化学发光法技术概要.ppt

1、1,化学发光法技术概要 及自动化免疫分析仪 技术要点,科华生物研发中心光免小组 李 基 2010.7.14,2,化学发光法反应基本原理,抗原-抗体反应 抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。 酶促底物发光 将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测目标抗体或抗原的浓度。,3,化学发光法反应模式,一步法 （15min反应+15min显色） 夹心法 竞争法 两步法 （15min+15min反应+15min显色） 间接法 捕获法,4,一步法：夹心法,5,一步

2、法：竞争法,6,两步法：间接法,7,两步法：捕获法,8,化学发光法反应介质,固相介质：磁珠 酶标记物：碱性磷酸酶（AP） 发光底物：AMPPD,9,磁珠,基本材质：Fe3O4/Fe2O3，褐色磁性物质 直径大小：1m左右 磁珠类型： 分为氨基磁珠、羧基磁珠、苯甲磺酰基磁珠和链霉亲和素磁珠等四种磁珠 磁珠特性： 不同供应商的不同类型磁珠，亲水性不同，在溶液中的状态也不同，所需的磁吸时间也不同。磁吸时间过短，会造成丢磁；磁吸时间过长，会造成磁珠聚集，不宜分散。,问题：如何确定磁吸时间？,10,碱性磷酸酶（AP）及发光底物,RLUs值范围 板式发光范围1,000-20,000,000RLUs 管式发

3、光范围0-10,000,000RLUs 分辨率要求 对于测定不同浓度的标本，至少在试剂盒标准曲线范围内能明显区分两者的RLUs。,问题：底物空白是否需要扣除？,11,市场上主要全自动仪器机型及应用（1）,雅培公司 Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。 Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。 拜尔公司 ADVIA Centaur：基于磁分离的化学发光检测。 贝克曼公司 Access系列：基于磁分离的化学发光检测。 生物梅里埃公司 Vidas系列：管式包被的酶促荧光检测。,12,市场上主要全自动仪器机型及应用（2）,德灵公司 Dimension系列：多种技术的复合体，基于粒子的

4、酶标检测及粒子增强与非增强的免疫比浊测定等。 DPC公司 Immulite系列：基于粒子离心分离技术的化学发光检测。 强生公司 Vitros系列：管式包被的化学发光检测技术。 罗氏公司 Elecsys系列：基于磁分离的电化学发光检测技术。,13,各种全自动仪器主要技术参数,14,全自动仪器实验流程要求（1）,主要实验流程（1）一步法 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37孵育530分钟； 洗涤3-5次； 加入发光底物，5-15分钟检测。,15,全自动仪器实验流程要求（2）,主要实验流程（2）一步半法 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37孵育530分钟； 加入试剂3， 37孵育530分钟； 洗

5、涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。,16,全自动仪器实验流程要求（3）,主要实验流程（3）两步法 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37孵育530分钟； 洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37孵育530分钟； 洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。,17,全自动仪器其他要求,样品加量10l200 l，试剂加量50l200 l，随检测项目不同而有所增减。 洗涤液加量不小于350 l。 发光检测恒温为宜。PMT能达到实验所需要求。 带有内置计算浓度功能及校准功能。,18,需要解决的关键点（1）,洗涤模块： 洗涤次数？洗涤液种类？洗涤液体积？洗涤是否带超声？洗涤流速？是否预洗？加液速度？ 磁分离模块： 底吸还是侧吸？磁力大小的选择？磁分离时间？永磁还是顺磁？,19,需要解决的关键点（2）,混匀模块： 试剂架的混匀功能？混匀频率和