第二章 中药制剂的鉴别

1、中药制剂的鉴别,中药制剂教研室,问题,鉴别的目的？ 酒剂或酊剂萃取前挥干乙醇的目的？,大纲要求,熟悉性状鉴别的内容 熟悉显微鉴别的内容 熟悉理化鉴别的方法 掌握理化鉴别中薄层色谱法,中药制剂的鉴别,定义 利用一定的方法来确定中药制剂中原料药的组成，从而判断该制剂的真伪。,质变,内容 性状鉴别 显微鉴别 理化鉴别,中药制剂的鉴别,定义 中药制剂的性状是指除去包装后的性状，包括大小、色泽、表面特征、质地、气味等方面。 性状与投料的原料质量及工艺有关 初步反映中药制剂质量状况,中药制剂的鉴别,性状鉴别,内容 颜色：与所含成分、制备工艺有关 复方制剂考虑到贮存期间颜色会变深 形态：不同剂型，形态不一

2、形状：与设备模具有关（栓剂） 气：香、芳香、清香、腥、臭、特异等 不明显用气微，香气浓厚时用芳香浓郁 味：甜、酸、苦、涩、辛、凉、咸、辣、麻等,中药制剂的鉴别,性状鉴别,注意 1.制剂的性状指成品的颜色、形态、气味等 2.有包衣的丸剂、片剂应描述除去包衣后的片心、丸心的颜色及气味 3.硬胶囊应写明除去胶囊后内容物的性状 4.制剂色泽有两种色调组合，描写时以后者为主，如棕红色,中药制剂的鉴别,性状鉴别,各种剂型的性状描述,中药制剂的鉴别,性状鉴别,物理常数测定 折光率、旋光度、比旋度、凝点、 熔点、相对密度 定性鉴别的一种手段,中药制剂的鉴别,性状鉴别,局限性 中药种类繁多,品种复杂。中成药而言

3、，包括“丸、散、膏、丹、片”等多种剂型，仅靠传统的性状鉴定方法不能识别出其中的方药组成和药材的真伪。,中药制剂的鉴别,性状鉴别,丸散膏丹、神仙难辨,发展 我国著名生药学家徐国钧教授，开创了中药制剂显微鉴定，从实际上解决了中药材粉末和含有中药原粉的中成药制剂的真伪鉴定问题。在我国历版药典中均有很大部分的中成药采用显微方法鉴定。,中药制剂的鉴别,性状鉴别,定义 利用显微镜来观察中药制剂中原料药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。,中药制剂的鉴别,显微鉴别,使用范围 以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末的制剂，原药材的显微特征仍保留。（有那些剂型？） 蛇胆川贝散，

4、川贝母仅用淀粉粒作为指标 牛黄解毒片：大黄用草酸钙簇晶最为鉴别特征,中药制剂的鉴别,显微鉴别,制片方法 显微鉴定，制作良好的切片或标准片是关键。把切片或粉末标准片用适当的试液进行处理和封藏，试液的选择必须具有合理性。,中药制剂的鉴别,显微鉴别,制片方法试液的选择 1.水或稀甘油：细胞壁颜色及淀粉粒、油滴、树脂 2.水合氯醛：组织构造和细胞形状及叶片、花和花粉粒，尤其适于观察草酸钙结晶 3. 5%氢氧化钾液：可溶解糊粉粒、淀粉粒及蛋白质，使细胞壁膨胀，从而增强透明度 4.氯化碱液：试剂可漂白切片及除去叶绿素 5. 1:1乙醚乙醇液：用于脱去种子类药材切片中的脂类及挥发油类成分,中药制剂的鉴别,显

5、微鉴别,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,散剂、胶囊剂： 粉末+载玻片+适当的试液 显微观察,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,片剂：正中切开，由切开面由外至内刮去少量样品，装片 粉末+载玻片+适当的试液 显微观察,（糖衣片）,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,丸剂、颗粒剂：研成粉末，装片 粉末+载玻片+适当的试液 显微观察,蜜丸：正中切开，由切开面由外至内刮去少量样品，装片,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,蜜丸除蜜方法 1. 5%氢氧化钾液,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,蜜丸除蜜方法 2.硝铬酸法：,适量蜜丸+试管中+ 硝铬酸液 放置 玻璃棒挤压能离散为止，倾出酸液+水洗涤，

6、取出少量+试液处理 观察,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,蜜丸除蜜方法 3.氯酸钾法：,适量蜜丸+试管中+ 硝酸溶液及氯酸钾少量 缓缓加热至产生的气泡渐少时+氯酸钾少量 玻璃棒挤压能离散为止，倾出酸液+水洗涤，取出少量+试液处理 观察,制片方法,中药制剂的鉴别,显微鉴别,蜜丸除蜜方法 4.离心分离法：,蜜丸切碎+水洗涤 离心管中离心分离沉淀（多次）取出少量+试液处理 观察,例,中药制剂的鉴别,显微鉴别,例,中药制剂的鉴别,显微鉴别,山药,茯苓,熟地黄,牡丹皮,山茱萸,泽泻,局限性 1.药材粉末特征间的交叉干扰。 2.经过提取的药材，其化学成分已被浸出，但仍然保持着原来的细胞形态特征，所以仅

7、通过显微观察不能完全解决内在的质量问题。,中药制剂的鉴别,显微鉴别,局限性 3.一种药材具有多种植物来源，通常粉末的特征各不相同 4.药材在处方中所占的比例小(如贵重药、毒剧药)专属性特征出现的几率更小；有的粉末粒度过细(如水飞法制得的矿物药粉末)，使特征变得不明显。,中药制剂的鉴别,显微鉴别,定义 利用物理的、化学的或物理化学的方法对制剂中所含的化学成分进行定性鉴别，从而判断制剂的真伪。 方法 化学反应法 升华法 荧光法 光谱法 色谱法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,一般化学反应法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,中药制剂化学成分的性质,+,合适的提取溶剂,提取待检测成分 排除其他成分干扰,一般化学反

8、应法注意事项 1.避免附加成分的干扰：如注射剂、颗粒剂及糖浆剂 2. 慎重使用专属性不好的分析反应：如泡沫反应、三氯化铁显色反应 3.对样品进行分离、精制：除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性 4.采用阴性及阳性对照方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证：防止出现假阳性,中药制剂的鉴别,理化鉴别,一般化学反应法例 牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应 取本品6 片(包衣者除去包衣)，研细，加乙醇1Oml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应 (1) 取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。 (2) 另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，即显红色，再加30%过氧化氢溶液，加热，

9、红色不消失，加酸或酸性时，则红色变为黄色。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,升华法 定义：将具有升华性质的成分，在一定的温度下从制剂中分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴定的依据。 制剂中若有2种以上的药味都含有升华物，升华的温度不同，可控制加热的温度分段收集升华物，分别进行鉴定。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,升华法 操作方法： 取金属片安放在有圆孔(直径约2cm)的石棉板上，在金属片上放一小金属圈(内径约1.5cm，高约0.8cm)，对准石棉板上的圆孔，圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层，圈上覆盖载玻片，在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去火待冷，载玻片上有升华物凝

10、集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,升华法 例 牛黄解毒丸微量升华鉴别 取本品进行微量升华，先得白色升华物后，继得黄色升华物。将升华物分别置显微镜下,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法 荧光法 可见紫外分光光度法 红外分光光度法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法荧光法 有些中药材中含有能产生荧光的化学成分：在可见光 or 紫外光照射下发出荧光，有的须经试剂处理后发出荧光 含有这类药材的中药制剂:荧光法鉴别 操作方法:取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下(365nm or 254nm)观察，有时则是加一定的试剂后再进行观

11、察。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法荧光法 例：板蓝根冲剂的荧光鉴别 取本品0.5g，加水5ml使溶解，静置，取上清液点于滤纸上，晾干，置紫外光灯(365nm)下观察，显蓝紫色。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法可见紫外分光光度法 中药材有些化学成分在可见紫外光区有选择性吸收，显示特征吸收光谱。不同的药材所含的成分不同，在一定条件下吸收光谱的特征可用于鉴别药材，因此该法也可用于中药制剂的鉴别。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法可见紫外分光光度法 中药制剂成分复杂，具吸收的加和性，样品不纯化，所得光谱为混合光谱，专属性差。 样品纯化后测定吸收光谱，常见方法： 1.规定吸收波长法 2.对照品对比

12、法 3.规定吸收波长和吸收度法 4.规定吸收波长和吸收度比值法 5.多溶剂光谱法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法可见紫外分光光度法 1.规定吸收波长法：样品经适当处理后，测定吸收光谱，在一定波长处有最大吸收。 如复方丹参滴丸中丹参的鉴别： 取本品15丸，研细，分次加水少量，搅拌、滤过、 滤液移至1OOml量瓶中，并加水至刻度， 取溶液2ml，加水至25ml，照分光光度法测定， 在283nm 的波长处有最大吸收。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,复方丹参片紫外光谱图,283nm,光谱法可见紫外分光光度法 2.对照品对比法：取对照品或对照药材及供试品经处理后，制成对照品及供试品溶液，分别测定吸收光谱，

13、比较二者吸收光谱的一致性。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法可见紫外分光光度法 2.对照品对比法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,例：大山馇丸的紫外光谱鉴定 供试液的制备：取大楂丸2g，加水30ml，研磨均匀，滤过，滤液加水至30ml，备用。 山楂对照液的制备：取山楂对照药材粉末1g，加水浸渍1小时，滤过，滤液备用。 紫外光谱的测定：分别取供试液、对照液各1ml，加水稀释至适当浓度，以水作空白，置1cm石英吸收池中，于200400nm范围内测定紫外吸收光谱。样品与对照品在2802nm处皆有最大吸收，在2544nm处皆有最小吸收。,光谱法可见紫外分光光度法 3.规定吸收波长和吸收度法：取样品经处理后，

14、测定吸收光谱，在吸收光谱的规定波长下，应有若干个吸收峰，并有相应的吸收度值。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法可见紫外分光光度法 4.规定吸收波长和吸收度比值法：样品在一定波长下应产生相应的吸收峰，并且吸收度与对照峰吸收度比值应在一定的范围至内。需有对照品或参照物。,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法红外分光光度法 广泛用于合成药的鉴别 于中药制剂的鉴别还存在不少困难： 成分复杂，组分吸收峰叠加，专属性重现性不理想 方法：固体供试品采用溴化钾压片法 液体供试品采用夹片法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法红外分光光度法 对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息 主要成分的质和量大致相同，而

15、且基本恒定，所得红外光谱也呈现很好的相似性，可重复，因而可作真伪鉴别 依据：I 不太复杂的混合体系，图谱有特征性 II 统一分离提取方法，图谱特征强重复性好,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法红外分光光度法 对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息 例1： 用红外光谱法对不同产地的珍珠、蟾蜍、蛤蟆油、冬虫夏草和五灵脂等中药进行真伪优劣鉴别，结果表明，同一品种不同产地的样品，其红外光谱的一致性很好，重现性也好,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法红外分光光度法 对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息 例2： 对冬虫夏草及其伪品地蚕、五灵脂及其伪品泯灵脂、熊胆及其伪品黄柏浸膏加糖、麝香

16、和掺假麝香等进行红外光谱鉴别，正品与伪品的光谱有明显不同,中药制剂的鉴别,理化鉴别,光谱法红外分光光度法 对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息 例3：熊胆、牛胆、猪胆的红外图谱比较,中药制剂的鉴别,理化鉴别,在特征区和指纹区三者则有明显的差别,光谱法红外分光光度法 对于中药材的真伪鉴别及掺杂检查可提供有价值的信息 例3：夏天无与延胡索,中药制剂的鉴别,理化鉴别,夏天无提取物与延胡索提取物的红外光谱图,色谱法 纸色谱 TLC法 GC法 HPLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,色谱法纸色谱法 载体：纸 固定相：纸上所含水分或其他物质 展开剂 供试品、对照品、对照药材,中药制剂的鉴别,理化

17、鉴别,色谱法纸色谱法 例：,中药制剂的鉴别,理化鉴别,化癓回生片中益母草的纸色谱定性鉴别 供试品溶液的制备：取本片20片，研细，加80%乙醇5Oml，加流回流1 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加1%盐酸溶液5ml使溶解，滤过，滤液滴加碳酸钠试液调节PH至8.0，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。 益母草对照药材溶液的制备：按供试品制备方法。 点样量：2Ol ；薄层扳：层析滤纸 展开剂：正丁醇-醋酸-水(4：1：1)；显色：喷以稀碘化铋钾试液 结果鉴定：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,定义： 将适宜的吸附剂

18、或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法在同板上所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪扫描，用于中药制剂的鉴定,中药制剂的鉴别,理化鉴别,供试品溶液的制备 薄层板的制备 点样 展开 显色与检视,色谱法TLC法,操作步骤,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,供试品溶液的制备： 单一溶剂萃取法：采用单一溶剂萃取出样品中待测成分，舍 弃其他成分,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,供试品溶液的制备： 分段萃取法 液液萃取法 固液萃取法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料：,色谱法TLC法,薄层板 涂布器 点样器材 层析缸 显色与检测仪器

19、,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料薄层板 手工自制板： 玻璃：12mm优质平板玻璃 光洁、平整 洗净至不挂水珠，晾干 预制板：普通薄层板和高效薄层板,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料薄层板 载体：硅胶G（石膏作粘合剂） 硅胶GF254（荧光剂） 硅胶H 硅胶HF254（荧光剂） 聚酰胺薄膜（含有酚羟基的化合物，特别是黄酮）,色谱法TLC法,粘合剂：羧甲级纤维素钠水溶液（0.20.5）,C18键合相； 氨基键合相薄层板 氰基键合相； 二醇基键合相薄层板,中药制剂的鉴别,理化鉴别,操作方法薄层板的制备 市售薄层板：临用前，110活化30min 聚酰胺薄膜不用

20、活化 自制薄层板 1份固定相+3份水（or含粘合剂的水溶液），在研钵中向同一方向研磨混匀，驱除气泡，铺板（0.20.3mm). 置水平台上室温晾干，110 活化30min，置有干燥剂的干燥箱中备用。 使用前检验均匀度、麻点、气泡、有无污染,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料涂布器 手工、半自动、全自动 固定厚度或可调节厚度,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料点样器材 定量点样毛细管：0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10l 微量注射器（针尖平头） 半自动、自动点样器,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,操作方法点样 方法：

21、垂直方向，成圆点状or窄细的条带状（增大上样量）,注意：点样时勿损伤薄层表面,中药制剂的鉴别,理化鉴别,操作方法展开 展开剂的制备：新鲜配制 展开：点样后的薄层板放入加有展开剂的层析缸中，密闭，一般上行展开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规定展距后立即将薄层板取出，晾干，以备检测。 展距：一般815cm，高效板58cm,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,操作方法展开 特殊情况处理 若需要展开剂或其他溶剂的蒸汽平衡者可在双槽展开箱的一侧加适量的溶剂 若需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润的滤纸使展开箱易于被蒸汽平衡 若薄层板需同时预平衡者，应将薄

22、层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此槽中展开,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料显色与检测仪器,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,TLC法使用的材料显色与检测仪器,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,记录 照相 扫描图谱 描画,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,1.样品的预处理及供试液的制备 2.薄层色谱的点样技术 3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 4.空气温度、湿度的影响,色谱法TLC法,主要影响因素,中药制剂的鉴别,理化鉴别,1. 样品的预处理及供试液的制备： 制备样品供试液的溶剂要求，溶解度不宜太大，粘度不易太高，沸点适中 供试液净化处理相当重要 溶解样品溶剂沸点不宜太高（如正丁醇）or太低（如乙醚）,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,2. 薄层色谱的点样技术： 点样量不宜过大，最好控制在10l以下 不要破坏薄层板,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,理化鉴别,3.吸附剂的活性与相对适度的影响 吸附剂的活性取决于实验室环境的相对湿度 控制展开时的相对湿度： 在双槽展开箱的一侧用一定浓度的硫酸溶液，密闭放置一定时间，再加入展开剂于另一侧展开 将点样后的薄层板放入内有一定浓度的硫酸溶液或其他调节相对湿度的无机盐水溶液的容器中，密闭放置一定时间后，取出，立即在箱中展开,记录试验湿度,色谱法TLC法,中药制剂的鉴别,