兰花组织培养

1、兰花的组织培养，刘迪，兰花(学名： Orchidaceae )是兰科，单子叶、多年生草本植物，也叫胡姬花。 古今名人对此评价很高，被称为花中君子，是中国十大名花之一。 兰花品种很多，据不完全统计，世界上有2万多种品种，其中有名的有蝶兰、春兰、寒兰、玫瑰等。 花语：淡泊、高雅、美丽、清洁、贤德、一、兰无性快速繁殖二、快速繁殖的影响因素三、兰脱毒株的鉴定，一、兰无性快速繁殖原球茎的发生体系是兰唯一有效的大规模无性繁殖方法。 这个方法是1960年法国学者G.Morel开始的，促进了兰花工业的形成，取得了巨大的经济效果。 (1)培养程序外植体使形成原球茎的原球茎大量增殖分化，培养扎根于小株的壮苗的温室

2、栽培的室外栽培(2)培养成可以采集兰花茎尖、叶、花器官、种子等进行处理的外植体，诱导再生株。 茎尖是细胞分裂最活跃的部分，是比较容易诱导，培养成功率高的部位。 在兰花茎尖上培养时，首先从生长结实的株上取10cm茎尖，去除苞叶，用加了适量洗涤剂的自来水洗涤，用超清洁的桌子用75醇消毒数秒，用无菌水洗45次，再用5浮游白粉消毒约10min，或用45min、无菌水洗45 在叶的培养中，应该选择带有嫩叶的花梗。 接种和培养1 .接种：茎尖，用体视显微镜，用镊子剥去消毒茎的幼叶，露出生长点后，用解剖刀取出0.50.8mm大小的芽(尽量缩小，脱毒) 叶子是将从茎上切下的幼叶和花梗的幼叶一起无菌地切成0.3

3、0.5小片，接种到培养基上。 2 .培养基：诱导兰茎前端形成原球茎的培养基，是诱导作为MS或B50.51.0mg/LNAA1.0mg/L6-BA10椰汁的叶形成原球茎的培养基： KyotoNAA0.1g/mL6-BA1.0mg/L肌醇mL维生素B10.05mg/L腺嘌呤20mg/L蔗糖2尿素0.2元球茎改良生成芽的培养基成分：应降低无机盐浓度，一般采用1/31/2MS或3/44/5B5，其馀成分与诱导元球茎的培养基相同。 3 .原球茎诱导培养茎尖的生长点或叶接种原球茎诱导培养基。 茎尖经过23周的培养，生长点开始变绿。 茎叶首先开始生长，之后生长点组织的基部开始肥大，形成原球茎，约30天后形成

4、原球茎。 (培养温度一般不到23。 光强度15002000lx ) (培养基的选择、褐变)4.原球茎增殖培养形成的原球茎不断分割，进行增殖培养，加速增殖，直到得到必要的数量。 用于传代培养的培养基与诱导培养相同，可以采用固体培养或液体培养，培养条件也相同。 原球茎生长大致有4种：容易增殖的类型原球茎生长缓慢，但容易分化成苗。 分割后的原球茎在接种后停止生长，传送后不枯死，几周内褐变后，形成了小的原球茎。 容易增殖的类型可以缩短培养周期，增加世代交替次数，加速增殖，在液体振动培养中形成大量新的生长点，分割接种到固体或液体的培养基上，进行增殖。 对于原球茎生长缓慢的类型，应该改变培养基的配方，特别

5、是降低离子浓度。 其他种类的材料必须扔掉。 在原球茎增殖的初期，分割后容易产生褐色物质，第一次分割的原球茎必须在离子浓度低的培养基中培养。 5 .通过苗的分化培养增殖的原球茎不一定能顺利地分化成苗，品种间有很大差异。 兰科植物很难受到生长调节物质的影响。 因此，不能单纯通过改变激素浓度的方法诱导再生植物。 兰属植物一般将原球茎转移到离子浓度低的培养基中，诱导培养培养基组成，加入椰汁等天然提取物质，原球茎很快就再生植物。6、幼苗生长培养大的兰花个体容易移植，新形成的幼苗移动到大的培养容器中，必须生长到一定大小才能移植。 一般可以将1cm的苗移植到壮苗培养基中培养到10cm高，进行移植。 在这个阶

6、段，苗的生长代谢比较稳定，培养基成分简单，但培养基离子浓度不能太高。 不那样的话，就会生成苗的老苗和畸形苗。 7 .苗从培养瓶中取出叶34片、根310cm高的组培苗，清洗根的培养基，移植到泥炭和蛭石中，保持弱光，注意保湿，定期浇水施肥，促进生长。 (一)用于培养基柳叶刀培养的培养基有10多种。 基本培养基的选择需要考虑的重要问题是离子浓度，一般适用低离子浓度，不同培养阶段要求的离子浓度不同。 培养基中可以添加生长调节物质、生物活性物质、氨基酸、天然提取物等。 (二)材料防褐变是柳叶刀培养成功的关键，褐变的主要原因是材料从伤口分泌酚类化合物，酚类物质在多酚氧化酶的作用下变为醌类物质引起褐变，醌类

7、物质在转氨酶的作用下与培养材料组织中的蛋白质(3)原球茎的苗分化兰花原代培养出的原球茎一般能分化成苗，但某些种不分化成苗或产生畸形。 不仅品种不同，培养条件也很重要，可以在培养基中添加香蕉汁、椰汁等植物组织提取物。 添加一定浓度的IAA、NAA，或降低培养基的离子浓度进行调整。 (四)变异兰在组织培养中的变异主要与高浓度激素、长期继代培养、主芽部位和大小、自芽变化等有关。 前三者在培养中可以加以改进和防止，后者是不可避免的。 因此，要慎重选择外植体、培养基、培养条件。 在继承和扩大的过程中必须适时淘汰变异材料。 例如，利用核酸分子检测技术检测再生株，迅速检测其变异状况。三、兰脱毒株的鉴定目前国内外检测兰病毒的方法主要采用生物学检测、电镜检测、血清学检测和分子生物学检测等。 例如，三抗三明治酶免疫吸附法(threantibodyssandwih-El Issa-elis isa )中，包括硅烷叶病毒(CymMV )、双抗三明治酶免疫吸附法(dou