前三氟乙酸（TFA）衍生，柱后碘衍生和柱后过溴化溴化吡啶（PBPB）衍生 分析方法 标准溶液的配制 黄曲霉毒素衍生标样的配制 样品提取、净化 衍生物的制备 色谱条件（甲醇-水的磷酸缓冲体系） 本法灵敏度为0.2g/kg,第五节 黄曲霉毒素的检查,测定方法 荧光分析法 黄曲霉毒素B1 -香豆素钠盐 （荧光） （无荧光） 激发波长360nm，发射波长450

24、nm 免疫化学分析法 放射免疫测定法法(BIA) 亲和免疫色谱法：借助毛细作用5-10分钟出结果 酶联免疫吸附法(ELISA),NaOH,HCl,第六节 微生物限度检查,细菌总数 霉菌总数 大肠杆菌数 其他,第六节 微生物限度检查,细菌总数 一、设备和材料 恒温培养箱、恒温水浴槽、试管、移液管、菌落计数器、放大镜、托盘天平、称量纸、培养皿。 二、培养基和试剂 营养琼脂培养基 0.9%生理盐水 三、检验程序 待检样 适当倍数的稀释液 选择2-3 个适当稀释度各1ml分别加入灭菌平皿内 每皿内加入适量营养琼脂 37 482小时 菌落计数报告,第六节 微生物限度检查,细菌总数 四、操作步骤 1按无菌

25、操作要求称取样品10g，连同100ml生理盐水加入灭菌三角瓶内，震荡，使成110的均匀供试液。 2用1ml 灭菌吸管吸取110的供试液 1ml，在离稀释剂液面上约1cm处，沿管壁注入装有9ml 灭菌的盐水管中，混匀即为1100的稀释液。 3另取1ml 灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释。如此每递增稀释一次，应换用一支1ml灭菌吸管并充分混匀，稀释至10-3 倍数或适当倍数备检。 4在做上述10倍递增稀释时，每稀释妥一稀释度，即可取1ml稀释液注入9厘米平皿内。（一般可根据对供试品污染情况的估计，从供试液起，选择2-3个适宜稀释度进行测定，每个稀释度各用2-3个平皿） 注：每次吸液时均应将待