食品中维生素的测定

1、维生素的作用维生素是维持人体正常生理功能所必需的一种天然有机化合物，主要用辅酶成分调节代谢作用。维生素一般在体内不能合成或合成的量少，不能充分满足身体的要求，必须经常作为食物供应。维生素的种类可以分为多种脂溶性维生素和水溶性维生素。脂溶性维生素有a、d、e、k等，水溶性维生素有维生素c和b。这些维生素中有a、d、c、e、B1、B2、B6、尼古丁酸等，是身体容易缺乏、营养更重要的维生素。维生素的检查方法检查方法中有紫外可见分光光度法、荧光分光光度法等，这两种是多种维生素的标准分析方法。敏感、快速、具有更好的选择性。另外，各种色谱以高分离效率在维生素分析中占有重要地位。1，维生素a测定三氯化锑分光

2、光度法维生素a测定方法除三氯化锑分光光度法外，还有紫外线分光光度法、荧光法、气相色谱及高效液相色谱等。(1)在原则氯仿溶液中，维生素a和三氯化锑相互作用，产生与溶液中维生素a含量成正比的蓝色可溶性复合物。这种蓝色物质可以在一定时间内用分光光度计测定(620nm波长的最大吸收棒)，与维生素a的含量和一定范围成正比，进行比色测定。一、测定脂溶性维生素，(2)试剂无水硫酸钠不含维生素A/无水醋酐无水无水乙醇不含醛三氯甲烷不含降解物250g/L三氯甲烷溶液1:氢氧化钾溶液(50%)0使用1 ml三氯甲烷和标准系列液体1 ml，分别添加1滴醋酐，形成标准比色法组。除了620nm波长外，三氯甲烷还将吸光度

3、控制到0，在将标准比色群依次移动到光路之前，快速添加9 ml三氯化锑-三氯甲烷溶液。在6s内测量吸光度并绘制标准图形。(3)仪器和设备分光光度计回流冷凝装置，皂化：将维生素a含量低的样品(减少脂溶性物质的干扰，但时间长，维生素a容易丢失)1，皂化：0.55克的样品放入三角瓶中，加入10毫升氢氧化钾和20 40毫升乙醇，在电光板中回流，直到30分钟皂化完全完成。2，提取：将皂化瓶内的混合物移动到分液漏斗，30毫升洗涤皂化瓶，将清洗液整合到分液漏斗中。振动，呼吸良好后，水层进入第二个分液漏斗。皂化瓶用约30毫升乙醚冲洗两次，乳液倒入第二个分液漏斗。摇晃时，安静地分层，水层放入三角瓶，以太层与第一个

4、分液漏斗合并。重复，直到水基液体中没有维生素a。样品通过在1比色管中添加10mL三氯甲烷，将1滴醋酐作为坯料添加来测定。其他比色管中添加1毫升三氯甲烷，其他比色管中分别添加1毫升样品溶液和1滴醋酐。下一步与标准曲线的准备相同。3，洗：用大约30毫升的水放在第一个馏分漏斗里，摇晃，静置一会儿，去除水层，将15 20毫升0.5毫升/L氢氧化钾放在馏分漏斗里，轻轻摇晃后，扔掉底部碱液，去除尿素可溶酸肥皂。每次清洗约30毫升的水，直到清洗液和酚酞指示剂无色为止。尿素层液体静置10-20min，小心地释放析出的水。4，浓度：将乙醚层液体经无水硫酸钠过滤到三角瓶中，然后用大约25毫升乙醚冲洗，将粉液漏斗和

5、硫酸钠合并到塞拉姆瓶中。在水浴中蒸馏回收尿素。去除，用真空泵干燥，立即添加一定量的三氯甲烷，将溶液中维生素a的含量放在适当的浓度范围内，直到剩下5.l为止。粉碎方法：适合于每样品维生素a含量大于510g样品的测定(简单步骤，结果正确)1，研磨：取25g样品，放入具有35倍样品质量的无水硫酸钠钵中，样品中的水分完全吸收均匀化。2、提取：小心地将全部均匀化样品放在有盖的三角形瓶子里，准确地放入50 100毫升尿素，用力挤压盖子2分钟，使样品中的维生素a溶解在尿素中，自我净化(或离心净化)。3，富集：清除尿素液2 5毫升，放入比色管，在70 80 的水中粉碎，立即添加1毫升三氯甲烷溶解残渣。(5)结

6、果计算X -样本的维生素a含量，mg/100g(如果是国际单位，则相当于每个国际单位的0.3 g维生素a)。C -样品中维生素a的含量，g/ml；M -样品质量，g；V -萃取后三氯甲烷的定量体积，ml；每100 - 100g样品。(a)维生素c的测定维生素c是卡夫格利山，对坏血病的抗作用，又称为抗坏血酸。新鲜水果和蔬菜，尤其是枣、辣椒、苦瓜、猕猴桃、柑橘等食品的含量特别丰富。方法：测定维生素c的常用方法包括靛酚滴定法、苯基肼比色法、荧光法、高效液相色谱法等。荧光法，介绍2，4-二硝基苯基肼分光光度法。1，荧光法(1)的原理：样品中的另一个原型抗坏血酸，通过活性炭氧化脱氢抗坏血酸后，与邻苯二酚

7、反应，生成荧光喹诺酮沙林，其荧光强度在一定条件下与抗坏血酸浓度成正比，测定食品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸的总量。第二，水溶性维生素的测定，(2)试剂：部分磷酸-冰醋酸溶液：服用15g部分磷酸，添加40mL冰醋酸，稀释水，放入500mL过滤，保存在冰箱里；硫酸：0.15毫升/L 部分磷酸-乙酸-硫酸溶液：取15g部分磷酸，加入40毫升冰醋酸，用0.015毫升-1硫酸500毫升；用稀释。醋酸钠溶液：500克醋酸钠溶出，稀释为1l。硼酸-乙酸钠溶液：取硼酸9g，加入35毫升醋酸钠溶液，用水1000毫升；用稀释。邻苯基二胺溶液：20毫克邻苯二甲酸酯溶于100毫升水；抗坏血酸标准溶液：准确地说，0.500

8、克抗坏血酸溶于偏磷酸-冰醋酸溶液，从500毫升容量的瓶子中摄取上述溶液5毫升，用偏磷酸-冰醋酸溶液固定容量达50m l。抗坏血酸标准使用液：100g/mLL酚蓝指示剂(麝香草酚蓝):变色范围pH1.2(红色) 2.8(黄色)；活性炭：在50g活性炭中放入250mL10%的盐酸，用沸水加热，减压过滤，用蒸馏水冲洗活性炭，在110 120 干燥，直到检查滤液中的生铁离子。(3)仪器：具有350nm和430nm波长的荧光分光光度计或荧光仪；捣机器。(4)程序：样品准备：加入100克新鲜样品，100毫升偏磷酸-乙酸溶液，倒入捣碎的机器中均匀，然后取少量样品，加入一滴皮西兰花蓝色，显示红色(pH=1.2

9、)，部分磷酸-冰醋酸溶液为100毫升；用固定。如果看到黄色(pH=2.8)，磷酸-冰醋酸-硫酸溶液被少量过滤到100毫升。测定：氧化处理：将上述过滤器和抗坏血酸基准使用液分别以100毫升放入三角瓶，摇晃1 2g活性炭1 2分钟过滤。必须测定样品氧化液和标准氧化液。2瓶100毫升标准氧化液，2瓶100毫升，2瓶100毫升，2瓶100毫升样品氧化液，“样品”和“样品空白”分别在“标准空白”和“样品空白”中5毫升硼在“样品”和“标准”中分别加入5毫升/L乙酸钠溶液，用水稀释至100毫升，即可获得“样品”溶液和“标准”溶液，初步。标准曲线准备：将上述“标准”溶液(抗坏血酸含量10g/mL)0.5，1.

10、0，1.5和2.0mL标准系列分别放入10mL盖试管，补充2.0mL水。“标准毛坯”溶液、“样品毛坯”溶液和中间“样品”溶液分别以2mL放在10mL盖子试管中。在暗室中，将5mL邻苯二胺溶液迅速放入每位客人中，振动混合，在室温下反应35min，刺激光的波长338nm，释放光的波长420nm，测量荧光强度。标准系列荧光强度分别为标准空白荧光强度减去纵坐标，相应的抗坏血酸含量为横坐标，绘制标准曲线或进行相关计算，相应的线性回归方程用于计算。(5)结果计算：格式X -样品的抗坏血酸和脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g；按C -标准曲线计算，或按回归方程计算， g/ml m -样本的质量，g；v荧光反

11、应中使用的样品体积，ml；F -样品溶液的稀释倍数。(1)总抗坏血酸还通过原型、脱氢和二氧化硅氧烷、活性炭脱氢抗坏血酸的标本和2，4-二硝基苯基肼作用产生红色脑容量，并根据硫酸溶液的含量，按总抗坏血酸含量比例进行比色定量。2，2，4-二硝基苯基肼分光光度法，(2)试剂本实验物为蒸馏水。试剂的纯度都是分析纯度。 4.5mol/L硫酸：在700mL水中小心添加250mL硫酸(1.84)，冷却后用水稀释1000mL。 85%硫酸：在100毫升水中小心添加90毫升硫酸(1.84)。 2，4二硝基苯基肼溶液2%: 2g 2，4二硝基苯基肼在100mL 4.5mol/L硫酸中溶解并过滤。不用的时候要放在冰

12、箱里，每次使用前都要过滤。草酸溶液2%:将20g草酸(H2C2O4)溶于700毫升水，稀释为1000毫升。将草酸溶液1%:500毫升2%草酸溶液稀释为1000毫升。在硫脲溶液1%: 500mL 1%草酸溶液中溶解5g硫脲。硫脲溶液2%:10g硫脲溶于500mL 1%草酸溶液。 1mol/L盐酸：取100mL盐酸放入水中，稀释为1200mL。抗坏血酸标准溶液：在100毫升1%草酸中溶解100毫克纯抗坏血酸，相当于每毫升1毫克抗坏血酸。活性炭：将100g活性炭添加到750mL1mol/L盐酸中，回流1 2h，过滤，用水冲洗多次，然后放入滤液中至生铁离子(Fe3)110烤箱干燥。铁离子测试方法：使用

13、普鲁士蓝反应。将2% ferricyanide钾和1%盐酸混合到同一量，使上述清洗过滤器脱落，有铁离子时产生蓝色沉淀。(3)仪器设备孵化器：370.5；可见-紫外分光光度计；捣机器。(4)工作步骤准备样品：a，准备新鲜样品：将100g新鲜样品和100g 2%草酸溶液倒入捣碎机中均匀，将10 40g均匀化(包括1 2mg抗坏血酸)倒入100mL容量瓶，用1%草酸溶液稀释，搅拌在标度上b，准备干燥样品：将1 4g干燥样品(包括1 2m ascorbic)放入油碗中，将1%草酸溶液均质研磨，倒入100毫升容量瓶，用1%草酸溶液稀释，搅拌在刻度上。过滤上面的滤液，准备滤液。不容易过滤的样品可以沉淀在离心机上，然后倒上清液过滤，过滤，备用。氧化处理：取25mL上述液，加入2g活性炭，振动过滤1分钟后，丢弃前几毫升滤液。取10毫升氧化萃取物，加入10mL2%硫脲溶液，搅拌均匀。标准曲线绘制：a，加2g活性炭在50mL标准溶液中摇晃1 min进行过滤。b，将10mL滤液放入500mL容量瓶中，加入5.0g硫脲，用1%草酸溶液刻度稀释，抗坏血酸浓度20g/mL。将c、5毫升、10毫升、20毫升、25毫升、40毫升、50毫升、60毫升稀释剂分别放入7个100毫升容量瓶内，用1%硫脲溶液稀释，最终稀释液中抗坏