KJ02食品卫生微生物学检验副溶血性弧菌检验

1、1,内蒙古食品药品检验所 张彦斌,2,1、概述 2、范围 3、生物学特性（菌体形态学特征、培养特性、抵抗力） 4、检验程序 5、培养基和试剂,3,1、概述 副溶血性弧菌（ Vibrio parahaemolyticus ）是分布极广的海洋细菌，为引起食物中毒重要的病原细菌之一，尤其是在夏秋季节的沿海地区，经常发生由于食用带有大量副溶血性弧菌的海产食品，引起爆发性食物中毒。 历史：副溶血性弧菌食物中毒于1950年在日本首发，副溶血性弧菌（V. parahemolyticus）于我国大陆沿海地区食物中毒中最常见的一种病原菌。,4,中毒原因:烹调时未烧熟、煮、透,或熟制品污染后未再彻 底加热。 中毒

2、食品:副溶血性弧菌食物中毒多发生在海产品大量上 市时。中毒食品主要是海产品,其次为咸菜、 熟肉类、禽肉、禽蛋类,约有半数为腌制品。,5,2、范围,本标准规定了副溶血性弧菌检验方法。 本标准适用于动物性水产干制品、腌醉制生食动物性水 产品、即食藻类食品、鱼糜制品等水产食品和水产调味 品以及食物中毒样品中副溶血性弧菌的检验。,6,3、生物学特性 1）菌体形态学特征 2）培养特性 3）抵抗力 4）致病性 1）菌体形态学特征 本菌为G-，可两端浓染 ，多形态，无芽孢，单端单鞭毛，有嗜盐特性，在30-37最适温度时增长较快，一般冬季不易检出。,多形态： 弧状、逗点状 球状、丝状、 杆状、棒状等。,7,2

3、）培养特性 嗜盐：VP 在含氯化钠5 (20-30最适) gL的培养基 上生长，无盐和110g L以上不生长。 生长温度：最适为37，4 不生长 pH: 最适pH为7.4-8.0 需氧性:需氧性很强， 厌氧条件下生长缓慢,8,3）抵抗力 敏感：淡水等无盐环境 不耐热 对酸敏感，在2冰醋酸或食醋中立即死亡， 对氯、碳酸、来苏水等一般化学消毒剂敏感： 对磺胺噻唑、氯霉素、合霉素敏感。 耐受：耐高浓度NaCl海水，盐渍酱菜中存活时间较长； 耐低温的抵抗力较强 耐青霉素、磺胺嘧啶。,9,4、检验程序,25g样品+3%氯化钠碱性蛋白胨水,TCBS平板,36 1 18h,1、镜 检 3、三糖铁试验 2、氧

4、化酶试验 4、嗜盐试验,报告结果,定性 检测,36 1 24h,36 1 24h,36 1 6h,科玛嘉弧菌平板,生化实验 API 20 E,10,5、培养基和试剂 5.1 3%氯化钠碱性蛋白胨水： 增菌用，高盐 5.2 TCBS琼脂： 5.3 科玛嘉琼脂：,分离培养用,11,TCBS上的副溶血弧菌菌,科玛嘉上的副溶血弧菌菌落,12,5.4 ：初步鉴定 3.5氯化钠三糖铁琼脂：底层 变黄，斜面不变色，有动力， 不产生硫化氢. 镜检形态：本菌为G-，可两端 浓染 ，多形态，无芽孢。 氧化酶试验：VP为氧化酶阳性。 嗜盐性试验：0%不生长 7%旺盛生长 10%不生长,13,5.5 ONPG试验：

5、5.6 甘露醇试验： 5.7 赖氨酸试验： 5.8 MR-VP试验：,生化试验,14,结果 样品经过增菌培养、分离培养后，根据形态观察、生化试验的结果判断是否发现副溶血性弧菌并报告。,金黄色葡萄球菌检测,生物学特性-菌体形态及培养特征,革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群； 无芽孢，不运动； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好。,生物学特性-菌体形态及培养特征,大多数菌株能生长在6.5-46之间（最适温度30-37）能在pH4.2-9.3之间生长（最适pH为7.0-7.5）； 大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长

6、的条件，而且在单个菌株中可能也有变化。,生物学特性-菌体形态及培养特征,好氧生长的细胞产生接触酶； 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白； 所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。,致病性,金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，分、四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 d.脱氧核糖核

7、酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种。,分布,在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。 传播媒介为被该菌污染的食品，主要为淀粉类(如剩饭、米面、粥等)、牛乳及乳制品，以及鱼、肉、蛋类等。被污染的食物在室温20-22放置5小时以上时，病菌大量繁殖，并产生肠毒素。,流行病学,季节分布，

8、多见于春夏季； 中毒食品种类多，多见于奶、肉、蛋、鱼及其制品。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。,耐受力,几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金黄色葡萄球菌都有严重的破坏作用 肠毒素可耐受100 30分钟不被破坏。 对于加工过的食品或食品加工设备而言，此菌或其肠毒素的存在通常作为卫生条件差的一种指标。,25g样品+7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤,血平板,36 1 24h,镜 检 营养肉汤,血浆凝固酶 实验,报告结果,定性 检测,36 1 24h,36 1 24h,36 1 6h,BP平板,检测步骤-增菌,利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15

9、%的氯化钠），用7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤增菌。,检测步骤-分离,血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板 上产生明显的溶血环。 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起， 圆形，不透明， 表面光滑， 有溶血圈。,检测步骤-分离,BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。,检测步骤-分离,在BP平板上其典型菌落为：圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑玉色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶