第六章：胚乳培养课件

1、第6章胚乳培养，1，PPT学习交流，胚乳培养，胚乳被植物，大部分(81%以上)是双重受精产物。雄性进入胚囊时，它发育成两个极核和一个雄性融合形成的胚乳核，因此多倍体大部分属于三倍体组织。胚乳也是胚胎生长发育的营养仓库。晚或早的情况下，胚乳被胚胎吸收并消耗。只有兰花、豆科、水夜、姜冻和植物在种子上不形成配子或很少形成配子，它们的营养存在于子叶中。2、PPT学习交换，可分为植物胚乳的发育特征，植物胚乳被子植物胚乳和裸植物胚乳两类。被子植物胚乳是双重受精的产物，由两个极核和一个雄性融合形成，属于染色体倍性上的三倍体组织。裸植物很特别，是在胚乳受精前形成的。裸子植物的胚乳是微球直接分裂发育的配子体的一

2、部分，因此是单倍体组织。3、PPT学习交流、植物胚乳的发育特性、胚乳(endosperm)根据发育早期细胞壁的形成与否可分为三种类型。核型胚乳(nucleartype)最初经历自由核阶段，大多数被子植物的胚乳属于核型胚乳。自由核阶段的长度取决于植物。4，PPT学习交流，植物胚乳的发展特性，几种植物自由核时间比较植物类型形成细胞壁时的自由核数咖啡，4核半阳人参8核16核小麦100核左右Primula，芒果，苹果，柑橘数百核，5，PPT学习交流，植物胚乳的发展特性，细胞型胚乳一次核在第一次分裂后立即形成2个子细胞，此后每次分裂时形成细胞壁。一些花瓣植物，例如香烟、芝麻、西红柿等，属于一类。6，PP

3、T学习交流，植物胚乳的发育特性，小麻生木胚乳(helobialtype)是核型和细胞型之间的中间型。第一次胚乳核首次分为细胞型，此后两个细胞内的核进行自由核分裂。7，PPT学习交流，胚乳培养研究热点，1 .胚乳细胞的全盛性。体外培养的胚乳细胞和其他体细胞或花粉一样，具有全盛期，被再生为植物。2.大多数被子植物的胚乳是3倍体。通过胚乳培养，能获得3倍体植物，获得无籽结实的植物吗？通过胚乳栽培技术，探讨农林和园艺植物3倍运动种技术改善的可能性。体外研究胚胎与胚乳的关系。8，PPT学习交流，胚乳培养中的问题，到2006年培养了约60种植物的胚乳。其中，无核树、苹果、柚、橙子、檀香山、猕猴桃、玉米、大

4、麦、黑麦、大米、土豆、枸杞、金风梨、核桃等胚乳的培养获得了再生植株。剩下的或只停留在根、叶、芽的分化或愈伤组织等。9、PPT学习交流，胚乳培养中的问题是确保再生植物的物种中，只有猕猴桃和枸杞的试管苗已经大量移植，在大田开花。这是从胚乳培养到实验室到大田生产的一大突破。胚乳培养技术不仅用于育种，而且对胚乳培养再生植物的遗传学等方面的研究也积累了丰富的资料。10、通过PPT学习交流、胚乳培养中的问题、染色体数分析，可以看出胚乳愈伤组织和胚乳植物染色体数发生了很大变化。在苹果的“金冠”和“红玉”胚乳植物中，根尖染色体数目分别为3248和2758左右，其中超过35个非全倍体细胞非常常见。几乎没有三倍体

5、细胞。大麦胚乳培养中，根尖染色体的数量可以是1至4倍，还有很多具有6，8，11，12，13条染色体的非整体配子体细胞。11，PPT学习交流，胚乳培养中的问题，排水混乱，胚乳培养中比较普遍的现象。其中，除了3倍体和多倍体外，大部分是由多种排水细胞组成的嵌合体。在三倍体胚乳中，诱导三倍体植物形成的设想增加了新的障碍。12、PPT学习交流，胚乳培养中存在的问题，但从体细胞克隆变异的角度看，胚乳再生植株后代倍性的不一致，可以产生不同种类的非全倍体和多种多倍体菌株，为多倍体育种开辟了新的道路。13、PPT学习交流，胚乳培养中的问题，理论上可以探讨倍性混乱的原因和可控性，胚乳植物形态发生方法及遗传性状的变

6、化问题，胚胎与胚乳的关系等。14，PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，1 .决定适当发育时期胚乳的发育大致可分为早期、旺盛生长期和成熟期三个阶段。形成核型胚乳核期或膜细胞期的胚乳等发育早期胚乳愈伤组织，或难以形成器官。旺盛生长时期的胚乳大部分是在最适当的时期，以前成功种植的植物大部分是在这个时期采大麦、大米、苹果、猕猴桃等梨。蓖麻、芸豆、麻风树、罗氏验证木等成熟时期的配种也能成功，这是少数。15、PPT学习交流，胚乳培养中要注意的问题，根据植物种类，胚乳生长旺盛阶段的日期也不相同。这时胚乳如下：胚分化，胚乳完全生长，达到近成熟的大小；乳白色半透明的固体，弹性好。在开始培养某植物胚乳的时候，

7、不仅要检查相关文献，还要按计划提前提取开花的材料，系统地检查这种植物胚乳的发生类型和发育时间，为下一次深层工作打下基础。16、PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，植物胚乳最合适的采访日期不同，子叶植物中百合授粉后910天，水稻授粉后57天，玉米811天，小麦811天，大麦8天，小麦杂交胚乳714天。在双子叶植物中，黄瓜是授粉的媒介，710天，苹果是授粉的媒介，30天左右，猕猴桃是80天左右，梨，枸杞是未成熟的胚乳，檀香是成熟的胚乳。17、PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，简单地说，从事情的开始就要精心培养不同发育时期的胚乳，诱导和分化最适合的胚乳提取时间之一是培养成功的保证。18、P

8、PT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，2 .当胚珠和其他组织接种配子时，配子围绕胚胎，因此如何将配子没有胚胎或包裹胚胎的主心、珠绝对分离到组织中是确保实验准确性的重要环节。否则，在胚乳外植体中混合二倍体细胞或组织增殖通常比胚乳快，因此，不仅影响胚乳的诱导和分化，还经常混合二倍体愈伤组织和胚乳愈伤组织。19、PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，为确保纯一致的胚乳外植体，接种后34天内应及时观察和检查。消除绿色(胚胎和胚胎的切碎部分，培养初期容易产生颜色的部分)或其他颜色的接种。但是，如果实验胚胎在胚乳培养中的作用，则可以将胚胎和胚乳放在同一培养基中培养，然后与胚乳分离，放在不同的位置。20，

9、PPT学习交流，研究胚胎在胚乳培养中的作用，研究胚乳培养中Bhojiwani(1966)应在胚乳培养中存在胚，胚乳培养和体胚的产生和增殖依赖胚胎生长过程中产生的代谢产物(胚胎因素)提供营养。枸杞胚乳培养中胚胎发生实验对提高胚乳愈伤组织诱导率的作用。但是在小黑麦、大米、大麦、苹果、土豆等胚乳培养中，无胚胎胚乳培养也可以产生愈伤组织或分化胚体和芽。21，PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，3 .植物激素植物激素的种类和浓度的合理使用对胚乳愈伤组织的诱导及器官建设具有决定性作用。在不放激素的培养基中，胚乳外植体很少或完全没有启动。植物胚乳的培养需要其他外源激素和合理的细胞分裂素和生长素的比例。如

10、果需要大麦胚乳愈伤组织的生产和生长，则2，4D柚胚乳植物的生产应添加高浓度(15mg/L)赤霉素。22、PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，猕猴桃胚乳培养中玉米素3mg/L与2，4D0.5mg/L一起工作时，生成胚胎发生愈伤组织，1mg/L玉米安东分化体细胞胚，玉米素3mg/L与NAA0.5mg/L因此，植物激素和浓度的差异对胚乳愈伤组织的诱导及分化方向有微妙的影响。23、PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，4 .注意光、温度、pH的影响胚乳培养的温度要求，一般在2428之间，玉米胚乳培养时25时玉米胚乳培养的最佳温度，比30时25时减少50%以上，20度减少4倍。红木和蓖麻的胚乳在2

11、426点长得最好。24，PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，对光的反应，不同植物不同。玉米胚乳适合于癌培养，蓖麻在1500lx的连续光照下生长良好。光对黑麦草胚乳愈伤组织没有明显影响。普通植物在1012h的光，1412h的黑暗条件下培养。25、PPT学习交流，胚乳培养中应注意的问题，pH的作用，在一般胚乳培养中pH值约为4.66.3，巴巴的胚乳愈伤组织在pH4.65.0中生长得最好，蓖麻的pH值为5.0，毛茛及验证木材要求5.6，玉米要求7.0。26、PPT学习交流、操作案例、1 .猕猴桃胚乳的培养(1)材料选择和培养在猕猴桃开花后约7080天，取70%的小水果酒精中的10%，用波敏溶液杀

12、菌10分钟。在灭菌状态下切下幼果，把种子放在培养皿里。在解剖镜下剥下种皮，可以看到胚乳为乳白色，有弹性，用镊子或解剖针轻轻按压胚乳的合点，白色，发育完全的胚胎从主孔末端突出。脱落的胚乳外植体是中空胶囊。27，PPT学习交换，工作实例，胚乳外植体分别接种于以下培养基：(1)MS(2)MS玉米色素1mg/L(3)MS玉米色素3mg/L(4)MS玉米色素3mg约1520天内，25组含有玉米素和萘普生的胚乳外植体表面出现瘤状突起，变为绿色，展开成树叶状。结果叶片材料转化为(2)培养基，可分化不定芽。每组产生愈伤组织，接种后约15天后，转移至(2)培养基。其中，(6)，(7)组的愈伤组织在转移后15天内

13、可以在愈伤组织中分化胚胎体，发育成完整的植物。仅包含2，4D的(8)组没有器官分化。29，PPT学习交换，操作案例，2 .枸杞胚乳培养(1)材料的选择和培养：收集宁夏枸杞健壮植物变色期水果，在70%的酒精中对水果消毒几秒钟，用0.1%的氯化汞溶液冲洗6分钟，用无菌水冲洗3次。在培养皿中切水果，用镊子夹出种子，从解剖镜中剥下种皮，取出胚胎，将胚珠接种到MS2，4D2.0mg/L Kt0.5mg/L。MS2，4D0.5mg/L蔗糖浓度为5%，培养温度26度，照明时间10小时。30，PPT学习交换，(2)愈伤组织诱导和植物分化：在培养基上培养1周，愈伤组织发生在胚乳外植体上。饲养1520天，愈伤组织

14、大小为蚕豆，黄色宽松，不易用镊子夹住。培养30天后统计，培养基(1)、(2)胚乳愈伤组织诱导率分别为37.3%、23.1%。calles以31、PPT学习通信、工作案例、A.MS 6-BA0.5mg/L等4种培养基进行传递。b . MS 6-ba 0.5mg/L NAA 0.1mg/L；c . ms 6-ba 0.5mg/l NAA 0.1mg/l ga2 mg/l；d . ms 6-ba 0.5mg/l NAA 0.1mg/l ch 400mg/l；蔗糖共2%。32，PPT学习交换，工作案例，转移10天后，a，b，c三组体内愈伤组织大，d组愈伤组织没有明显变化。但是培养15天后，这4种培养基的愈伤组织都分化为芽点，大约20天后芽分化，形成明显的茎、叶结构、根发达的植物，有些发育为幼苗。33，PPT学习交流，操作案例，培养1