支原体污染-细胞培养技术ppt课件

1、支原体污染及其防治，从门外汉的角度来看，2，支原体污染容易被忽视，1。培养基不能混浊。细胞病变轻微或不明显。由于通道和流体的变化，细微的变化也可以减轻。4.个别严重病例可导致细胞缓慢增殖，甚至从培养容器中脱落。3.支原体污染率高。国内外研究表明，细胞培养中支原体感染率高达30-60%，支原体污染已成为世界性问题！嘿。4，支原体的生物学特性，是目前发现的最小的细胞，直径约为0.13-0.18 m。无细胞壁，不能保持固定的形状，具有很大的变形能力。革兰氏染色不易着色或阴性。细胞膜含有胆固醇或其他甾醇。大多数支原体适合在碱性条件下生存(pH 7.6 8.0)，耐酸性差。对热敏感，对一般抗生素不敏感。

2、5，支原体污染的类型，口腔支原体，精氨酸支原体，猪鼻支原体，发酵支原体，pirum，laidlawi)。6、支原体污染手术室环境差，实验室设备不清洁。一些实验结果只能在支原体阳性细胞中获得，一些由肿瘤细胞制备的单克隆抗体实际上是针对被污染的支原体的抗体。其他一些其他人不能重复的科学研究成果也是由所用细胞中的支原体污染引起的。实验结果的真实性和可靠性大大降低。8。支原体污染对细胞的影响。1.影响细胞的生长状态和形态。支原体可降低培养液中支持细胞生长的营养成分含量，导致细胞生长减慢甚至停止；此外，它还会导致微管解聚和一系列细胞疾病，如细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。9，支原体污染对细胞的影响，10

3、，支原体污染对细胞的影响，2。细胞的代谢和功能受到影响。(1)培养基中的精氨酸被支原体消耗，导致细胞内蛋白质、脱氧核糖核酸、核糖核酸和核糖核酸的合成受阻。(2)支原体活性改变培养液的成分(如发酵支原体降解糖类产生的酸性物质)，影响细胞代谢。(3)支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；嘿。11，支原体污染对细胞的影响，(4)支原体吞噬细胞的核苷库染色体异常，12、13、支原体污染对细胞的影响，3、其他。此外，支原体污染还会影响细胞中某些病毒的产生，降低恶性细胞的致癌能力，并影响淋巴细胞的分化。14，支原体污染的检测方法，培养法DNA荧光染色，聚合酶链反应，相差显微镜检查，3

4、-H胸腺嘧啶掺入，酶联免疫吸附试验，免疫荧光低渗治疗地衣红染色观察，15，支原体污染的常见检测方法，1。培养方法：原理是用营养丰富的培养基直接培养待测细胞和血清中的支原体。支原体菌落就像“油煎鸡蛋”。缺点：灵敏度低，检测周期长，不能检测菌种，不适合检测所有支原体。16，支原体污染的一种常用检测方法，用荧光探针荧光染色标记细胞和支原体DNA，在紫外光(波长630 nm)激发下产生黄绿色荧光，用荧光显微镜观察支原体是否存在。17，支原体污染的常用检测方法，缺点：有时有假阴性和假阳性，18，支原体污染的常用检测方法，聚合酶链反应方法：通过扩增被检测标本中的支原体DNA，然后进行琼脂糖凝胶电泳。电泳后

5、，在紫外投影仪下观察电泳凝胶，根据标准分子量、阳性对照带和内对照带观察待测样品中是否有阳性带。19，处理支原体污染的第一个策略是，一旦细胞中出现支原体污染，应将其丢弃。尽管最近出现了抗支原体的抗生素和所谓的支原体清除剂，但这些方法只能杀死胞外支原体。除非它是不可替代或不可再生的细胞，否则没有必要去除支原体。20，支原体清除法，21，支原体清除法，新一代支原体抗生素M-疟原虫素含有两种杀菌成分，其中一种通过干扰核糖体的翻译功能来阻碍蛋白质合成。另一种成分通过干扰复制叉的形成来阻止DNA复制。能有效对抗支原体及相关细菌，无细胞壁，不影响细胞自身代谢，且处理后的细胞不会再感染支原体，是目前对抗支原体最理想的方法。22，支原体，支原体感染细胞，支原体处理细胞。23，应对支原体污染的策略2。1.引进和使用来自可靠来源的细胞，特别是著名的专业机构，如ATCC和基础医学细胞中心，它们对精子细胞质量进行一系列测试。2.预防为主的：细胞培养实验室应建立严格的管理制度，并按标准实验程序操作。