T细胞免疫功能检测平台的建立和应用.ppt

1、1,T细胞免疫功能检测平台的建立与临床应用,北京协和医院感染内科,2,T细胞免疫功能与感染,T细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用 T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能 T细胞免疫功能测定的临床意义,3,4,机体的免疫系统,非特异免疫 皮肤粘膜，吞噬细胞，NK细胞， 补体，正常菌群 特异性免疫 细胞免疫：CD4+ 细胞，CD8+ 细胞 体液免疫：B细胞,5,机体的免疫系统,6,CD4+细胞的免疫中枢指挥功能,7,CD4+细胞的免疫中枢指挥功能,8,CD4+细胞的产生和分群,9,纯真,纯真和记忆/效应4细胞亚群的产生,记忆,效应,凋亡,胸腺,效应,效应,效应

2、,10,纯真 CD4和记忆CD4细胞,11,12,细胞免疫功能的抗感染作用,感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能 免疫功能对疾病转归的影响： 对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可发生致命性的感染； 免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则成为慢性状态； 对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样,13,细胞免疫功能的抗感染作用,为什么？ 乙肝病毒感染：有人为乙肝病毒携带者, 也有人成为慢性乙肝病人？ HPV感染：多数人表现为无症状的HPV潜伏感染者，少数人表现为复发性HPV CMV感染: 90%的正常人隐性感染终

3、生带病毒，但免疫功能低下时可致死？,14,15,HIV感染的自然史,CD4细胞 (cell/mm3） 800 400,急性感染期,无症状期,艾滋病前期和艾滋病期,CD4,病毒载量,抗HIV 的CTL,HIV抗体,16,HIV感染者的三种临床转归,Virus,CD4,CD8 aHIV,CD4,CD4,CD8,CD8 aHIV,Virus,Virus,Standard 8 y,Fast : 4-5 y : (2%) (CCR genes, HLA B35,Slow : 10 y : (2%), CCR genes, HLA B57,17,免疫功能与机会性感染相关性,years,200,CD4 co

4、unts,白念菌,Zona,卡波济肉瘤,淋巴瘤,PCP,弓型体,CMV,MAIC,4,8,艾滋病期,HIV load,2,10,18,细胞免疫功能的抗感染作用 不重视机体免疫功能的后果,化疗药物的滥用 耐药菌的产生 二重感染的发生 进一步损害免疫功能,19,细胞免疫功能与感染,细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 细胞免疫的抗感染作用 T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能 细胞免疫功能测定的临床意义,20,细胞免疫功能与感染 免疫功能测定方法,体内： PPD试验？ 体外： 体液免疫：B细胞数量，免疫球蛋白定量 细胞免疫：T细胞亚群的数量和功能 （流式细胞仪，ELISA，ELISP

5、OT）,21,T细胞免疫功能的测定,22,A cytometer looks like an easy-to-use machine, but look inside: Its a complex laser machine!,23,PMT,PMT,PMT,PMT 4,Dichroic,Filters,Bandpass,Filters,Flow Cytometry Principle,Laser,1,2,3,4,Flow cell,24,T细胞免疫功能的测定,淋巴细胞免疫表型检测指标,26,不同年龄组正常细胞亚群的建立,27,细胞免疫功能测定方法 T细胞功能的测定,T细胞增殖功能 同位素H3掺

6、入试验 BrdU ，Ki67 CFSU T细胞毒试验（CTL）和细胞介素测定 同位素Cr51 四联体 ELISA 流式细胞仪 ELISPOT,28,ELISPOT 方法,ELISPOT方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体分 泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法。该方法可在单细胞水平检测淋 巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激下细胞因子 分泌细胞的频数。 优点：敏感-能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达 1/1000000。 特异 直观-可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分 析系统对斑点进行计数， 1 个斑点代表 1 个特异性 抗体分泌细胞或细胞因子分泌

7、细胞。,29,ELISPOT 原理,- PBMC,-刺激原,孵育16 18h或4048h,30,ELISpot 结果,阴性对照,阳性对照,样本孔,样本孔,图中的每个斑点代表一个能分泌IFN- 的抗原特异性CD4+T细胞或CTL,31,T细胞免疫功能与感染,T细胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T细胞免疫的抗感染作用 T细胞免疫功能的测定 T细胞亚群 T细胞功能 T细胞免疫功能测定的临床意义,32,T细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义,HIV感染和艾滋病 其它各种感染性疾病 -病毒感染：SARS, HBV，HCV，EBV， CMV，HFRS, HFMD -结核病，真菌感染。

8、肿瘤和化疗病人的免疫功能监测 器官移植病人的免疫监测 自身免疫病和过敏性疾病,33,细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意义,中国HIV/AIDS的免疫病理 改变和免疫重建,34,艾滋病的主要免疫病理改变,CD4+ T 细胞数的减少； CD4+ T 功能的减低; 异常的细胞免疫激活。,35,HIV感染的自然史,CD4细胞 (cell/mm3） 800 400,急性感染期,无症状期,艾滋病前期和艾滋病期,CD4,病毒载量,抗HIV 的CTL,HIV抗体,HIV/AIDS 患者淋巴细胞亚群与正常对照比较,（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示） *与正常对照

9、组相比存在显著差异P0.001。 与正常对照组相比存在显著差异P=0.021。,早中晚3组患者淋巴细胞亚群的比较,组与、组相比P0.001, 组与组相比P0.001。 *组与、两组均存在显著差异P0.001, 、组两组无显著差异。 （计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）,38,HIV/AIDS的免疫病理改变 选择性纯真T4细胞的减少,正常人,HIV感染者,AIDS病人,39,HIV/AIDS的免疫病理改变 T4细胞辅刺激信号受体的表达减少,正常人,HIV感染者,AIDS病人,40,CD28T细胞辅刺激信号受体,41,HIV/AIDS的免疫病理改变 异常的T细

10、胞免疫激活,AIDS病人,HIV感染者,正常人,42,中国艾滋病病人的免疫改变特点,艾滋病病人有选择性的纯真 T4细胞减少; CD4+CD28+ 是细胞免疫功能的标记指标; CD8+CD38+ 亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。. HIV感染当CD4+T细胞计数低于200个/mm3时: CD28表达下降较感染早中期更为严重 纯真CD4+T细胞减少的速率较感染早中期明显加快 异常的免疫激活更为严重,43,T细胞免疫功能检测在SARS诊治中的应用,44,T细胞检测对SARS诊断的意义,SARS病人CD4+细胞(98%)和 CD8+(80%)细胞同时减少； 发生在发病一周内（有些发生在胸片改变之前） T细胞检测有助于SARS的早期诊断,45,细胞免疫功能与感染 细胞免疫功能测定的临床意