临床生物化学课件模板-042(共95)

1、临床生物化学课件模板- 42，临床生物化学 :二，采样时间，二，采样时间：TDM工作中的采样时间对其测量结果的临床价值有很大影响，是开展TDM工作必须考虑的基本问题。 根据TDM的目的和患者的具体情况，应用本章第二节介绍的药代动力学理论，应根据以下原则确定采样时间。 (1)为了计算个体的药动学模型和参考，只能在两点确定唯一的直线，这种情况下，血药浓度测定的误差、采样时间是否合适对药动学参数有明显的影响。临床生物化学 :二、采样时间、二、采样时间：血管外用药和多室模型馀数法求药代动力学参数时，假设时间t足够大，解相方程式的计算可以不考虑吸收相和分布相的影响。 因此，采样时间的选定应遵循以下两个原

2、则：在与血药浓度随时间变化有关的指数方程式中，各指数项的采样必须少于3点，即，各相的直线方程式的确定至少在3点以上，另外，在药时曲线中，在转折点附近至少为了更准确地判明转折点去除相采样时间尽可能长，时间宽度至少超过了两个半寿命。临床生物化学 :二、采样时间、二、采样时间：在实际工作中，可以根据上述原则，结合与药物有关的集体药代动力学模型和参数资料，具体决定采样时间。 理想情况下，一次用药就可以连续完成所有样品。 如果条件不被认可，则多药给药后的分次抽样累积法，也就是多药给药时，可以参考小组资料，推定达到稳定状态后，分别给药后在不同的时间进行抽样。 如果在采样期间内各药代动力学参数不变化，将每次

3、给药前的血中浓度(Css)min视为零，则可以将这些点累积，并视为在一次给药间隔时间内的不同时间进行处理。 临床生物化学、采样时间、2、采样时间：此时，每次采样时间的选定按照上述原则进行。 但是，本方法不可靠，特别是排除半寿命比给药间隔近的人的话，误差会变大。 (二)药品监测、调整方案应在达到稳定浓度后进行采样。 定速静脉滴注时，稳定血药的浓缩几乎维持在一定的水平，所以在达到稳定后，随时可以进行取样测定。 多药间隔给药时，稳态血药浓度在一定范围内变动，为了测定峰值浓度还是谷浓度，应根据临床的需要决定。 临床生物化学 :二，采样时间，二，采样时间： 4444444444444444航空航空航空在

4、此情况下，如果患者的个人药代动力学参数已知，请在一个给药间隔内的到达时间(tp )和下一次给药前，分别采血、临床生物化学 :二、采样时间、二、采样时间：双室模型药物(Css)max必须是去除相开始段。 如果参照患者个人药动学参数不明，只参考组资料制定的药品使用方案，大众资料的平均到达峰值时间tp不一定代表具体的患者的tp。 但是，无论如何，任何药物、任何身体都会每次给药(Css)min，因此，在这种情况下，最好仅在给药前对(Css)min进行采样测定，根据(Css)min和有效血中浓度范围，特别是下限的关系来调整给药量。临床生物化学 :二、采样时间、二、采样时间： 22222222222222

5、652若不知道个体的tp，则分别在与集团tp平均值邻接前后的时间进行采样测定，血中浓度是否接近最小中毒浓度(三)急性药物中毒的诊断和处理应前后及时采样测定，后者根据临床需要，必要时采样，监测急救效果。在临床生物化学 :三、样品预处理、三、样品预处理：TDM工作中，除了可以用少数方法将收集的样品直接应用于测量外，还经常进行必要的预处理。 预处理的目的是以适当的方法尽量减少干扰成分，浓缩纯化待测物质，提高检测的灵敏度和特异性，减少对机器的损害，而不破坏待测药物的化学结构。 预处理包括脱蛋白、提取和化学诱导化。 (1)脱蛋白TDM常用的血清(浆)、唾液和尿等含有或少量蛋白质，妨碍多种测定方法，造成机

6、器的污染损害。临床生物化学 :三、样品预处理、三、样品预处理：脱蛋白的方法有沉淀离心法、色谱法、超滤法和速度离心法等。 其中沉淀离心法最简便快捷，且可根据提取要求选择合适的酸、碱和有机溶剂，与提取同步进行，所以最好选择。 药物与血浆蛋白质的结合多由离子键、氢键、VanderWaals引力等弱力形成。 蛋白质变性沉淀同时破坏该结合并释放药物，因此用沉淀离心法去除了蛋白质的体液标本，最后测定的药物浓度是同时包含游离药物和蛋白质结合的药物的总浓度。临床生物化学 :三、样品预处理、三、样品预处理：显然，当需要单独测定游离药物浓度时，不能采用该方法，而应采用温和复杂费时间的色谱、超滤法或速度离心法。 可

7、以去除蛋白质，不会释放出结合蛋白质的药。 (二)提取除免疫化学法外，还必须提取TDM中使用的多种检测方法，以尽可能选择性地浓缩测定成分，提高检测灵敏度，改善检测方法的特异性，减少干扰。 临床生物化学 :三、样品预处理、三、样品预处理：提取方法分为液-液提取和液-固提取两种。 液-液萃取多为有机化合物，其中弱酸、弱碱较多。 在pH不同的溶液中，会发生程度不同的解离。 因此，选择对测定物的溶解度高，即使不与使用的标本混合也不乳化的有机溶剂，根据测定物的酸碱性和pKa、氧化或碱性样品，使测定物以尽可能高的脂溶性分子状态存在，主要分配到有机溶剂中。临床生物化学、样本预处理、三、样本预处理：在此条件下可

8、以排除高极性的噪声成分。 通过离心分离有机相和水相(样品)，可以达到萃取的目的。 必要时，可以根据上述原理将待测成分再提到pH的适当水相中，进一步排除高脂溶性的干扰物质。 这种方法被称为液-液提取，因为样品和提取介质都是液相的。 液固提取也称为固相柱提取，是近年来发展起来的提取方法。 临床生物化学 :三，样品预处理，三，样品预处理：可以根据待测物体的理化性质选择合适的常压短柱，TDM中常用的是疏水填充柱。 目标标本(多进行脱蛋白质处理)通过该柱后，用适当强度的溶剂洗提，选择性地收集含有目标成分的洗提液部分，可以达到理想的提取目的。 也可以用强度不同的溶剂阶段性地溶出，仅收集溶出的测定对象成分。

9、 此种提取柱已经有几种商品化生产，可供选择。 临床生物化学 :三、样品预处理、三、样品预处理：本方法比液-液提取麻烦，但具有回收率和提取特异性高的优点。 (三)化学衍生化反应用分光法和色谱法测定药物时，可以根据测定对象物的化学结构和测定方法的要求，通过化学衍生化反应特异地导入发色(可见光分光法)、发光(紫外、荧光、磷光)基，提高测定的灵敏度和特异性。 气相色谱法时，对待测物进行甲硅烷化、烷基化、卤化、酰化等，提高待测物的热稳定性和挥发性，改善分离效果，适用于特殊的检测器。临床生物化学 :三、样品预处理、三、样品预处理：要用HPLC柱前诱导分离测定手性异构体药物，需要在对象物中引入手性拆分基。

10、临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：本质上药物为化学物质，其测定方法均为临床化学常用技术。 但是，体液中的药物多以g/ml或ng/ml水平存在，其检查不仅受到同时存在的多种结构类似的内源性物质的干扰，也受到与原型药只有很小差异的代谢物质的干扰。 部分药物的TDM除原型药外，还需要同时检查具有药理活性的代谢物。 另一方面，药物的有效浓度范围和中毒水平，结合很多临床观察确定，在任何实验室建立的测定方法都需要较高的比较性。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：以下仅结合药物测定的特殊要求，对常用临床化学技术进行评价介绍。 (1)

11、分光法的很多药物和代谢物本身在紫外光区域存在吸收峰值，如果一部分药物和代谢物被激发，其本身就能发出荧光，另外，还有能通过分光法检测特异的显色反应的药物。 但是，不论可见光分光光度法、紫外光度法、荧光光度法，用于体液中的药物检查时，存在灵敏度低、特异性差的缺点，特别容易被代谢物妨碍。临床生物化学 :采用第六节药物浓度测定常用技术、第六节药物浓度测定常用技术：提取、二波长、示差、导数分光光度法等试图提高灵敏度和特异性，但根本无法克服上述缺点。 但是，光谱法操作简单，必要的仪器配备在一般的临床实验室，检测成本低，容易普及。 血药浓度水平高，用适当的方法改良光谱法满足临床需求，成为阿司匹林、对乙酰氨基

12、酚、氨茶碱、苯内钠、苯巴比妥钠等目前仍可采用的方法。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：火焰辐射光谱法和原子吸收光谱法特异性和灵敏度高，操作简便，但只能用于体内少量存在的含金属离子的药物。 在TDM中可以用于锂盐、铂盐的检测。 (二)色谱也称色谱。 色谱作用分离样品中理化性质不同的成分，配合适当的检测器可以同时进行定性和定量的工作。 特异性高，能同时检测同一样品中的不同成分，是色谱的共同优点，在TDM中尤其有意义。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：薄层色谱(TLC )对定量点样品技术进行了改进，使用扫描定量，但其灵敏

13、度和再现性还比其他色谱低，除用于毒物检测外，在TDM工作中应用得很少由于60年代末期成熟的气相色谱(GC )和高效液相色谱(HPLC )相继发展，实现了高效的色谱分离和检测，可以用微机控制色谱条件、程序和数据处理，其特异性、灵敏度和再现性临床生物化学 :第六节常用药物浓度测定技术，第六节常用药物浓度测定技术：采用内标本法定量，可以消除部分操作误差，提高检测结果的可靠性。 HPLC与GC相比，由于不需要将样品高温气化，所以一般不进行衍生化处理，另一方面，HPLC的固定相的种类多，流动相通过改变其构成成分和比例进一步变化。 两者适当组合，可分离测定大多数有机化合物药物。 实际上，PS和PS等先进可

14、靠的检测方法的应用促进了TDM的形成和发展。临床生物化学 :第六节常用药物浓度检测技术，第六节常用药物浓度检测技术：特别是HPLC已成为TDM的重要检测技术，常被用作评价其他方法的参考方法。 当然，GC和HPLC一般要求样品预处理，两种方法使用的设备昂贵而难以普及。 但是，从发展角度来看，HPLC仍然是国内TDM的主要分析方法。 近年来发展起来的GC质谱、HPLC-质谱的在线检测，大大提高了这种分析手段的性能。 临床生物化学 :第6节药物浓度测定常用技术，第6节药物浓度测定常用技术：(3)免疫化学法很多药物由于是半抗原或抗原，会引起过敏反应。 如果能调制出与这些药物相对应的特异性抗体，就能根据

15、抗原抗体反应的特异性，用免疫化学法检测出这些药物。 TDM应用的免疫化学法一般采用竞争免疫分析，定量添加的少量特异抗体和标本中的相应抗原和半抗原性药物与定量添加的标记药物之间发生竞争结合，测定标记药物和抗体结合的抑制程度，并与同样处理的标准管进行比较，可以定量样品中的药物。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：免疫化学法灵敏度极高，多达到ng至pg检测水平，能满足所有药物TDM要求的该方法所需标本量少，一般无需预处理，操作简单，商品化试剂盒这些都是免疫化学法的优点。 但是，TDM中免疫法存在的主要问题是特异性容易受到干扰。 干扰因素除来源于内源性物质外，都是

16、抗原性决定基没有变化的被检测药物的代谢，或具有相同抗原性的其他药物和代谢物。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：如强心药地高辛、地高辛代谢物地高辛可与地高辛抗体结合。 很明显，在体内代谢几乎没有变化而原型排泄的药物，对代谢物的干涉很少，特别适用于庆大霉素等氨基糖苷类抗生素的免疫法检查。 当然，如果不具备完全或半抗原性的药物，制造出特异的抗体，就不能用免疫化学法进行TDM。 但总的来说，免疫化学方法的上述优点是TDM检测技术发展的主要方向。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：免疫化学法根据标记物的性质，可分为放射免疫法、

17、荧光免疫法和酶免疫法三种。 根据测定中是否分离与抗体结合的标记物，可分为多相(需要分离)和均匀相(不分离)免疫分析法两种。 放射免疫法存在放射性污染，为多相系统，分离结合和未结合的标记物操作复杂，影响因素多，分离效果直接影响测定结果，但灵敏度高，标记技术比较成熟，国内生产的TDM试剂盒多。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：荧光免疫法根据反应系统和定量方法不同，还可以分为几类。 与放射免疫法相比，荧光免疫法多无放射性污染，操作简单，容易普及。 国外生产的TDM试剂盒，相当一部分属于这一类，还由TDM荧光偏振光免疫分析装置生产。 酶免疫分析法是目前国外TDM免疫分析中最常用的方法，特别是同质酶免疫分析法。 临床生物化学 :第六节药物浓度测定常用技术，第六节药物浓度测定常用技术：本法除了具有荧光免疫法的优点之外，还能选择合适的标记酶，实现目前广泛普及的多种自动分析仪的自动化操作，有利于其普及。特别是近年来，在TDM的酶免疫分析中，应用酶偶联反应原理，用辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD )标记药物，使葡萄糖氧化酶蛋白、偶联辅助酶过氧化物酶及基质和显色剂4 -氯1 -萘酚固化为薄膜临床生物化学 :第六节药