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文档简介

1、抗 酸 染 色acid fast stain,一、实验目的： 1、掌握抗酸染色的操作方法和结果观察。 2、熟悉抗酸染色的原理。,分枝杆菌的细胞壁内含大量脂质（主要是分枝菌酸）包围在肽聚糖的外面，一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。,二、实验原理：,三、实验材料： 细菌：卡介苗 （bacillus calmette-guerin， bcg） 染液：石炭酸

2、复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液 其它：微量移液器、接种环、酒精灯和载玻片等,涂片,干燥,固定,染色,水洗、吸干,镜检,染色一般程序,制备涂片标本染色,四、实验方法： 1、细菌涂片标本的制备(和革兰氏染色相同) 涂片 干燥 固定 2、染 色,1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30秒1分，用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1分，用水冲洗后用吸水纸吸干。,3、油镜观察,未染色 初染后 脱色后 复染后,初染,脱色,复染,镜检,五、实验结果：,结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无序，偶可见呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。,六、注意事项：,1、无菌操作 2、涂片厚度要适中 3、染色时间要充分 4、脱色是关键步骤，要彻底 5、初染加热勿沸腾勿

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