微生物的实验室培养课件

1、主题1:微生物的实验室培养；主题2:微生物的培养和应用；五种微生物是什么：病毒、细菌、放线菌、真菌、原生动物？特点：它们的结构非常简单，而且大多数都很小。通常用光学显微镜或电子显微镜可以看到它们，有些甚至没有细胞结构。此外，身体通常不含叶绿素。进行光合作用是不可能的。莫内拉王国、原生动物、真菌和病毒。细菌细胞微小而透明，通常用合适的染料染色后用显微镜观察。图1-1三种典型的细菌形式：球菌、芽孢杆菌、弧菌、和细菌细胞有鞭毛、真菌(纤维)毛、囊、细胞壁、细胞膜、细胞质和液泡、储存颗粒、核质等。从外向内。细菌的结构，图1-3细菌的结构，*细胞壁，结构特征：坚韧而有弹性的细胞壁有什么功能？(1)固定细

2、胞形状；保护细胞免受外部损伤；阻止大分子物质进入细胞；使细胞致病并对噬菌体敏感。伤寒杆菌的细胞壁含有毒素和孢子。在某些条件下，一些细菌在细胞中形成一个叫做孢子的椭圆形休眠体。孢子壁很厚，对干旱、低温和高温等恶劣环境有很强的抵抗力。例如，一些细菌孢子在沸腾3小时后死亡。孢子小而轻，可以随风散开。当环境适宜时(例如，温度和湿度适宜)，孢子可以再次萌发形成细菌。菌落：当一个或几个细菌在固体培养基中繁殖时，可以形成具有一定形态和结构的亚细胞群体，称为菌落。菌落是鉴定菌株的重要依据。菌落，细菌菌落特征因物种而异，放线菌，1。结构：单细胞原核分枝菌丝(基质菌丝、气生菌丝)、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、

3、红霉素、庆大霉素，微生物中已发现数千种抗生素，其中三分之二是由放线菌产生的，使用：病毒结构，病毒，非典2。病毒增殖：真菌，如图所示，在电子显微镜下酵母的形态结构，酵母和霉菌，青霉菌，繁殖，垂直菌丝营养菌丝，腐生生命，孢子繁殖，和细菌的营养类型。根据细菌使用的不同能量和碳源，细菌可分为两大营养类型。自养生物、异养生物、腐生生物、寄生虫、大部分病原体，了解培养基的基本知识，开展无菌技术操作，开展微生物培养。1.课题目的：掌握培养基制备、高压蒸汽灭菌、平板划线等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功培养微生物。无菌技术操作。2.本课题的重点和难点：3 .技能目标：1。基础知识：1。培养基(培养

4、液)是通过人工方法制备的混合营养液，专门用于微生物的生长和繁殖。(1)根据物理状态：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中，固体培养基用于菌株分离和菌落鉴定。(2)根据其功能，可分为选择介质和识别介质。(3)按成分可分为天然培养基和合成培养基。1。培养基的类型和用途。不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参见教材附录)，3。无论哪种培养基，它一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等营养物质。此外，它还需要满足微生物生长所需的酸碱度和特殊营养物质的要求，如：生长因子(即细菌生长所必需但自身不能合成的化合物，如维生素和无机盐)选择培养基，添加青霉素的培养基：用于分离酵母、霉菌和其他真菌，添加高浓度

5、盐的培养基：用于分离金黄色葡萄球菌，无氮源的无氮培养基，无含碳有机物的无碳培养基，自养微生物，抗生素如青霉素等。用次黄嘌呤和胸苷培养基：分离杂交瘤细胞，并根据细胞存活所需物质的种类和数量通过人工方法合成。合成培养基的主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其他辅助物质。优势：标准化生产，相对固定的成分和内容；成本低：缺少一些成分，不能完全满足细胞体外生长的需要。合成培养基：天然培养基包括血清、血浆和组织提取物(如鸡胚和牛胚胎提取物)。优点：营养丰富，养殖效果好。缺点：来源有限；成分复杂，影响部分实验产品的提取和实验结果的分析，易发生支原体污染；天然培养基：血清含有多种蛋白质(白蛋白、球蛋

6、白、铁蛋白等)。多种金属离子；激素；促进粘连的物质，如纤连蛋白、冷球蛋白、胶原蛋白等。各种生长因子转移蛋白未知成分。人工培养基只能维持细胞存活。为了使细胞生长和繁殖，需要补充一定量的天然培养基(如血清)。液体培养基：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长、固体培养基：菌落、菌苔、半固体培养基：无动力、动态(分散)、(运动与否)、4。培养基的使用，液体培养基：富集固体培养基：纯化，富集半固体培养基：动态检测，种子保存，(2)无菌无论是倒平板，划线平板，或稀释涂布平板的操作，操作的每一步都需要“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练和标准的无菌操作才能成功培养微生物。(1)消毒定义：通过化学或物理手段杀死大多

7、数病原微生物的过程。可分为三种方式：高级消毒、中级消毒和低级消毒。2.消毒和灭菌的概念及其区别；2.灭菌的定义：通过化学或物理方法消除所有微生物，包括所有细菌繁殖体、孢子、霉菌和病毒，以达到完全无菌的过程。灭菌消毒技术是微生物相关工作中最常见、最重要的技术。1.煮沸消毒法：1005-6分钟2次。巴氏杀菌法：70-75煮沸30分钟或80煮沸15分钟3。化学消毒法3360。用75%酒精和新洁尔灭消毒皮肤；氯消毒水源4、紫外线消毒、(1)消毒方法：3。常见的消毒和灭菌方法，1。燃烧灭菌2。干热灭菌：在160-170下加热1-2小时。3.高压蒸汽灭菌：100千帕，121，15-30分钟。(2)灭菌方法

8、：最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀死所有生物，包括一些最耐热微生物的休眠体，同时基本上保持培养基的营养成分不被破坏。一些玻璃器皿也可以通过高温和干热灭菌。为了防止杂菌的污染，特别是空气中的杂菌，试管和玻璃烧瓶应该用合适的塞子塞住，通常是棉塞，也可以使用各种金属、塑料和硅胶盖，它们只允许空气通过，但空气中的其他微生物不能通过。该板由前后平板互锁而成，专门设计用于防止空气中的微生物污染。无菌技术，3。微生物实验室培养的基本操作程序，1。器械灭菌。培养基的制备。培养基的灭菌。翻转板5。微生物的接种。孵化器中的培养。菌种保藏，1。除了防止实验室培养物被其他外来微生物污染，无菌技术还有什么用？请

9、判断下列材料或器具是否需要消毒或灭菌。如有必要，请选择合适的方法。(1)培养细菌的培养基和培养皿(2)实验操作者的玻璃棒、试管、烧瓶和吸管(3)手。答：无菌技术还能有效防止操作人员被微生物感染。回答：(1)、(2)需要消毒；(3)需要消毒。3.实验操作：1。牛肉膏蛋白胨培养基的制备(用于培养细菌)；1.计算和称重；2.解散；3.酸碱度调节：酸碱度7.6；4.过滤：这个步骤可以省略。5.分装：分装过程中，注意不要让培养基粘在管口或瓶口上，以免被棉塞污染。分装三角烧瓶的数量不应超过三角烧瓶体积的一半。6.堵塞7。捆扎，操作步骤，8。灭菌：将50毫升培养基转移到带玻璃棒的三角锥瓶中，塞上棉签，用牛皮

10、纸包好，然后放入高压蒸汽灭菌锅，在100千帕和121下灭菌15 30分钟。用旧报纸包好培养皿，放入干热灭菌箱中，在160 170灭菌2h。9.倒入盘子：当培养基冷却到约50时，将平板倒在酒精灯附近。(反转板的操作见教科书。2)2天后，观察平板，它可用于接种，没有杂菌污染。10.无菌检查：将灭菌后的培养基置于37的温室中24-48小时，检查灭菌是否完成。1.培养基消毒后，需要冷却到50左右，才能用来倒平板。你如何估计培养基的温度？你可以用手触摸装有培养基的锥形瓶。当你觉得锥形瓶的温度已经下降到刚好在它变热之前，你可以倒盘子。2.为什么你需要让锥形瓶的瓶口穿过火焰？答：通过燃烧和消毒，可以防止瓶口

11、的微生物污染培养基。3.为什么平板在冷凝后要倒置？在倒盘子的过程中，如果培养基不小心溅到盖子和盘子底部之间，盘子还能用来培养微生物吗？为什么？答：盘凝结后，水滴会凝结在盘盖上，凝固的培养基表面的湿度会更高。翻板不仅能使培养基表面的水更好地挥发，还能防止盘盖上的水滴落入培养基中造成污染。答：空气中的微生物可能在盖子和盘子底部之间的培养基上繁殖，所以最好不要用这个盘子来培养微生物。2。大肠杆菌的纯化。接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法：通过在接种环表面连续划线，逐渐稀释和分散琼脂固体培养基表面聚集的细菌时钟。经过多次划线后，由一个细胞繁殖的肉眼可见的亚细胞群体可以被分离出来，这就是

12、所谓的群体。微生物接种技术、问题讨论。在划线操作结束时，您还需要烧掉接种环吗？为什么？答：操作的第一步是燃烧接种环，以避免接种环上的培养物可能被微生物污染；每次划片前灼烧接种环的目的是杀死最后一次划片后接种环上的残余菌株，使接种环上的菌株直接来自下一次划片的最后一次划片的末端，从而通过增加划片次数逐渐减少每次划片的菌株数量，从而获得菌落。标记后焚烧接种环可以及时杀灭接种环上的残留菌株，避免细菌污染环境和感染操作人员。2.燃烧接种环后，3。为什么你总是在第二次和随后的划片操作中从最后一次划片的末尾开始划片？答：划线后，线末端的细菌数量少于线开始的细菌数量。从每次划片的最后一次结束开始，随着划片次

13、数的增加，细菌数量逐渐减少，最终可以获得单个细菌繁殖的菌落。涂层板的所有操作都应在火焰附近进行。考虑到平板划线和系列稀释的无菌操作要求，考虑如何在步骤2中进行无菌操作。“无菌”应该从操作的每一个细节中得到保证。例如，酒精灯和培养皿之间的距离应适当，吸管头不应接触任何其他物体，吸管应围绕酒精灯的火焰。微生物恒温培养，微生物恒温培养，菌种保存，1。临时保存：接种于固体斜面培养基中，菌落生长后置于4冰箱中保存。2.长期保存：甘油冷冻保存法；4.项目结果的评估；(1)培养基的配制是否合格。如果未接种的培养基在培养箱中保持1 2天，没有菌落生长，这意味着培养基的制备是成功的，否则需要再次制备。(2)接种

14、操作是否符合无菌要求，如果培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，符合大肠杆菌菌落特征，接种操作符合要求；如果培养基上出现其他菌落，说明接种过程中无菌操作没有达到要求，因此有必要分析原因，重新进行实践。(3)观察并及时记录培养12小时和24小时的大肠杆菌菌落大小是否有明显差异。及时观察和记录的学生会发现这一点，并观察到其他微妙的变化。这一步的主要要求是培养学生良好的科学态度和习惯。本主题知识总结：典型案例分析，示例1。在微生物营养物的描述中，正确的是，作为碳源的物质不能同时作为氮源。所有的碳源都提供能量。除水之外的无机物只提供无机盐。无机氮源也能提供能量。分析：不同的微生物需要不同的营养，

15、因此有必要分析微生物的具体情况。选项A和B的表达式不完整。一些碳源只能是碳源，如二氧化碳；一些碳源可以同时是氮源，例如NH4HCO3；一些碳源也是能源，如葡萄糖；有些碳源既是氮源又是能源，如蛋白胨。对于选项C，除水以外的无机物具有各种类型和功能。如二氧化碳，可用作自养微生物的碳源；碳酸氢钠可作为自养微生物的碳源和无机盐；而氯化钠只能提供无机盐。对于选项D，无机氮源可以提供能量，例如，NH3可以为硝化细菌提供能量和氮源。回答：D，例子2。发酵工程中对灭菌的错误理解如下：1 .防止杂菌污染；2 .消除杂菌；3 .培养基和发酵设备的灭菌；4 .灭菌必须在接种前进行。答：分析：灭菌是微生物发酵过程中的一个重要环节。一个是谈论杀菌的目的，因为大多数用于发酵的菌株都是纯种的，而且整个发酵过程不能与其他微生物(杂菌)混